急性胃黏膜损伤大鼠背部敏化穴位的分布

朱小香，许金森，萨喆燕，万 隆，黄倩茹，潘晓华，杨广印

（福建省中医药研究院，福建省经络感传重点实验室，福建福州350003）

急性胃黏膜损伤大鼠背部敏化穴位的分布

朱小香，许金森，萨喆燕，万 隆，黄倩茹，潘晓华，杨广印

（福建省中医药研究院，福建省经络感传重点实验室，福建福州350003）

目的：观察急性胃黏膜损伤大鼠背部体表伊文思蓝（EB）渗出点的分布规律，为进一步开展穴位敏化的机制研究提供实验基础。方法：将24只SD大鼠随机分为生理盐水组（6只）和模型组（18只）。采用吲哚美辛腹腔注射法制作急性胃黏膜损伤模型，造模6 h后尾静脉注射EB，3 h后观察并记录大鼠背部体表EB渗出点所分布的神经节段和穴位，最后剖腹取胃观察胃黏膜损伤指数（UI）。结果：与生理盐水组比较，模型组大鼠UI显著升高（P＜0.001），在督脉背段及膀胱经第一侧线处的体表EB渗出点数明显增加（P＜0.001），渗出点呈现神经节段分布，T2～L6均有EB渗出点，出现率较高的 5 个神经节段为：T9＞T13＞T3＞T10=T5，其中“身柱”“神道”“筋缩”“肝俞”“胃俞”等穴位具有较高的 EB 渗出率。结论：急性胃黏膜损伤可促进EB在体表渗出，渗出点呈现神经节段分布，并与督脉及背俞穴具有较高的相关性，提示在疾病状态下，穴位由静息态转变为激活态，穴位局部血管通透性升高可能是穴位敏化的环节之一。

急性胃黏膜损伤；穴位敏化；督脉；背俞穴

穴位是经络－脏腑相关中的一个重要环节。穴位对于脏腑病变不仅具有治疗作用，而且具有诊断作用。穴位的功能活动是一个动态变化的过程，在生理状态下以“静息”为主，而在病理状态下则具有和生理状态完全不同的特征，表现为热敏、痛敏、压敏等感觉的变化，其面积的大小和功能强弱也会产生相应的变化，表现为病理性的“激活”状态，此动态变化过程即为穴位的敏化，穴位敏化过程是针灸发挥治疗作用的基础［1］。我们在以往的临床实践中发现，慢性胃炎、胃溃疡等消化系统疾病患者的督脉背段可按及多个明显压痛反应点，这种压痛反应与疾病的状态相关，当疾病治愈或好转后，沿督脉背段相应的压痛反应消失或明显减轻，而在健康人的相应督脉背段上无此反应点［2］。我们推测，督脉背段穴位存在与消化系统疾病相关的敏化现象。为进一步明确消化系统疾病引起背部穴位敏化的规律，本研究应用伊文思蓝（Evens Blue，EB）渗出法观察急性胃黏膜损伤大鼠背部穴位的敏化分布规律，为进一步开展穴位敏化的机制研究提供实验基础，也为针灸临床治疗提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 动物与分组 健康SD大鼠24只，雄性，清洁级，12 w 龄，体质量（250±25）g，由福建医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（闽）2012－0001。购入后置福建省中医药研究院实验动物中心清洁级实验室中适应性喂养1 w（恒温、12 h光照/d）。按随机数字表法随机将动物分为生理盐水组（6只）和模型组（18只）。实验动物条件符合国家科学技术委员会颁布的《实验动物管理条例》要求。本实验过程中对动物的处置符合2006年科技部发布的《关于善待实验动物的指导性意见》要求。1.1.2 仪器和试剂 宠物剃毛器（广州科德士电子公司）；小动物麻醉呼吸系统（深圳瑞沃德生命科技有限公司）；吲哚美辛（临汾奇林药业有限公司）；EB染料（美国Sigma公司）；脱毛膏（广州玛贝拉化妆品有限公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 模型的制备 急性胃黏膜损伤大鼠模型制备采用吲哚美辛腹腔注射法［3］。造模方法：大鼠禁食不禁水15 h，腹腔注射吲哚美辛（30 mg/kg，5 mg/mL溶于双蒸水中），6 h后制成大鼠急性胃黏膜损伤模型。模型成功的标准：大鼠安静，萎靡不振，拉柏油样便；形态学上动物胃黏膜有出血点和溃疡病灶。生理盐水组以腹腔注射等量生理盐水。1.2.2 背部EB渗出点的观察 在腹腔注射吲哚美辛造模的当天，先用宠物剃毛器剃掉大鼠背部毛发，再用人美容用脱毛膏脱毛。腹腔注射吲哚美辛6 h后，所有大鼠尾静脉注射 EB（50 mg/kg，50 mg/mL溶于生理盐水中），3 h后于小动物麻醉呼吸系统维持麻醉状态下观察大鼠背部EB渗出点所分布的神经节段，记录在每个神经节段的渗出点数，并和局部的穴位分布做比较（动物穴位定位参考华兴邦大鼠穴位图谱）。EB渗出点阳性表现为隐隐于皮肤之下，而不是明显在表皮，在表皮且颜色鲜艳者往往是表皮损伤所致。

