狍脱毛症血液生理生化指标和微量元素的分析

李长生 宋百军 窦凤鸣 陈晓霞 史继勇

(吉林农业科技学院动物科技学院，左家，132109)

狍脱毛症血液生理生化指标和微量元素的分析

李长生 宋百军 窦凤鸣 陈晓霞 史继勇

(吉林农业科技学院动物科技学院，左家，132109)

稿件运行过程

狍； 血液生理生化指标； 微量元素； 脱毛病

狍(Capreoluscapreolus)是一种常见的鹿科动物，在动物分类学上隶属哺乳纲(Mammalia)、偶蹄目(Artiodactyla)、鹿科(Cervidae)、狍属[1]。对狍亚种的划分，国外学者将世界范围的狍划分为欧洲狍(Capreoluscapreolus)和远东狍(Capreoluspygargus)[2]，我国学者将中国境内的狍分为4个亚种，即中亚亚种(C.c.tianschanicus)、华北亚种(C.c.bedfordi)、东北亚种(C.c.mantschurivus)和西北亚种(C.c.melanotis)[3]。狍在我国经济动物养殖业占有重要地位。长期以来，由于人们对野生狍的盲目猎捕和猎杀，导致野生狍资源的急剧减少。国家林业局已于2004年将狍列为有经济价值的保护物种，《中国生物多样性红色名录》(2015年脊椎动物卷)将该种列为低危物种。目前，狍已经驯化成可进行人工饲养的动物，其产品具有广泛的市场开发前景，同时养狍具有较大的观赏价值，但由于狍的人工驯化时间短，目前仍具有很强的野性，容易在外界因素刺激下发生应激反应，甚至死亡[4]。

随着养狍产业的发展，在我国东北地区的一些养狍场(户)陆续出现狍脱毛症，发病范围及数量逐步扩大，呈现明显季节性，严重发病个体出现死亡，已经威胁到狍种群的健康。本研究在实验室条件下，排除体表寄生虫、传染性疾病和系谱间亲缘关系的遗传病等引起的局部脱毛原因基础上，从血液生理生化指标、微量元素含量进行分析测定，探索狍因微量元素缺乏导致营养代谢紊乱进而引起脱毛病及其死亡的原因，为人工饲养狍因一些微量元素缺乏导致的营养代谢障碍病的诊断提供基础数据资料[5]。

1 材料与方法

1.1试验动物来源

试验动物采样吉林省辽源地区某养狍场、吉林省敦化地区某养狍场、吉林省吉林地区养狍场共30只狍，其中患狍20只(♀14只，♂6只)、健康狍10只(♀6只，♂4只)。

1.2主要仪器设备和试剂

BS-200型全自动生化分析仪(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)、BC-5300 vet 型全自动血液细胞分析仪(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)、TAS-986原子吸收分光光度计(北京普析仪器有限责任公司)，TU-1901紫外可见分光光度计(北京普析仪器有限责任公司)，RF-5301荧光分光光度计(日本岛津)，SCR20BC低温高速离心机(日本日立)，Sartorius精密电子分析天平(德国)。

2-3-二氨基萘(DAN)(上海恒远生物科技有限公司)；环己烷(C6H1004)(上海鼓臣生物技术有限公司)；T-SOD试剂盒、Cu-Zn-SOD试剂盒、GSH-Px试剂盒(上海鼓臣生物技术有限公司)。

1.3方法

规划是学校事业发展的指引和目标，指导和规范各类建设项目。学校按照一体化发展思路，以资源共建共享为指导思想，编制了《广东开放大学“创新强校工程”（2016-2020年）发展规划》《广东理工职业学院“创新强校工程”（2016-2020年）发展规划》，对非学历的继续教育明确了建设项目、建设内容、建设任务以及预期取得的成效。

1.3.1血液采集和处理

在早晨空腹情况下，按0.02～0.025 mL/kg体重标准用鹿眠宝和吹管针注射麻醉狍，颈静脉采血，分别用 5 mL的KHB真空采血管(含促凝剂，批号∶20120804，上海科华检验医学产品有限公司)，收集静脉血2 mL，3 000 r/min离心20 min，收集血清，使用BS-200型全自动生化分析仪(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)测定血液的18项生化指标。另用5 mL的一次性真空采血管(含EDTAK2，生产批号：120501，江苏康健医疗用品有限公司)，收集静脉血液2 mL，并轻轻将血液与抗凝剂混匀，30 min内使用BC-5300 vet 型全自动血液细胞分析仪(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)进行计数，测定血液生理指标23项[6-7]。

