金银花中木犀草苷的研究进展

杨丽军+王丹丹+张允菲

[摘要] 金银花为临床常用中药，具有清热解毒、抗炎、抗病毒等功能，被广泛应用于各种临床疾病的治疗。《中国药典》一部（2005版）将木犀草苷和绿原酸双成分作为金银花的质量控制指标。本文通过查阅相关文献，分析、归纳、总结近年来金银花中木犀草苷的报道，得出溶剂提取法、超声提取法、闪式提取法、超高压提取法、超临界流体萃取法和超声波辅助提取法6种提取方法，以及大孔树脂柱层析纯化方法、分子印迹技术纯化方法和聚酰胺柱层析分离法3种分离方法，并总结金银花中木犀草苷对呼吸系统、心血管系统的保护作用，及其抑菌、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗皮肤老化、抗局部缺血的生物活性，以期为金银花的进一步开发利用提供参考。

[关键词] 金银花；木犀草苷；提取；分离；生物活性

[中图分类号] R284.1；R282.6 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）08（c）-0058-04

[Abstract] Lonicerae Japonicae Flos is commonly used in clinical medicine， with the function of clearing away heat and toxic materials and antiviral， which is widely used in the treatment of various clinical diseases. Luteoloside and chlorogenic acid were added to the 2005 edition of Chinese Pharmacopoeia as the indicators of the quality control of Lonicerae Japonicae Flos. In this paper， six extraction methods such as solvent extraction， ultrasonic extraction， flash extraction， ultra-high pressure extraction， supercritical fluid extraction and ultrasonic-assisted extraction were summarized， and macroporous resin column chromatography purification method， the molecular imprinting technology purification method and polyamide column chromatography method were used to separate luteoloside from Lonicerae Japonicae Flos by reviewing the related literatures in recent years， and it made a summary of the protective effect of respiratory system， the cardiovascular system， anti-bacterial， anti-inflammatory， antiviral， anti-tumor， anti-aging skin and anti-ischemic biological activities of luteoloside in Lonicerae Japonicae Flos in order to provide reference for further development and utilization of Lonicerae Japonicae Flos.

[Key words] Lonicerae Japonicae Flos； Luteoloside； Extraction； Separation； Biological activities

金銀花为忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或带初开的花，性甘寒气芳香，芳香透达又可祛邪，甘寒清热而不伤胃，具有宣散风热、清解血毒之功效，用于身热、发疹、发斑、热毒疮痈、咽喉肿痛等症的治疗[1-6]，其主要成分为有机酸类、黄酮类、三萜皂苷类、挥发油类及多种微量元素类，其中绿原酸与木犀草苷均为金银花的有效成分[7-8]。但一直以来，均以绿原酸作为金银花药材的提取工艺及提取物质量标准研究中的指标，而忽略了木犀草苷的作用，2005版药典增加了木犀草苷的含量测定，作为金银花质量控制的另一指标[9]。木犀草苷邻二酚羟基的特殊结构赋予了它抗氧化、抗肿瘤、抗感染、解热抗炎等药理活性，而且木犀草苷是金银花区别山银花的特征成分[10-11]。近年来，国内外对有关木犀草苷的提取、分离纯化以及生物活性等方面已有大量的相关文献报道，本文在此基础上，对近几年金银花中木犀草苷的提取、分离、生物活性等方面进行了综述，为木犀草苷的进一步开发研究提供理论基础[12]。

1 提取方法

1.1 溶剂提取法

由于木犀草苷可溶于热水、热甲醇及乙醇的性质，大多采用水或醇溶液作为溶剂的提取方法。朴美憬等[13]比较水回流和70%乙醇超声法对木犀草苷含量的影响，结合高效液相色谱法（HPLC）对两种提取样进行了含量测定，结果表明两种提取方法中木犀草苷的含量分别为0.01%和0.061%，且70%乙醇溶液提取的木犀草苷含量是水提法的6.1倍，所以醇溶液的提取方法略优于水提取方法。

1.2 超声提取法

回流提取一般都在较高的温度下进行，容易影响物质有效成分的活性或导致有效成分的损失，2005版药典规定以超声法作为木犀草苷的提取方法。闵春艳等[14]通过正交试验优化比较加热回流与超声两种醇提方法对金银花药材中绿原酸和木犀草苷的影响，结果表明以木犀草苷转移率为指标，超声法略优于回流法。endprint

