胃癌与mTOR信号通路的相关性研究

韩熙渊,韩丽红

1.包头医学院第二附属医院肝胆胰微创中心，内蒙古包头 014030；2.包头医学院基因诊断研究所，内蒙古包头 014060

*病理研究*

胃癌与mTOR信号通路的相关性研究

韩熙渊1,韩丽红2

1.包头医学院第二附属医院肝胆胰微创中心，内蒙古包头 014030；2.包头医学院基因诊断研究所，内蒙古包头 014060

目的 研究胃癌与mTOR信号通路的相关性。 方法 选取2014年1月—2015年12月在包头医学院第二附属医院诊治的50例胃癌患者，采用免疫印迹技术及逆转录聚合酶链反应技术，就其癌旁胃组织及癌组织实施检测，另选取同期50例非胃癌患者，就其mTOR相应表达状况予以检测；且对mTOR表达与临床参数关系予以分析。 结果mTOR在胃癌组织中的表达水平高于正常胃组织及癌旁胃组织，差异有统计学意义（P＜0.05）；mTOR mRNA在胃癌组织相应表达当中呈现为正相关，而其在正常胃组织及癌旁胃组织表达当中也呈现为正相关。mTOR mRNA在胃癌组织当中相应表达水平，则相关于有无淋巴结转移及病理分期等，而不相关于性别及肿瘤直径等。 结论 针对胃癌患者，mTOR信号通路在其组织当中特异性激活，而mTOR信号通路可能作用于胃癌的发生及发展。

胃癌；mTOR信号通路；免疫印迹

胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率位于第3位。目前，手术仍是唯一根治性的胃癌治疗手段，但是大部分患者在初次诊断时已处于疾病的进展期，失去手术机会。近年来研究发现哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR)是雷帕霉素的靶蛋白,是一种丝氨酸苏氨酸蛋白激酶。可以在多种因素的活化下参与基因转录、蛋白质翻译起始、核糖体生物合成、细胞凋亡等多种生物学功能,是细胞生长、分化的中心调控者[1]。它不仅在正常细胞的生长增殖中起着极其重要的作用,而且与正常细胞向癌细胞转化以及癌细胞的生长增殖密切相关。在许多人类肿瘤均呈高表达,与肿瘤的发生、发展密切相关[2-3]。该次研究通过选取2014年1月—2015年12月在包头医学院第二附属医院诊治的50例胃癌患者，就mTOR信号通路与胃癌组织相关性予以分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年1月—2015年12月在包头医学院第二附属医院院行手术根治切除的50例新鲜胃癌患者，于手术前均未采用化疗及放疗经历，且均为首次手术，收集胃癌组织、癌旁组织(肿瘤边缘4 cm处)；另选取同期50例非胃癌患者，均为胃十二指肠溃疡，且均采取胃大部切除术治疗，取其组织，均防止于液氮罐内，实施冷冻保存。所选取观察组胃癌患者中，男性患者为37例，女为13例，年龄39～75岁，平均年龄为48.8岁，病程1～5年，患者均经相关病理学诊断确诊病症类型。对照组患者男性患者为32例，女为18例，年龄42～71岁，平均年龄为45.6岁，病程1～5年。两组患者性别、年龄、病程等一般资料差异无统计学意义(P＞0.05)。

1.2 RT-PCR检测

依据总RNA提取试剂盒相应说明书，就胃癌组织总RNA实施提取；而后依据RT-PCR试剂盒相应说明书，开展逆转录操作，最终合成cDNA；PCR相应反应过程为93℃2 min预变性，93℃ 25 s，61℃ 30 s，72℃ 60 s，且经持续循环反应30个。取出3 μL产物，将其放置于浓度为2%琼脂糖凝胶电泳之中，以做结果分析之用，（目的基因灰度值-背景灰度值）/（基因灰度值-背景灰度值）=目的基因表达相对水平。