1.2.3 胃黏膜损伤指数（Ulcer Index，UI）观察 背部EB渗出点观察结束后以1%乌拉坦麻醉大鼠、剖腹取胃。将幽门部和贲门部用线结扎，向胃内注入4%甲醛2 mL，在两结扎线外摘下全胃，置于4%甲醛中固定30 min。然后沿胃大弯剪开并用水清洗胃内容物，参照GUTH′S法计算UI：全胃各病灶长度之和为损伤指数［4］。损伤≤1 mm（包括糜烂点）为1分，1 mm＜损伤≤2 mm为2分，2 mm＜损伤≤3 mm为3分，3 mm＜损伤≤4 mm为4分，依此类推。损伤宽度＞2 mm者UI加倍。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 两组大鼠胃黏膜损伤指数（UI）的比较

生理盐水组大鼠胃黏膜光整完好，未见溃疡，UI为0；模型组大鼠的胃黏膜UI值比生理盐水组明显升高，差异有统计学意义（P＜0.001），提示大鼠急性胃黏膜损伤模型复制成功。结果见表1。

2.2 两组大鼠背部伊文思蓝（EB）渗出点的比较

尾静脉注射EB 3 h后，模型组大鼠在督脉背段及膀胱经第一侧线处的皮肤上均出现数量不等的EB渗出点，而生理盐水组中仅两只大鼠各出现一个EB点，模型组大鼠督脉及膀胱经第一侧线处的EB渗出点个数显著高于生理盐水组（P＜0.001），提示胃黏膜急性损伤会引起督脉及其周围穴位皮肤毛细血管通透性的增加，进而导致EB的渗出。结果见表1。

表1 两组大鼠UI和EB渗出点的比较 （±s）

表1 两组大鼠UI和EB渗出点的比较 （±s）

组别 n UI EB渗出点（个）生理盐水组 6 0 0.33模型组 18 60.50±3.80 7.72±1.01 Z－3.632 －3.622 P＜0.001 ＜0.001

2.3 急性胃黏膜损伤大鼠EB渗出点的神经节段分布

急性胃黏膜损伤大鼠在督脉背段及膀胱经第一侧线处皮肤出现较多的EB渗出点，渗出点呈现神经节段分布，T2～L6均有EB渗出点，出现率较高的 5 个神经节段为：T9＞T13＞T3＞T10=T5，其中“身柱”“神道”“筋缩”“肝俞”“胃俞”等穴位具有较高的EB渗出率。模型组EB渗出点的脊神经节段分布情况见图1。