1.3.2血液生理指标测定

采用BC-5300 vet 型全自动血液细胞分析仪完成23项血液生理指标测定，测定指标如表1。

1.3.3血清生化指标测定

采用BS-200型全自动生化分析仪测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)、钙(Ca)15项生化指标(表2，表3)。此外，硫含量的测定采用黄有德等介绍的比浊法，铜、锌、锰含量的测定采用原子吸收分光光度法；硒的测定采用DAN-荧光分光光度计法；T-SOD活性的测定采用黄嘌呤氧化酶法，Cu-Zn-SOD活性的测定采用嘌呤氧化酶法，GSH-Px活性的测定采用DTNB显色法；测定方法均严格按照试剂盒说明书操作进行[8-10]。

1.4数据处理与统计分析

试验数据用SPSS 17.0软件包进行单因素方差分析，差异显著时用LSD法进行多重比较，数据结果用LSD表示。

2 测定结果

表1试验检测狍血液生理指标的分析

Tab.1 Analysis of blood cell in roe deer

续表1

注：同行中，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)

Note：In the same line，the shoulder marked different lowercase letters significant difference(P<0.05)

表2 试验狍检测血液生化指标检测

Tab.2 Blood biochemical indices of roe deer

续表2

注：同行中，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)

Note：In the same line，the shoulder marked different lowercase letters significant difference(P<0.05)

表3 试验雌雄狍血清矿物质元素检测

Tab.3 Analysis of trace element in roe deer

注：同行中，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)

Note：In the same line，the shoulder marked different lowercase letters significant difference(P<0.05)

3 讨论

3.1 本研究从3个地区养狍场(户)选取30只狍(其中20只发病狍，10只健康狍)为研究对象，在排除体表寄生虫、传染性疾病[10-11]等原因引起的局部脱毛原因基础上，经血液生理、生化和微量元素的检测，发现：患狍的红细胞数量和血红蛋白量下降，中性粒细胞百分比上升而淋巴细胞百分比下降；血液生化指标显示丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、肌酸激酶活性升高，总超氧化物歧化酶、铜锌超氧化物歧化酶、 碱性磷酸酶、尿酸含量和谷胱甘肽过氧化物酶活力显著下降；微量元素Se、Cu、Zn、S水平在血清中降低，可以判定患狍脱毛症应该属于微量元素代谢障碍性疾病[12-15]。

3.1.1 患狍血液红细胞数量和血红蛋白的含量下降，这是因为缺硒导致红细胞膜中的不饱和脂肪酸受到体内自由基的攻击，使得脂质过氧化，膜损伤，进而细胞破裂、溶解，使得红细胞数量和血红蛋白的含量降低，患狍中性粒细胞百分比上升而淋巴细胞百分比下降，这与王俊廷和杨淑清指出成年马缺硒的嗜中性粒细胞增多[16]和韦旭斌等报道梅花鹿因缺Se、Cu导致“晃腰病”相关研究相吻合[17]。Se是构成GSH-Px 的活性中心，而Se的一部分功能正是通过 GSH-Px 的机制发挥作用的。研究表明，GSH-Px 的活性与血硒水平呈正相关，通过检测GSH-Px 的活性可作为评价体内硒的营养状况的敏感指标。由表 3 可知，患狍体内 GSH-Px 活性低于健康狍对应值，表明患狍的抗氧化能力较健康狍低。

3.1.2 患狍肝功能及心肌酶谱异常，主要表现在 ALT、 AST、CK 活性升高。血清TP和ALB是反映消化吸收功能和免疫的重要指标[9，18-19]。血清蛋白质的合成与机体营养状况密不可分，当缺合成蛋白质的原料或蛋白质消耗增加，都会致使血清蛋白质下降和机体免疫力下降。由表2 可知，患狍血清TP和ALB均低于健康狍，说明该地区患狍体内血清蛋白质有缺乏的可能，造成这一结果与患狍日粮蛋白质含量有关，狍在人工圈养条件下，饲料主要为秸秆或青贮，精料为玉米，少量豆粕，饲料品种单一。从而造成狍血清中总蛋白和白蛋白含量下降。

