取卵术中不同负压吸引对IVF-ET妊娠结局的影响

毕媛，王霞，薛伟，赵光，田琳，王丽亚，李琦，吴瑞英，邹淑花

(青岛大学附属妇女儿童医院，青岛 266034)

取卵术中不同负压吸引对IVF-ET妊娠结局的影响

毕媛，王霞，薛伟，赵光，田琳，王丽亚，李琦，吴瑞英*，邹淑花

(青岛大学附属妇女儿童医院，青岛 266034)

目的探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)取卵术中不同负压吸引对妊娠结局的影响。方法收集2016年3～6月在本院生殖医学中心行常规IVF-ET治疗的382个周期为研究对象。按照随机数字表将患者随机分为A、B、C、D 4组，设定不同的负压吸引泵压力：A组(100 mmHg，96个周期)，B组(120 mmHg，98个周期)，C组(140 mmHg，98个周期)，D组(160 mmHg，90个周期)。观察各组的获卵率、受精率、优质胚胎率及临床妊娠率。结果各组的获卵率、受精率、卵裂率比较无显著性差异(P>0.05)，C组的获卵率(88.12%)有高于其他组的趋势；C组的优质胚胎率(69.82%)略高于其他组，显著高于A组(64.43%)(P<0.01)。各组的平均移植胚胎数及临床妊娠率比较无显著性差异(P>0.05)，C组的临床妊娠率(57.14%)有高于其他组的趋势。结论IVF-ET治疗中取卵负压设定在100～160 mmHg时取卵操作是安全的，使用17G取卵针并设定负压为140 mmHg时可获得较好的卵母细胞回收率、优质胚胎率及临床妊娠率。

体外受精-胚胎移植； 负压吸引力； 获卵； 优质胚胎； 临床妊娠

体外受精-胚胎移植(IVF-ET)技术是目前治疗不孕症最有效的方法之一。在IVF-ET治疗周期中，最大程度回收优质卵母细胞是治疗成功的关键。如何在降低手术并发症的同时获得满意的卵母细胞回收率和高发育潜能的卵母细胞是广大生殖医学工作者最关注的问题。既往使用的取卵负压吸引力在100～200 mmHg[1-2]，范围较大，在此压力范围内取卵时是否会对回收卵母细胞造成不利影响，国内张杨等[3]探讨了取卵时泵的负压对卵母细胞及妊娠结局的影响，其在研究中根据不同的取卵压力120 mmHg和160 mmHg进行分组，对比两组获得的卵母细胞数量、受精率、卵裂率、优质胚胎率及临床妊娠率。研究结果显示受精率、可移植胚胎率、临床妊娠率随着取卵压力的增加明显降低。该报道仅对负压在120与160 mmHg两个压力下的取卵及移植情况进行了分析，未对公认的压力范围内其他压力及与取卵压力相关的手术并发症出血情况等进行探讨。本研究在压力范围100～160 mmHg内取卵，对不同压力是否影响卵母细胞回收及其发育潜能进行探讨，为选择取卵时的最佳负压吸引力提供参考。

一、资料与方法

1.研究对象：收集2016年3～6月在本院生殖医学中心进行常规IVF-ET治疗的382个周期。纳入标准：女方年龄≤35岁，输卵管因素不孕，排除多囊卵巢综合征(PCOS)者；男方精液常规检查未见异常。剔除标准：中途不愿参加本研究，中途中止或放弃治疗者。本研究经我院伦理委员会审批通过，入组时患者均自愿参加本次研究并签署知情同意书。

按照随机数字表将患者随机分为A、B、C、D 4组，参照之前文献研究[1-3]及多数生殖中心处理经验，在取卵时负压吸引泵设定不同的压力：A组：设定压力100 mmHg，96个周期；B组：设定压力120 mmHg，98个周期；C组：设定压力140 mmHg，98个周期；D组：设定160 mmHg，90个周期。所有患者均使用17G取卵针取卵。部分患者因预防卵巢过度刺激综合征(OHSS)或明显影响妊娠结局的因素行全胚冻存。