图1 大鼠腹腔注射吲哚美辛后EB渗出点的神经节段分布

3 讨论

《灵枢·九针十二原》记载：“五脏有疾也，应出十二原，而原各有所出，明知其原，睹其应，而知五脏之害矣。”说明观察原穴的反应可以协助诊察脏腑之病变，穴位具有反映疾病状态的作用。在临床中，我们也经常发现，当脏腑发生病变时，可在相关穴位处出现各种病理反应，表现为局部感觉异常、压痛敏感、局部瘀络、凹陷、皮下结节或条索以及色素沉着等，在疾病早期常以血管变化为主。本研究发现，腹腔注射生理盐水的大鼠胃黏膜光整完好，未见溃疡，尾静脉注射EB后体表几乎不出现EB的渗出；而腹腔注射吲哚美辛的大鼠胃黏膜损伤指数显著升高，尾静脉注射EB后在督脉背段及膀胱经第一侧线处皮肤出现多个EB渗出点，而且这些渗出点和穴位的分布具有一定相关性，提示胃黏膜急性损伤会引起督脉背段及其周围穴位皮肤毛细血管通透性的增加，进而导致EB的渗出。Wesselmann U 等［5-6］研究认为，内脏-躯体长轴突反射引起的神经源性炎症是经络穴位活动的一部分，当内脏感觉神经所支配的组织结构发生病变时，刺激并不直接进入中枢，而是经过长轴突反射传向皮肤感觉神经末梢，感觉神经末梢被刺激后释放活性物质而引起神经源性炎症反应。EB渗出点的出现极有可能就是内脏病变引起的体表神经源性炎性反应所伴随的局部血管通透性改变的一个体现，这一变化来自内脏的病变。本研究中模型组与生理盐水组EB渗出的显著差异提示穴位的功能是和疾病密切相关，随着疾病的出现，穴位从正常的静息态变为病理状态下的激活态。

督脉为“阳脉之海”，对全身的阳经脉气起统帅和督促作用，它与足太阳膀胱经相邻，督脉之别“别走太阳”，与足太阳膀胱经经气交通，共主一身之阳气。五脏六腑之气皆通过背俞穴与足太阳膀胱经相联系，故督脉和背俞穴与脏腑经脉气血的功能活动密切相关。《素问·缪刺论》记载：“邪客于足太阳之络，令人拘挛背急、引胁而痛，刺之从项始，数脊椎侠脊，疾按之，应手如痛，刺之傍三痏，立已。”描述了古人通过触摸脊椎，在脊柱及其附近寻找压痛点，以压痛点进行诊断并以此作为治疗部位进行针刺的方法。在现代临床中也有较多应用脊柱及其周围穴位诊断和治疗疾病的报道。盖国才［7］临床验证发现，在1 308例住院患者中，背俞穴被用作穴位压痛辨病诊断法的基础穴，诊断符合率达94.66%。郭长青等［8］认为，背俞穴出现的结节形状不同，其所主之病亦不同。金珠［9］在针灸治疗失眠症中，采用背俞穴（肝俞、心俞、脾俞、肾俞、胆俞）为主穴，取得了良好的治疗效果。张晨静等［10］在对慢性功能性便秘患者的临床观察中发现，大部分患者的督脉存在压痛点，这些压痛点多分布于神道（T5）、灵台（T6）、至阳（T7）、腰阳关（L4）和第 5 腰椎棘突下（L5）。高璐佼等［11］临床研究发现，针刺督脉背段T3～T9部位不仅可用于治疗胃食管反流病，还可根据督脉背段的压痛情况判断病情。我们在长期的临床实践中也发现，督脉背段穴位存在与消化系统疾病相关的痛觉敏化现象，当疾病治愈或好转后，沿督脉背段相应的压痛反应消失或明显减轻。为进一步研究与胃溃疡特异对应关系的背部穴位敏化的规律性，本研究应用吲哚美辛腹腔注射制作急性胃黏膜损伤模型，以体表EB渗出点为观察指标。结果发现急性胃黏膜损伤大鼠在督脉背段及膀胱经第一侧线处皮肤出现较多的EB渗出点，渗出点呈现神经节段分布，T2～L6均有EB渗出点，出现率较高的5个神经节段为：T9>T13>T3>T10=T5，其中“身柱”“神道”“筋缩”“肝俞”“胃俞”等穴位具有较高的EB渗出率。从现代医学角度看，负责内脏运动和感觉的内脏神经初级中枢位于脊髓，通过脊神经后支分布于背、腰、骶部的深肌层和皮肤，呈节段性分布规律，形成躯体-内脏和内脏-躯体反射通路［12］。现代研究认为，背俞穴的分布规律与脊神经节段分布特点大致吻合，内脏疾病的体表反应区往往是相应穴位所在［13］。可见，督脉及背俞穴敏化可反映脏腑疾病不仅仅是临床实践的规律总结，更有传统中医理论作为支撑和现代医学实验研究为其提供科学依据。