3.1.3 SOD能有效清除超氧化物自由基，抵御OFR对细胞造成的破坏，维持体内 OFR 产生与消除的动态平衡。Cu、Zn缺乏可降低 Cu-Zn-SOD 的活性，使T-SOD 活性下降。SOD 活性可反映机体免疫力和抗病力的大小。由表3 可知，患狍体内 T-SOD、Cu-Zn-SOD 含量均低于参考值，表明患狍易受过氧化物和自由基损害，间接反映患狍缺乏Cu、Zn元素。GSH-Px重要功能是通过非特异地催化过氧化氢，清除体内有害氢过氧化物，保护生物膜结构免受过氧化物损伤。碱性磷酸酶(AKP)是一种含锌金属酶。当体内锌含量降低时，AKP活性迅速下降，活力与机体锌水平呈正相关。因此，动物机体中AKP含量可以作为反映机体内锌含量的灵敏指标。

3.1.4 S在动物所有组织中都以含硫氨基酸的形式存在，如胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸等。S的作用是通过体内这些含硫氨基酸实现的，参与体蛋白、乳蛋白的合成、脂肪代谢和碳水化合物代谢，起着组织蛋白质和各种生物活性物质(如激素、维生素)的功能。特别是S参与角质蛋白的合成，而毛(绒)纤维的主要成分是角蛋白，因此S的含量和存在的形式及结构对毛纤维的品质有着重要作用。

3.2 患狍血清中微量元素Se、Cu、Zn、S水平降低，会发生营养代谢障碍。

3.2.1 Se是生物体必需的微量元素，同时硒蛋白作为哺乳动物酶系统的基本成分，可以分解正常代谢过程中产生的有毒过氧化物，进而保护细胞中重要的膜结构不受损害[18-19]。当动物体内缺硒或者供给不足时，就会造成动物机体在生理生化、营养代谢过程中发生紊乱，引起机体细胞变性坏死，出现一系列疾病，如常见于幼畜的营养性肌病或白肌病等[20-21]。

3.2.2 Cu作为酪氨酸酶的辅基，而酪氨酸酶可催化产生黑色素。Cu缺乏时，动物酪氨酸酶的活性降低，致使皮肤、毛发色泽减退。同时Cu缺乏还可引起角化作用的破坏，使皮肤和毛发在生长和外观上都发生改变，造成被毛光泽暗淡，弯曲度下降，形成所谓“直毛”或“钢丝毛”，从而使被毛易折断，严重时可导致动物发生脱毛症状。Cu还具有重要的抗氧化作用，主要通过Cu对机体的抗氧化酶(血浆铜蓝蛋白(CP)和Cu-Zn-SOD)的活性的高低来发挥作用的，动物Cu缺乏时，可导致组织内Cu-Zn-SOD活性降低，使机体过氧化物和自由基增多，从而加速代谢及免疫机能紊乱，导致动物的抗病能力降低[22]。

3.2.3 Zn是动物的必需微量元素，参与动物体内200多种酶的组成，参与维持上皮细胞和皮毛的正常形态、生长和健康。Zn对免疫的影响最明显，Zn的缺乏使机体的免疫功能受损，对疾病的敏感性增加，可产生食欲、采食量和生产性能下降以及皮肤和被毛损害。缺Zn最敏感的部位是皮肤和被毛系统。动物缺Zn可发生脱毛及皮肤角化不全，发病动物的被毛纤维变直、变细，被毛松散，易脱落，严重者造成成片脱落[14，22]。

[1] 李长生，马丽娟，周会敏，等.狍的生物学特性[J].动物科学与动物医学，2002，19(4)：54-57.

[2] 李长生.圈养条件下狍繁殖行为的研究[J].四川动物，2008，27(6)：1093-1096.

[3] 李长生，周虚，王桂武.圈养条件下仔狍的生长与发育[J].兽类学报，2009，29(4)：413-418.

[4] 李长生，王桂武，周虚.圈养条件下狍发情配种模式的研究[J].四川动物，2008，27(1)：120-122.

