高效液相色谱法测定清热止痛胶囊中蒙花苷的含量

王改平，倪梦梦，裴香萍，孙 琳，魏孟玲，刘红凤

（1.山西中医学院，山西太原030024； 2.山西大医院，山西 太原030032）

高效液相色谱法测定清热止痛胶囊中蒙花苷的含量

王改平1，倪梦梦1，裴香萍1，孙 琳1，魏孟玲2，刘红凤2

（1.山西中医学院，山西太原030024； 2.山西大医院，山西 太原030032）

●中医药学在世界上首先发现了中药并首创了方剂，医方是“除疾保性命之术”，而剂则有“调百药齐，和之所宜”之功。采用现代药物制剂技术重新研究并升华古典方剂之术，开创未来药物制剂技术和新剂型药物研究的全新思维和方向。

目的：研究清热止痛胶囊的定量控制方法。方法：采用C18柱，流动相为甲醇-水-冰醋酸溶液（26∶23∶1），检测波长为 334 nm，柱温为 25 ℃，进样量 10 μL。结果：蒙花苷在 0.092 μg~0.736 μg范围内线性关系良好（r=0.999 6），平均回收率100.29%，RSD=2.20%（n=6）。结论：该方法简便易行，重复性好，可为清热止痛胶囊的质量控制提供依据。

高效液相色谱法；清热止痛胶囊；蒙花苷

清热止痛胶囊来源于医院制剂，主要由野菊花、延胡索、败酱草、大血藤、紫花地丁、蒲公英、当归、川芎、小茴香等十二味药材组成，具有清热解毒、散寒止痛之功效，主要用于治疗急慢性盆腔炎、盆腔炎性包块（月经期和孕妇慎用）。方中野菊花、延胡索为君药，野菊花清热解毒，延胡索活血止痛，共奏凉血清热、活血止痛之功［1］，为盆腔炎热毒炽盛而设。臣药中清热药有败酱草、大血藤、紫花地丁、蒲公英等，其中败酱草清热解毒、消痈排脓、祛瘀止痛［2］，大血藤清热解毒、理气活血、祛风杀虫、消肿散结［3］，蒲公英、紫花地丁均具清热解毒之功，为治疗痈疮疔毒之要药［4］。方中配伍活血化瘀药当归以及行气药川芎，共奏清热止痛、活血行气之功。小茴香散寒止痛、理气和胃，有助于缓解痉挛、减轻疼痛［5］，佐制以上药物寒凉太过。全方以清热止痛作用为主，兼行气。为了有效控制其质量，为其临床应用提供疗效保证，实验采用高效液相色谱法测定清热止痛胶囊中蒙花苷的含量。

1 仪器与试药

美国Waters2996高效液相色谱仪；KQ3200E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；马头牌架盘药物天平BP-Ⅱ型（上海医疗器械八厂）。

对照品蒙花苷（成都曼斯特生物科技有限公司，批号：MUST-141221207）；样品清热止痛胶囊（医院制剂，批号：201501，201502，201503，201504，201505，201506）；甲醇（色谱纯，sigma科技有限公司），水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性实验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水-冰醋酸（26∶23∶1）为流动相，柱温为25 ℃，蒙花苷检测波长为334 nm，理论塔板数按蒙花苷峰计算应不低于3 000。进样量：10 μL。结果显示：阴性对照在蒙花苷保留时间处无干扰峰出现，结果见图1~图3。

图1 对照品溶液色谱图（蒙花苷）

图2 供试品溶液色谱图

图3 阴性溶液色谱图

2.2 对照品溶液的制备

取蒙花苷对照品（MUST-141221207批）适量，精密称定，加甲醇溶解制成每1 mL含46 μg蒙花苷的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取清热止痛胶囊（201501批）粉末（过三号筛）约0.6 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇100 mL，称重，加热回流3 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减去的重量，摇匀后经孔径0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性对照溶液制备

分别按处方比例及制剂制备工艺制备不含野菊花的阴性样品，再按“2.3”项下方法制备，即得。

2.5 线性关系考察

分别精密吸取蒙花苷对照品（MUST-141221207批，浓度为 0.046 mg/mL）2μL、4μL、8μL、12μL、16 μL，注入高效液相色谱仪，以进样量 X（μg）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标作图，并进行线性回归，得回归方程为Y=6 000 000X+71 625，r=0.999 6，表明蒙花苷在 0.092 μg～0.736 μg 范围内进样量与峰面积线性关系良好。结果见表1。