本研究中，急性胃黏膜损伤大鼠EB渗出点主要分布在背部，与何伟等［14］的研究基本一致。它们在EB渗出点的主要分布节段和穴位上虽有重叠，但并不完全一致，这可能与模型的制作方法不同有一定关系。本研究应用吲哚美辛腹腔注射法制作急性胃黏膜损伤模型，观察其所致急性胃黏膜损伤大鼠的背部穴位敏化规律，将为应用针灸治疗解热镇痛及非甾体类抗炎镇痛药所产生的胃肠道副作用提供实验依据。EB渗出点作为敏化穴位体表神经源性炎性反应的一个体现，这种炎性反应所涉及的炎性物质中有P物质（substance P，SP）、降钙素基因相关肽（calcitonin gene related peptide，CGRP）等［14］，这些物质引起血管扩张和血浆渗出等一系列的炎性反应，进而导致局部皮肤痛觉过敏反应。EB渗出点与痛敏、压敏等敏化形式在分布规律上重叠性如何有待进一步研究。此外，穴位敏化的概念让我们进一步认识到揣穴的重要性，过去对穴位的研究多脱离穴位的功能而单纯研究穴位的结构，而且研究中为统一操作而“按图索骥”的穴位定位方法难以保证不同个体定位的绝对准确，又没有可靠的评判标准，因此有可能存在无效定位，其结果导致无法探明穴位结构与功能相匹配的关键物质结构。因此今后研究中，如何解决实验操作中统一定位和有效定位的矛盾是针灸研究中急需解决的一个问题。

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（编辑：张世霞）

Distribution of activated acupoints in the back of rat with acute gastric mucosal injury

Zhu Xiaoxiang，Xu Jinsen，Sa Zheyan，Wan Long，Huang Qianru，Pan Xiaohua，Yang Guangyin
（Fujian Academy of Traditional Chinese Medicine，Fujian Key Laboratory of Propagated Sensation along Meridian，Fuzhou Fujian 350003）

Objective：To observe the distribution of Evan′s Blue（EB）spots at the back skin of rats with acute gastric mucosal injury，and to provide experimental basis for further research on the mechanism of activated acupoints.Methods：24 SD rats were randomly divided into normal saline group（n=6）and model group（n=18）.The acute gastric mucosal injury model was induced by NSAIDS.After 6 hours，rats were given tail vein injection of EB.Then the EB spots at the back skin of rats were observed and recorded.The gastric mucosal injury index （UI）was observed by Guth′s method.Results：Compared with the normal saline group，the UI and the number of EB spots along governor vessel（GV）on the back and Bladder meridian through the first side line in rats of the model group was significantly increased（P＜0.001）.The EB spots presented a nerve－segmental distribution.The most spots distributed along five nerve segments：T9＞T13＞T3＞T10=T5.The effusion rate of EB through"Shenzhu（GV12）""Shendao（GV11）""Jinshuo（GV8）""Ganshu（BL18）"and"Weishu（BL21）"was higher.Conclusion：Acute gastric mucosal injury can promote the effusion of EB in the body surface.EB spots presented a nerve－segmental distribution and were associated with the back－shu point and GV acupoints.The result suggested that the acupoints were activated in disease state.Increasing of the vascular permeability may be one of mechanism of acupoint activation.

acute gastric mucosal injury；activation of acupoint；governor vessel；back－shu point

R285

：A

：1671-0258（2017）03-0005-04

国家自然科学基金资助项目（81573886）；福建省自然科学基金（2015J01680）；福建省卫生系统中青年骨干人才培养项目（2015－ZQN－JC－35）；福建省经络感传重点实验室（2015）

朱小香，高级实验师，硕士研究生，E－mail：706488801@qq.com

杨广印，副研究员，本科，E－mail：ygy158158@163.com