黄芪对慢性宫内缺氧子代兔非酒精性脂肪肝的保护作用

张路云，崔闽鲁

（1.浙江省仙居中医院，浙江台州317300； 2.福建医科大学附属二院，福建泉州362000）

黄芪对慢性宫内缺氧子代兔非酒精性脂肪肝的保护作用

张路云1，崔闽鲁2

（1.浙江省仙居中医院，浙江台州317300； 2.福建医科大学附属二院，福建泉州362000）

目的：观察黄芪对于慢性宫内缺氧诱导的子代兔非酒精性脂肪肝的肝功能、血脂及病理的影响。方法：将健康孕兔随机分为对照组、模型组、黄芪组，建立宫内缺氧模型，黄芪组给予黄芪注射液干预，对照组、模型组耳缘静脉注射生理盐水。待分娩后，检测6月龄子代雄兔肝功能、血脂及肝组织病理改变。结果：与模型组比较，黄芪组脂肪变性程度显著减轻（P＜0.01）；血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL－C）降低，高密度脂蛋白（HDL－C）增高（P＜0.01）。结论：黄芪能够在一定程度上减轻慢性宫内缺氧引起的子代兔肝细胞脂肪变性。

脂肪肝；慢性宫内缺氧；黄芪；保护作用

近年来发现非酒精性脂肪肝（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）的发生与遗传－环境－代谢应激密切相关［1］。宫内缺氧会引起子代在宫内生长过程中的适应性应激反应，导致遗传基因改变和成年后代谢性疾病的发生风险增加［2］。已有研究表明，宫内缺氧与子代大鼠成年后NAFLD易感性增加有关［3］。黄芪主要成分有黄芪多糖、皂苷和异黄酮类，能改善机体缺血缺氧状态，增强细胞代谢，抑制脂质过氧化，提高缺氧时胎盘血流量，促胰岛素生成，广泛应用于缺血缺氧性疾病［4－6］。本实验旨在通过动物模型观察慢性宫内缺氧是否与子代兔NAFLD的发生有关联以及黄芪能否对子代兔发生的肝细胞脂肪变性损伤起到保护作用。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 24只孕龄10 d的健康孕兔，体质量（3.2+0.3）kg（上海斯莱克实验动物有限公司，合格证号2007001101678）。

1.1.2 试剂与仪器 ALT、AST、TC、TG 、LDL－C、HDL－C检测试剂盒购于上海科欣生物技术研究所。黄芪注射液（成都地奥泓制药厂川卫药准字）。S－450型氧气监测仪（美国IST－AIM公司）。由福建省晋江东石东埕制氧厂提供浓度＞99%的压缩氧气、氮气。

1.2 实验方法

1.2.1 分组与给药 将24只孕兔按随机数字表法随机分为对照组、模型组、黄芪组，每组8只［7］。模型组和黄芪组孕兔均放于缺氧舱内［氧浓度（12±0.1）%］，4 h/d，对照组孕兔放于等体积舱内（O2含量21%），4 h/d。模型组和对照组给予耳缘静脉注射生理盐水约1.5 mL/d，黄芪组给予耳缘静脉注射黄芪注射液［1 g/（kg·d）］约1.5 mL/d，每日1次，直至分娩。子代兔喂养到6月末（即成年期），随机每组每只孕兔的子代中取雄兔1只，按照上述同样方法分组。

1.2.2 检测指标 ①按照试剂说明书测定子代兔血清 ALT、AST、TC、TG 、LDL－C 、HDL－C 水平。②3%戊巴比妥耳缘静脉麻醉，打空气针处死子代兔，取直径约2 cm的肝组织，常规脱水、石蜡包埋，苏木素/伊红（HE）染色，光镜下观察肝组织脂肪变性程度。

1.3 统计学方法

应用SPSS 13.0统计软件处理，计量资料均以均数±标准差（±s）表示，采用单因素方差分析；等级资料采用秩和检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 黄芪对子代兔肝功能、血脂的影响

结果见表1、表2。

表1 子代兔肝功能参数 （U/L）

表1 子代兔肝功能参数 （U/L）

组别 n ALT AST对照组 8 48.50±4.07 67.44±6.42模型组 8 49.24±3.23 70.88±2.53黄芪组 8 48.99±2.78 68.25±3.37

表2 黄芪对子代兔血脂的改善情况 （mmol/L）

表2 黄芪对子代兔血脂的改善情况 （mmol/L）

注：与对照组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.01

组别 n TG TC HDL－C LDL－C对照组 8 0.94±0.14 2.78±0.20 1.25±0.13 1.01±0.25模型组 8 1.06±0.111） 3.41±0.111） 0.69±0.111） 10.25±2.611）黄芪组 8 0.94±0.081）2） 2.95±0.292） 0.98±0.061）2） 2.05±0.331）2）