1.3 闪式提取法

考虑到超声和回流方法耗时较长，提出一种快速高效的生物活性成分提取方法——闪式提取法。王玥等[15]分别以绿原酸和木犀草苷得率为指标，比较回流法、超声法及闪式提取法，结果表明，闪式提取法木犀草苷含量约为回流法的2倍，超声法略高于回流法，且分别以绿原酸、木犀草苷含量为指标，确定单独以木犀草苷或综合考虑绿原酸和木樨草苷含量两个指标时的最佳提取工艺：15倍量60%乙醇提取1 min。赵先恩等[16]比较闪式提取法和超声提取法分别提取金银花及其叶中的绿原酸和木犀草苷的含量，建立高效液相色谱-二极管阵列检测器（HPLC-DAD）分析方法进行评价，结果表明闪式提取3 min，金银花及其叶中绿原酸和木犀草苷的提取率均略高于超声提取法。

1.4 其他方法

除以上提取方法外，也有文献报道过其他提取方法。如超高压提取法[17]、超临界流体萃取法[18]，而且2005版药典规定对金银花中木犀草苷进行含量测定时，采用超声波辅助提取法制备供试品溶液，经HPLC测定含量。

2 分离纯化

2.1 大孔树脂柱层析纯化方法

利用大孔树脂分离纯化木犀草苷，通过吸附与解吸附的过程，其操作简单，成本低，现被广泛使用。李娜[19]采用大孔树脂同时分离纯化金银花中绿原酸和木犀草苷，分别以木犀草苷饱和吸附量和解吸率、绿原酸和木犀草苷吸附量、绿原酸和木犀草苷解吸率为考察指标，并对非极性D101、中等极性LSA-40和强极性LSD001等3类树脂进行筛选。最终得出分离纯化绿原酸和木犀草苷的最佳工艺条件：大孔树脂选用D101树脂；最佳上样条件：上样浓度为1∶10，上样液pH=4，上样流速3 BV/h；水和10%、20%醇溶液洗脱绿原酸，30%和40%醇溶液洗脱木犀草苷。

2.2 分子印迹技术纯化方法

木犀草苷多以糖苷的形式存在于金银花当中，但金银花的化学成分复杂，使得其分离和提取有较大的困难。祁楚楚等[20]以木犀草素为模板分子、丙烯酰胺为功能单体，采用分子印迹技术制备木犀草素分子印迹聚合物，并将其作为固相萃取剂，分离纯化中药金银花粗提物中的木犀草素纯度较高。该种方法实用性强，印迹聚合物可反复利用，可以在药物研发中推广。

2.3 聚酰胺柱层析分离法

有文献表明，对乙醇超声波法提取金银花中绿原酸和总黄酮的浓缩液进行分离，采用聚酰胺为吸附剂，选用10%、50%、90%体积分数的乙醇作为洗脱剂，通过柱层析梯度连续洗脱，分离出绿原酸、水溶性黄铜和脂溶性黄酮，进一步对脂溶性黄酮进行二次柱层析，可提高木犀草素的产率[21]。

3 生物活性

3.1 呼吸系统保护作用

木犀草苷化学名为木犀草素-7-O-葡萄糖苷（Luteolin-7-O-glucoside），其苷元为木犀草素，因其邻二酚羟基特殊的化学结构，使其具有清除自由基的抗氧化活性，对枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、啤酒酵母等在不同浓度下均有抑菌活性，且能对抗呼吸道合胞体病毒、副流感3型病毒和流感A型病毒，因此具有较强的呼吸道杀菌作用，临床上已验证对治疗喘、痰症状有疗效[22-25]。马双成等[26]采用细胞并变法进行了抗呼吸道病毒感染的研究，结果发现木犀草苷具有很强的抗呼吸道合胞体病毒的活性，其半抑制浓度（IC50）为5.2 μg/mL，治疗指数为48.1，高于阳性对照药病毒唑，另外木犀草苷具有一定强度的抗副流感3型病毒的活性，其IC50为41.7 μg/mL，治疗指数为6.0。

3.2 心血管保护作用

何玲等[27]研究木犀草苷对阿霉素诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用，结果表明，木犀草苷的抗氧化活性能够减轻阿霉素诱导产生的自由基对心肌细胞的损伤。Jiang等[28]探討了木犀草苷对血管平滑肌增殖和迁移的抑制作用和机制，结果表明木犀草苷通过与血栓素A2受体结合抑制血小板功能，并通过监测PI3K活性抑制血管内皮生长因子诱导的血管生成，可能成为预防和治疗动脉粥样硬化的潜在治疗剂。Sun等[29]研究木犀草苷对糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注损伤后的心脏功能和心肌细胞凋亡影响，木犀草苷能明显降低乳酸脱氢酶（LDH）的释放，上调抗凋亡蛋白FGFR2和LIF表达，激活PI3K/Akt途径，同时增加BAD磷酸化Bax，缩小Bcl-2的比例，减少梗死面积，降低心肌细胞凋亡率和心律失常发生率，从而改善心脏功能。