表1 蒙花苷对照品溶液线性关系结果

2.6 精密度试验

取0.046 mg/mL蒙花苷对照品溶液，在上述色谱条件下重复进样6次，测定峰面积，结果RSD=0.22%。

2.7 稳定性试验

取同一份供试品（201501批）溶液，按含量测定方法，分别在 0 h、2 h、4 h、8 h、12 h 进样测定，RSD=1.13%。结果表明，蒙花苷在12 h内稳定性良好。

2.8 重复性试验

取同一批号（201501批）样品6份，按“2.3”项下方法制备，精密吸取10 μL，按给定的色谱条件进样分析，测得平均含量2.536 mg/g，RSD=1.29%（n=6），表明该方法重复性良好。

2.9 加样回收率试验

称取（201501批）样品6份，每份约0.3 g，精密称定，另精密吸取对照品溶液（0.046 mg/mL）16 mL置锥形瓶中，依“2.3”项方法制备。平均回收率100.29%，RSD=2.20%。结果见表2。

表2 加样回收率试验

2.10 样品含量测定

取样品6批，按“2.3”项方法操作，分别制备供试品溶液，按上述色谱条件测定含量，结果见表3。

由表3可知，每粒胶囊蒙花苷的平均含量为2.568 mg/g，考虑大生产的因素，向下浮动20%，暂规定每粒胶囊蒙花苷的含量不得低于2.054 mg/g。

3 讨论

实验中流动相选择曾采用乙腈-0.05 mol/L磷酸氢二钠溶液-磷酸（30∶70∶0.06）溶液［6］，色谱峰未达到基线分离。后经多次实验摸索，采用甲醇-水-冰醋酸（26∶23∶1）为流动相，色谱峰分离效果较好，无前延和拖尾现象。

表3 样品含量测定

实验中对供试品溶液进行了提取比较，采用甲醇、70%甲醇、50%甲醇等不同提取溶剂，并考察了超声提取 30 min、45 min、60 min 以及回流 1 h、2 h、3 h的不同提取方法，最终确定文中的制备方法。

在对样品进行含量测定时，样品中蒙花苷含量不均，推测可能与原料的产地、药材二次提取、工艺等有关。

蒙花苷为清热止痛胶囊中野菊花中的主要成分，本实验研究表明，以蒙花苷为指标的含量测定方法专属性高，精密度及重复性良好，简单易行，可作为清热止痛胶囊的含量测定方法。

［1］尹耀东.微波联合红藤汤灌肠治疗盆腔炎 75 例［J］.陕西中医，2012，33（11）：1 448-1 449.

［2］高学敏.中药学［M］.北京：中国中医药出版社，2002：140-142.

［3］中华本草编委会.中华本草［M］.上海：上海科学技术出版社，1998：571-574.

［4］王倩.五味消毒饮临床应用研究［J］.中国民康医学，2012，24（24）：2 988-3 007.

［5］付起凤，张艳丽，许树军，等.小茴香化学成分及药理作用的研究进展［J］.中医药信息，2008，25（5）：24-26.

［6］卢丹，吕高荣，邹节明.HPLC 测定玉叶解毒颗粒中蒙花苷含量［J］.中国中药杂志，2005，30（3）：32-33.

（编辑：张世霞）

Determination of linarin in Qingre Zhitong capsules by HPLC

Wang Gaiping1，Ni Mengmeng1，Pei Xiangping1，Sun Lin1，Wei Mengling2，Liu Hongfeng2
（1.Shanxi College of Traditional Chinese Medicine，Taiyuan Shanxi 030024；2.Shanxi Dayi Hospital，Taiyuan Shanxi 030032）

Objective：To establish a method for determination of linarin in Qingre Zhitong capsules.Methods：The analysis was performed on a Diamonsil-C18column with a mobile phase of methanol-water-glacial acetic acid （26∶23∶1）solution at a detection wavelength of 334 nm，column temperature was 25 ℃，injection volumes of sample were 10 μL.Results：The content of linarin showed a good linear relationship in the range of 0.092 μg~0.736 μg（r=0.999 6）.The average recovery rate was 100.29%，RSD=2.20%（n=6）.Conclusion：This method is simple，sensitive，accurate and reproducible.It can provide the experimental basis for quality control of Qingre Zhitong capsules.

HPLC；Qingre Zhitong capsules；linarin

R285

：A

：1671-0258（2017）03-0012-03

王改平，主管中药师，在职研究生，E-mail：122514746@sohu.com

裴香萍，副教授，硕士，E-mail：peixp69@163.com