1.3 蛋白免疫印迹试验

将各个实验组相应病理组织实施收集，依据蛋白提取试剂盒相应说明书，将细胞总蛋白予以提取，采用Brad-ford蛋白分析仪器，将蛋白浓度完成测定，且将浓度为9%SDS-聚丙烯酰胺凝胶予以灌制，然后则依次实施电泳及转膜操作，最后封闭，时间控制在1 h，将一抗（1∶500）加入，且控制温度（4℃）环境下，开展孵育过夜，然后将二抗（1：5 000）加入，且于室温环境下，实施孵育，时间控制于1 h，最后将ECL加入，开展暗室显影。

1.4 统计方法

采用SPSS 19.0统计学处理所得数据，均数±标准差（±s）表示计量资料，对其实施t检验，采用直线相关分析两因素的相关性，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 mTOR在正常胃组织、癌旁组织及胃癌中的表达情况分析

mTOR在胃癌组织当中相应表达水平高于正常胃组织及癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 mTOR在正常胃组织、癌旁组织及胃癌中的表达的相关性（±s）

表1 mTOR在正常胃组织、癌旁组织及胃癌中的表达的相关性（±s）

组别 mTOR r P胃癌组织（n=50）癌旁组织（n=50）非胃癌胃组织（n=50）0.602±0.117 0.420±0.101 0.376±0.065 0.536 0.590 0.625 0.019 0.003 0.010

2.2 非胃癌胃组织、癌旁胃组织及胃癌组织当中pmTOR表达的关系分析

基于mRNA水平相应mTOR，其在非胃癌胃组织（r= 0.625，P=0.010）、癌旁组织（r=0.590，P=0.003）及胃癌（r= 0.536，P=0.019）当中，呈现出显著正相关。同见表1。

2.3 mTOR在胃癌中的相应表达及临床病理特征关系分析

mTOR在有淋巴结转移相应胃癌组织当中的表达相比于无淋巴结转移胃癌组织中mTOR的相应表达，差异有统计学意义（P＜0.05）；至此，mTOR mRNA在胃癌组织相应表达当中呈现为正相关，而其在正常胃组织及癌旁胃组织表达当中也呈现为正相关。mTOR mRNA在胃癌组织当中相应表达水平，则相关于有无淋巴结转移及病理分期等，而不相关于性别及肿瘤直径等。见表2。

表2 mTOR在胃癌中的相应表达及临床病理特征关系（±s）

表2 mTOR在胃癌中的相应表达及临床病理特征关系（±s）

临床参数mTOR mRNA性别男（n=37）女（n=13）淋巴结转移有（n=39）无（n=11）病理分期Ⅰ～Ⅲ期（n=29）Ⅳ期（n=21）肿瘤直径（cm）＜4（n=17）≥4（n=33）年龄（岁）＜60（n=35）≥60（n=15）0.618±0.149 0.577±0.150 0.778±0.169 0.527±0.166 0.500±0.187 0.725±0.158 0.569±0.233 0.610±0.135 0.638±0.188 0.580±0.135

3 讨论

mTOR对细胞正常生长、增殖、分化等起着极其重要的作用,且与正常细胞向癌细胞转化以及癌细胞的生长增殖密切相关[4-6]。乳腺癌、胃癌、白血病、胃肠道间质瘤、肝细胞癌、小细胞肺癌、肾癌、肺癌等肿瘤中均发现存在通路的异常激活[7-9]。

张刚等[10]采用免疫组织化学法及Westernblot方法检测P-AKT及P-mTOR在胃癌(100例)、癌旁(80例)及胃组织正常黏膜(100例)中的表达水平，结果p-mT0R在胃癌、癌旁及胃组织正常黏膜中的阳性表达均呈降低趋势，与Westernblot结果一致。p-AKT在胃癌中的表达与肿瘤分化程度有关，p-mTOR在胃癌中的表达与淋巴结转移有关。p-AKT及p-mTOR在同一例胃癌患者中表达呈显著正相关。通过该次研究结果可知，通过运用免疫印迹技术及逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术实施检测，非胃癌胃组织及癌旁胃组织当中的mTOR相应表达水平相比于胃癌组织，均低于后者，且差异有统计学意义（P＜0.05），从中可知，在胃癌组织当中所存在的mTOR信号通路，则可能存在被异常活化状况，此外，当mTOR具有越高的表达水平，mTOR下游相应靶点 P70S6K就会具有越高的P70S6K的表达水平，二者之间呈现出显著正相关。另外，mTOR信号通路在具体的胃癌组织当中所具有的表达，则密切相关于有无淋巴结转移及肿瘤病理分期，比如mTOR在存有淋巴结转移相应胃癌组织当中所具有的表达值为（0.778±0.169），而不存在相应淋巴结转移胃癌组织表达量则为（0.527±0.166），因此，二者之间比较差异有统计学意义，对于肿瘤直径、性别及年龄等资料而言，则彼此之间不存在相关性。

