浅谈YY0569—2011《Ⅱ级生物安全柜》

刘滨璐++薛璐

对于涉及标准菌株检验项目的微生物实验室来说，生物安全柜是必不可少的设备之一。CNAS-CL09：2013中明确规定，实验室应配备满足要求的生物安全柜，否则，将会导致相关微生物检验项目的一票否决！生物安全柜的重要性由此可见一斑。

YY0569-2011《Ⅱ级生物安全柜》是由国家食品药品监督管理局发布、专门针对Ⅱ级生物安全柜所制定的一个标准，学习它将有助于提高对于生物安全柜的认识和应用。

定义

（1）生物安全柜（biological safety cabinet，BSC），即负压过滤排风柜，分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三级。BSL-2实验室一般配备Ⅱ级生物安全柜即可满足检验要求。

操作者可通过Ⅱ级生物安全柜前窗操作口进行操作，前窗操作口向内吸入的负压气流用于保护操作人员的安全，经高效过滤器过滤的下降气流用以保护安全柜内实验用品，气流经过滤后排出以保护环境。与Ⅱ级生物安全柜相比，超净工作台则只保护实验用品，不保护操作人员。

（2）工作区（working area），安全柜内进行操作的部分，即安全柜内部从一侧到另一侧、从后侧到前窗内侧，高于前窗玻璃下沿约5cm到工作台面的区域。

（3）下降气流（downflow air），来自安全柜上方经高效过滤器过滤的垂直向下流向工作区的气流。

（4）流入气流（inflow air），从安全柜前窗操作口进入安全柜的气流。

Ⅱ级生物安全柜的类型及特点

按照排放氣流占系统总流量的比例及内部设计结构，Ⅱ级生物安全柜分为A1、A2、B1、B2四种类型，见表1。

A1及A2型由于只有30%气流外排，故不应用于操作挥发性物质或有毒化学试剂。B1型可用于操作少量的挥发性化学试剂和放射性物质，成为实验室首选。B2型由于存在问题较多，尚需进一步完善。

要求

安装检测。生物安全柜购买到货后，应检查、核实以下内容：

（1）外观

柜体表面无明显划伤、锈斑、压痕，表面光洁，外形平整规矩。说明功能的文字和图形符号标志正确、清晰、牢固。焊接牢固，焊接表面光滑。

（2）报警和连锁系统

①前窗操作口报警。安全柜前窗开启高度超过或低于标称高度时，声音报警器应告警，联锁系统启动。

②内部供/排气风机连锁警报。当安全柜内既有内部下降气流风机又有排气风机时，应有联锁功能。一旦排气风机停止工作，下降气流供气风机关闭，声光报警器报警。一旦下降气流供气风机停止工作，排气风机继续运转，声光报警器报警。

③Ⅱ级B1和B2型安全柜排气报警。Ⅱ级B1和B2型安全柜有室外排气风机。一旦安全柜设定了气流的安全范围，在15s内排气体积损失20%时，则声光报警器报警，联锁的安全柜内部风机同时被关闭。

④气流波动报警。当下降气流流速和流入气流流速波动超过其标称值的±20%时，用声光报警器来提示下降气流和流入气流流速的波动。

（3）高效过滤器完整性

可扫描检测过滤器在任何点的漏过滤应不超过0.01%；不可扫描检测过滤器在任何点的漏过滤应不超过0.005%。

（4）下降气流

安全柜下降气流平均流速应在0.25～0.50m/s之间（±0.015m/s）。

（5）流入气流

安全柜的流入气流平均流速应在流入气流标称值±0.015m/s之间。Ⅱ级A2、B1、B2型安全柜流入气流平均流速应不低于0.50m/s，工作区每米宽度的流量应不低于0.1m3/s。

（6）气流模式

安全柜工作区内的气流应向下，应不产生漩涡和向上气流且无死点；气流应不从安全柜中逸出；安全柜前窗操作口整个周边气流应向内，无向外逸出的气流，安全柜前窗操作口流入气流应不进入工作区。

维护检测。定期对生物安全柜进行维护检测，主要包括外观、高效过滤器完整性、下降气流、流入气流及气流模式等。

人员保护（1×108～8×108/mL枯草菌芽孢）

6个AGI-30取样器5min取得的枯草芽孢样品培养所得的菌落总数不能超过10CFU，而2个狭缝式采样器30min取得的枯草芽孢样品培养所得的菌落总数不能超过5CFU。对照培养皿应呈阳性（当培养皿菌落数计数大于300CFU时，为阳性）。重复三次合格。

产品保护（1×106～8×106/mL枯草菌芽孢，5min）

狭缝式采样器30min取得的枯草芽孢样品培养所得的菌落总数不能超过5CFU。对照培养皿应呈阳性（当培养皿菌落数计数大于300CFU时，为阳性）。重复三次合格。

交叉污染保护（1×104～8×104/mL枯草菌芽孢）

距被检测侧壁360mm外的培养皿的菌落数不能多于对照2个。

紫外灯。Ⅱ级生物安全柜安装紫外灯，波长254nm紫外线辐射在工作区表面，辐射强度不低于400mW/m2。

操作规范。在日常的使用过程中，应根据相关国家标准及供货厂商所提供的使用说明，制作出适合本部门人员进行试验的生物安全柜操作手册，其中应关注以下细节：

（1）安全柜内不能使用酒精灯，否则燃烧产生的热量会干扰气流并可能损坏过滤器。可以使用微型电加热器或一次性无菌接种环。

（2）安全柜内应尽量少放置器材或样品，否则会阻碍后部气流循环。

（3）操作者不应反复移出和伸进手臂以免干扰气流，同时尽量减少操作者身后的人员流动。

（4）所有工作必须在工作台面的中后部进行，能够通过观察挡板看到。使用时不能打开观察挡板。

（5）工作开始前和结束后，风机应至少运行5min。

（6）工作完成后及内天下班前，应使用适当的消毒剂对生物安全柜的表面进行擦拭。

生物安全柜作为一级防护屏障，能够对操作者、试验用品及环境提供有力的保护，是有效开展微生物相关检验项目的重要设备。通过对YY0569-2011《Ⅱ级生物安全柜》相关条款的学习，有助于提高对于生物安全柜的理解，在选择购买、日常应用、维护等方面提供理论依据与指导，为进一步加强实验室建设、更好地开展检测业务奠定了基础。

作者简介：

刘滨璐（1982-），微生物学理学硕士，国家生态纺织品质量监督检验中心副主任，工程师，主要从事纺织品生态相关指标的检测。