由表1可以看出，3组之间，两两比较，肝功能ALT、AST 水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）。由表2可以看出，模型组及黄芪组TG、TC、LDL－C均较对照组高，HDL－C 降低（P＜0.01）；黄芪组TG、TC、LDL－C 均较模型组降低，HDL－C 升高（P＜0.01）。黄芪组TC较对照组有增高趋势，但差异无统计学意义（P=0.114，P＞0.05）。

2.2 黄芪干预对子代兔肝组织的影响

对照组肝血窦结构清晰，胞质均匀。模型组呈轻中度脂肪变性，肝细胞质内显现大小不一的脂滴空泡，无明显气球样变、炎症、坏死表现。黄芪组肝细胞质内脂滴数量较模型组减少。结果见图1。

图1 肝组织（HE染色×40倍）光镜下形态表现

2.3 黄芪干预对子代成年兔肝细胞脂肪变性损伤的影响

对照组均无脂肪变性；模型组均出现肝细胞脂肪变性，但以轻、中度为主；黄芪组介于两组之间。3组之间肝细胞脂肪变性程度采用秩和检验两两比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。结果见表3。

表3 黄芪的干预对子代成年兔肝细胞脂肪变性的影响

3 讨论

成年疾病胎儿起源学说认为，胎儿在宫内生长发育过程的关键时期受到特定损伤和刺激（比如宫内缺氧）后，可改变细胞表型平衡，或诱导妊娠期不适合的基因表达，引起组织器官结构和功能的改变，这些改变或许永久存在，导致成年后可能产生不同的器官损害［8］。本实验结果表明，模型组 TG、TC、LDL－C 均较对照组升高，HDL－C 低（P＜0.01）；宫内缺氧组肝细胞脂肪变性程度与对照组相比，差异有统计学意义（P＜0.01）。说明宫内缺氧增加了成年后NAFLD发生的易感性。其机制可能是，宫内缺氧引起适应性应激反应，诱导子代基因改变，引起成年后肾素－血管紧张素系统（RAS）更易激活［9］。而肾素－血管紧张素系统在胰岛素抵抗的发生中起着重要的作用［10］，胰岛素抵抗又是NAFLD发生的重要因素［11］，进而导致成年后NAFLD易感性增加。

黄芪味甘、性微温，归脾肺经。能补中益气、升阳举陷，固本以安胎；能补五脏之气虚，补气以生血，活血以通调经络血脉［12－13］。黄芪用药历史悠久，古代胎动不安、胎萎不长者多用黄芪，《景岳全书》《产科发蒙》中均有记载。黄芪是一种天然的抗氧化剂，广泛用于治疗心脑血管缺血缺氧性疾病、胎儿宫内生长迟缓及胎儿窘迫等。本实验结果显示，与宫内缺氧组比较，黄芪组肝脏脂肪变性程度显著减轻；血清 TG、TC、LDL－C 降低，HDL－C 增高。这一结果表明，对于宫内慢性缺氧诱导的肝细胞脂肪变性损伤，黄芪在一定程度上能够减轻其损伤反应。其机制可能与黄芪能够减轻代谢紊乱，改善细胞凋亡，调节神经内分泌，抗生物氧化等［14－15］多个途径有关，确切机制尚待进一步的深入研究和探讨。

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［2］代东伶.儿童非酒精性脂肪性肝最新研究动态［J］.中国当代儿科杂志，2015，17（1）：107－112.

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（编辑：张世霞）

Protective effect of Astragalus on nonalcoholicfatty liver induced by chronic intrauterine hypoxia in adult rabbit offspring

Zhang Luyun1，Cui Minlu2
（1.TCM Hospital of Xianju，Taizhou Zhejiang 317300；2.The Second Affiliated Hospital of Fujian Medical University，Quanzhou Fujian 362000）

Objective：To investigate the effect of chronic intrauterine hypoxia on nonalcoholic fatty liver disease in adult rabbit offspring and the protective function of Astragalus.Methods：The pregnant rabbits were randomly divided into normal control group，Astragalus group and model group.After delivery，one male offspring rabbit per litter was selected and divided into 3 groups respectively.At sixth month of age，serum alanine transaminase（ALT）、aspartate transaminase（AST）、triglyceride（TG）、cholesterol（TC）、low density lipoprotein－cholesterol（LDL－C），high density lipoprotein－cholesterol（HDL－C）were measured.The pathological changes of liver tissue were observed.Results：Compared with model group，the level of serum TG、TC、LDL－C in Astragalus group were significantly decreased，but the level of serum HDL－C was increased in Astragalus group（P＜0.01）.The degree of hepatic steatosis observed under light microscope by HE staining technique was weakened in Astragalus group.Conclusion：Astragalus can reduce the damage of nonalcoholic fatty liver disease in adult rabbit offspring which is caused by chronic intrauterine hypoxia.

fatty liver；chronic disease；Astragalus；protective effect

R285

：A

：1671-0258（2017）03-0009-03

国家自然科学基金（81271587）

张路云，住院医师，硕士，E－mail：zhangluyun2006@163.com

崔闽鲁，主任医师，E－mail：cuiminlu2@126.com