3.3 抑菌、抗炎、抗病毒作用

林小静等[30]通过测定铜绿假单胞菌质控菌株和多耐药菌株的体外抑菌作用，初步确定了木犀草素具有明显的抑菌作用。金银花中木犀草苷影响大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌细胞内的核酸，使得DNA复制和RNA合成无法完成，影响蛋白质的合成和表达，从而起到抑菌的作用，还可以降低肝纤维化程度，并具有抗炎的功效[31-32]，同时能够抑制单纯疱疹病毒性角膜炎、流感病毒性肺炎、甲型流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、新城疫病毒、呼吸道合胞病毒、流行性感冒和人巨细胞病毒等，从而达到抗病毒的功效[33]。

3.4 抗肿瘤作用

目前，木犀草苷在抗肿瘤方面的研究较为普遍和广泛。木犀草苷可以通过抑制SGLTI的葡萄糖转运，从而起到抗癌作用，也可以通过抑制细胞内某些激酶的活性间接地抑制肿瘤细胞增殖。有文献报道，通过热稳定实验，评价木犀草苷对14株癌细胞的体外增殖抑制作用，发现木犀草苷可通过下调Hsp90的客户蛋白Raf-1、HER2的表达，抑制Hsp90的活性，选择性地抑制非小细胞肺癌的增殖，诱导非小细胞肺癌凋亡，从而发挥抗肿瘤的作用[34]。韩宁宁等[35]比较木犀草素和木犀草苷DMSO和水溶液对K562细胞增殖作用的影响，结果表明，0.1% DMSO溶液中，木犀草苷的抑癌性强于木犀草素，1.15×10-6 mol/L木犀草苷水溶液的抑癌效果是木犀草苷0.1% DMSO溶液的1.87倍，可能原因是木犀草苷易溶于水的性质增强了木犀草苷与葡萄糖转运体的亲和性。研究表明，给药木犀草苷使HeLa和SW20细胞内的磷酸化组蛋白含量降低影响极光激酶B的活性，从而抑制HeLa和SW20细胞增殖，起到抗肿瘤的作用[36-37]。endprint

3.5 抗皮肤老化、抗局部缺血作用

木犀草苷降低胶原蛋白的分解和减少纤维细胞中MMP-1的合成，可能成为一种有效的抗皮肤老化治疗剂。不同浓度木犀草素增加皮肤成纤维细胞中Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白含量，对MMP-1蛋白表达有显著的抑制作用，并成浓度梯度依赖性[38]。Rump等[39]在探讨木犀草苷对心肌功能的影响中，发现木犀草苷在改进抗缺血特性相关缺血边缘心肌灌注部位的过程中，具有抗局部缺血的功效，可能是因为其抗氧化性质而发挥的药效。

4 结语

木犀草苷是金银花中重要的有效成分，同时也是广泛存在于植物叶青兰、野菊花、紫苏中的天然黄酮类化合物。近年来研究表明，木犀草苷具有多种药理活性，对呼吸系统、心血管系统、中枢神经系统疾病均有不同程度的治疗作用，如降低胆固醇、增强毛细血管舒张、杀菌，以及抗病毒、抗肿瘤、抗氧化等，临床主要用于止咳、祛痰、消炎、治疗心血管等疾病。由于中药金银花的化学成分复杂，使得木犀草苷的提取和分离存在较大困难。本文分别从提取、分离和生物活性方面对金银花中木犀草苷进行了归纳总结，其中木犀草苷的提取方法较为成熟，对木犀草苷的生物活性分析也较为全面，但分离纯化的方法相对较少，部分方法虽操作简单，成本低，但时间耗费过大，所以需要不断地优化或更新分离技术使得金银花中木犀草苷的分离纯化过程更为简单易行，而且高效，为其更好的开发利用提供理论参考，但其在体内的吸收、分布、代谢过程以及发挥药效的作用机制尚不完全明确，还需广大医药工作者对其进一步深入研究，并做大量的试验验证。通过对木犀草苷各方面的研究综述，结合对绿原酸各方面的研究，使得金银花的主要成分药效最大化，以促进金银花的生产和开发，使其药用价值和经济开发价值能更好地服务于社会。

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（收稿日期：2017-04-05 本文编辑：张瑜杰）endprint