2.研究方法：采用美国COOK公司的真空负压吸引器，使用韩国麦迪逊X4 B超仪，探头频率7.5 MHz，均使用英国WALLACE 公司的17G单腔针取卵。

促排卵：采用黄体期长方案促排卵，于前1个月经周期的第21天或者在排卵后7～8 d开始使用促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)降调节，达菲林(益普生，法国)0.1 mg皮下注射，1次/d，连续应用至HCG注射日。月经第3天开始使用重组人促卵泡激素(果纳芬，Gonal-F，75 U/支，Serono，瑞士)皮下注射和尿促性腺激素(HMG，75 U/支，珠海丽珠)肌肉注射，150～225 U/d联合给药促排卵。当有1个主导卵泡直径达到18 mm，或2个卵泡直径达到17 mm，或3个卵泡直径达到16 mm时，停用果纳芬和达菲林。于当晚21点左右肌肉注射人绒毛膜促性腺激素(HCG，珠海丽珠)6 000～10 000 U扳机。统计HCG注射日双侧卵巢直径≥14 mm的卵泡数目。扳机36～38 h后经阴道B超引导下穿刺取卵。

卵母细胞回收：取卵操作由固定人员完成，包括1名经验丰富的取卵手术医生和1名配合取卵术的护理人员，及1名经验丰富的实验室操作人员。取卵手术在阴道超声诊断仪引导下进行。取卵前设定好负压，取卵针连接完毕后启动负压吸引器，将针刺入卵泡并抽吸，将卵泡液收集到14 ml试管内，迅速转入胚胎培养室进行捡卵。取卵结束后，记录每位患者穿刺卵泡总数、获卵数，并观察获得卵冠丘复合体的形态。

IVF-ET：取卵后4～6 h行常规IVF，授精后16～18 h去除卵母细胞周围的颗粒细胞，观察受精情况，第3天观察胚胎卵裂情况并进行胚胎评估。采用改良Puissant评分[4-5]法评价胚胎质量，优质胚胎标准：碎片<20%，第3天6～8细胞，卵裂球均匀或略不均匀。由同1名经验丰富的胚胎移植医生进行操作，胚胎选择及移植按本中心操作常规进行，移植后行常规黄体支持。记录受精情况、胚胎评分及移植后种植情况等。

随访：移植后14 d查血β-HCG判断是否生化妊娠。胚胎移植后30 d行B超检查判断妊娠囊位置及数目。

3.观察指标：每组的获卵率、受精率、卵裂率、优质胚胎率及临床妊娠率。

二、结果

1.各组患者一般情况比较：4组患者的平均年龄、不孕年限、Gn使用剂量、HCG日血E2水平比较无显著性差异(P>0.05)(表1)。

2.各组患者获卵及胚胎发育情况比较：各组获卵率、受精率、卵裂率比较无显著性差异(P>0.05)，C组获卵率(88.12%)略高于其他组。各组优质胚胎率比较，C组有高于其他组的趋势，显著高于A组(P<0.01)(表2)。A、B、C 3组患者无出血发生，D组有2例出血。由于例数较少，未做统计学分析。

3.各组患者移植日子宫内膜及临床结局比较：各组患者移植日子宫内膜厚度、平均移植胚胎数及临床妊娠率比较无显著性差异(P>0.05)；C组临床妊娠率有高于其他组的趋势，但与其他组比较并无显著性差异(P>0.05)(表3)。

表1 各组患者一般情况比较 (-±s)

表2 各组患者获卵及胚胎发育情况比较 [n (%)]

注：与A组比较，*P<0.01

表3 各组患者移植日子宫内膜及临床结局比较 [(-±s)，n (%)]