综上所述，胃癌的发生发展与mTOR信号通路活化密切相关，提示mTOR在胃癌组织中的高表达有可能抑制了细胞的正常凋亡，使肿瘤细胞的生存期延长，促进胃癌的发生，使肿瘤的恶性程度和生存能力提高，更容易通过侵袭组织而发生转移。

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[3]Monsalves E，Jurasczhka K，Tateno T，et a1．The PI3K／AKT／mTOR pathway in the pathophysiology and treatment of pituitary adcnomas [J]．Endocr Relat Cancer，2014，21(4)：R331-R344．

[4]杜义安,俞鹏飞.mTOR信号通路与胃癌的研究进展[J].中国肿瘤,2014,23(9)：761-764.

[5]朱优龙,姜波健,俞继卫.mTOR及其信号通路在胃癌化疗耐药中的研究进展[J].中国普外基础与临床杂志,2012, 19(12)：1352-1356.

[6]季冬梅,李进.靶向PI3K/Akt/mTOR通路在胃癌中的研究进展[J].肿瘤,2014(2)：191-196.

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[10]张刚，郭剑，李杰,等.P13K／AKT／mTOR信号通路在胃癌组织中的表达及意义[J].广东医学,2016,37(9)：1330-1332.

Research on Correlation between the Gastric Cancer and mTOR Signaling Pathway

HAN Xi-yuan1,HAN Li-hong2
1.Hepatobiliary Pancreatic Minimal Invasive Center,Second Affiliated Hospital of Baotou Medical College,Baotou,Inner Mongolia, 014030 China；2.Institute of gene diagnosis,Baotou Medical College,Baotou,Inner Mongolia,014060 China

Objective To research the correlation between the gastric cancer and mTOR signaling pathway.Methods 50 cases of patients with gastric cancer diagnosed in our hospital from January 2014 to December 2015 were selected and the paracancerous gastric tissue and cancer tissues were tested by the immunoblot assay and reverse transcription-polymerase chain reaction technique,and 50 cases of patients with non-gastric cancer at the same period were selected and the mTOR expression was tested and the correlation between the mTOR expression and clinical parameters was analyzed.Results The expression level of mTOR in the gastric cancer tissue was higher than that of normal gastric tissue and paracancerous gastric tissues,and the difference was statistically significant（P<0.05）, and the mTOR and mRNA in the gastric cancer tissues expression had a positive correlation,and also had a positive correlation in the normal gastric cancer tissues and paracancerous gastric tissue expression,and the corresponding expression levels of mTOR and mRNA in the gastric cancer tissues were related to the lymph node metastasis and pathological stage,but was not related to the gender and tumor diameter.Conclusion For gastric cancer patients,the specificity of mTOR signaling pathway in the tissues is activated,but the mTOR signaling pathway may have an effect on the occurrence and development of gastric cancer.

Gastric cancer;mTOR signaling pathway;Immunoblot

R4

A doi10.11966/j.issn.2095-994X.2017.03.02.07

2017-03-20；

2017-04-05

内蒙古自治区高等学校科学研究项目（NJZY16200),包头医学院博士启动基金项目（BSJJ201605)。

韩熙渊（1978-），男，内蒙古包头人，本科，副主任医师，主要从事胃肠道肿瘤的诊断与治疗工作。

韩丽红（1979-），女，内蒙古赤峰人，博士，教授，主要从事肿瘤基因诊断研究工作，E-mail：vhanlihong@163.com。