三、讨论

IVF-ET中影响移植结局的因素众多[6]，其中卵母细胞的回收率是影响IVF-ET治疗成功的关键[7-9]。既往文献中用于取卵时负压压力设定范围为100～200 mmHg[1-2]。众所周知，在压力一定的情况下，面积越大，压强越小，管道的液体流速越快。流速越快，卵冠丘复合体从卵泡壁上急速脱下迅速进入回收系统。单个卵泡穿刺持续时间较短，卵母细胞在卵泡液中停留时间较短，反之亦然。尝试在这个压力范围内寻找最佳的取卵负压压力，以最大限度地降低对获卵率及卵母细胞质量的影响，是辅助生殖工作者需要进一步研究的问题。

以往较多的研究局限在动物取卵术中。1996年Bols等[10]研究了负压与取卵针的直径对牛卵冠丘复合体的形态及发育能力的影响，结果显示负压越大，卵母细胞回收率越高，卵冠丘复合体完整率降低，裸卵率增加，囊胚的形成率越低。1997年Brüssow等[11]对猪排卵前卵泡进行回收，负压设置为30、60、125、250、375 mmHg，流速分别为10、17、32、47、66 ml/min，共穿刺695个卵泡，回收卵母细胞501个。随压力增加卵母细胞回收率逐渐下降。当流速为17 ml/min时，卵母细胞回收率较高达77.4%，流速为66 ml/min时回收率为59.8%。流速大于47 ml/min时完整的卵冠丘复合体的比例从82.0%下降到77.0%。压力增加，裸卵比例增加0～3%。该研究提示负压压力影响卵母细胞回收和卵冠丘复合体的质量，压力在60～125 mmHg(卵泡液流速17～32 ml/min)时，对猪卵母细胞和卵冠丘回收较适合。2008年Morton等[12]对羊卵母细胞回收中负压压力与回收率的关系进行研究，设负压压力为25、50、100 mmHg，用20G、2.5 ml的注射器穿刺直径2～4 mm卵泡，研究3组卵母细胞的成熟度、受精情况及早期胚胎发育情况等；研究结果显示负压为25～50 mmHg时比较合适。

本研究中，按照17G取卵针在100～160 mmHg压力范围内的不同负压进行分组，结果提示负压压力从100 mmHg上升到120 mmHg时，优质胚胎率升高，压力在140 mmHg时优质胚胎率最高，压力为160 mmHg时优质胚胎率略有降低，虽然组间比较无显著性差异(P>0.05)。考虑在140 mmHg负压下获得的卵母细胞质量最好因而获得了最好的优质胚胎率，而过高的压力可能造成卵冠丘复合体从卵泡壁上被急速撕脱，卵母细胞可能受到损伤，从而影响优质胚胎率。

关于取卵手术与出血率的研究，已有研究资料表明在人类卵母细胞回收中术后出血发生率约0.5%～8.6%[13]。本研究中由于出血例数较少，仅D组有2例患者发生术后出血，提示随负压压力的增加可能导致出血率的增加，这与张合龙等[14]的报道一致。

本研究结果提示，随着负压压力的增加，临床妊娠率有逐渐升高后又有所下降的趋势，但各组之间比较无显著性差异(P>0.05)，这考虑与本研究样本量较少有关。但本研究也再次证实在负压100～160 mmHg范围内，取卵操作是安全的；在负压为140 mmHg时可获得相对最高的临床妊娠率，这与Kumaran等[15]报道一致。

综上所述，本研究结果提示IVF-ET治疗中取卵时使用17G取卵针并设定负压吸引力为140 mmHg时可获得较好的卵母细胞回收率、优质胚胎率及临床妊娠率。本研究也再次证实取卵负压在100～160 mmHg时取卵操作是安全的。但本研究所纳入样本量较少，尚需后期更大样本量的研究探讨验证。

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[编辑：肖晓辉]

10.3969/j.issn.1004-3845.2017.09.016

2017-03-21；

2017-04-25

山东省医药卫生科技发展项目(2015WS0350)

毕媛，女，主管护师，本科，生殖护理专业.(*

，Email：shaying1968@126.com)