[5] 李长生.实用养狍新技术[M].北京：金盾出版社，2009：210-251.

[6] 倪国超，李树明.重庆地区圈养梅花鹿血液营养成分研究[J].草食家畜，2009(1)：44-46.

[7] 宋胜利，葛志广.梅花鹿血液微量元素与蛋白组分[J].中药材，1999，22(8)：382-383.

[8] 徐磊，吴登虎，陈飞兰，等.斑马缺硒病的血液细胞和血液生化指标测定[J].四川动物，2016，35(1)：113-116.

[9] 邓济苏，杨晓黎，吴登虎，等.重庆地区圈养白唇鹿血液细胞和血液化学指标测定[J].四川动物，2007，26(4)：936-937.

[10] 韩敏，徐晓敏，刘晓松，等，鄂尔多斯地区山羊脱毛症病因分析[J].内蒙古农业大学学报，2011，32(2)：1-5.

[11] 黄有德，陈怀涛，王雯慧，等.甘肃省阿克塞县羊食毛脱毛症的病理学研究[J].中国兽医科技，1996，26(8)：6-8.

[12] 王娜，贾志海，卢德勋，等.内蒙古白绒山羊日粮适宜氮硫比的综合评定研究[J].动物营养学报，1999，11(S1)：228-235.

[13] 李光辉，商常发.畜禽微量元素缺乏症的监测指标[J].黑龙江畜牧兽医，1997(8)：37-39.

[14] 钟永安，张敏红，柯晓东，等.我国北部绵羊脱毛症与锌营养状况关系的探讨[J].中国农业科学，1990，23(1)：9-14.

[15] 韩秀荣，尚兴武，段彦丽，等.绵羊脱毛症调查及防治研究[J].中国兽医科技，1996，26(7)：16-19.

[16] 王俊廷，杨淑清.成年马缺硒症的研究[J].畜牧兽医学报，1988，19(1)：35-40.

[17] 韦旭斌，王水琴，李德，等.梅花鹿“晃腰病”的血液学变化[J].特产研究，1994(4)：43-46.

[18] 赵春霞，杨焕民.硒对动物生理机能的影响及缺硒预防[J].草食家畜，2004(2)：42-44.

[19] 汪开毓，彭成卓，金明昌，等.硒缺乏对鲤血液生理生化指标的影响[J].大连水产学院学报，2009，24(4)：283-287.

[20] 丁元霞.缺硒引起的动物疾病与防治措施[J].中国畜禽种业，2013(12)：35.

[21] 董勇，翟汆，王昭，等.硒缺乏症及其防治[J].中国畜禽种业，2011(9)：66-67.

[22] 邓卫东，毛华明，彭国华.早期监测反刍动物微量元素营养状况的研究[J].贵州农业科学，1999，27(3)：54-57.

Roe deer； Blood cell and blood biochemical； Trace elements； Alopecia

以吉林省辽源、敦化和吉林3地区狍养殖场户20只脱毛症患狍为研究对象，同时用10只健康狍作为对照组，对血液细胞、血液生化指标和血清中微量元素(Se、Cu、Zn、S)进行了分析对照，探讨狍在人工饲养条件下脱毛症的发生原因。结果表明：患狍的红细胞数量和血红蛋白量下降，中性粒细胞百分比上升而淋巴细胞百分比下降；血液生化指标显示丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、肌酸激酶活性升高，总超氧化物歧化酶、铜锌超氧化物歧化酶、 碱性磷酸酶、尿酸含量和谷胱甘肽过氧化物酶活力显著下降；微量元素Se、Cu、Zn、S水平在血清中降低，以上结果导致狍脱毛症。显然，这对该病的诊断具有重要意义。

Analysis of Blood Physiological and Biochemical Indexes，and Microelements in Alopecia Roe Deer

Li Changsheng Song Baijun Dou FengmingChen Xiaoxia Shi Jiyong

(College of Animal Science and Technology，Jilin Agriculture Science And Technology College，Zuojia，132109，China)

We analyzed the blood cells，blood biochemical indexes and serum trace elements (Se，Cu，Zn，S)of blood sampled from 20 captive rearing roe deer with alopecia from three roe deer farms at Liaoyuan，Dunhua，and Jilin areas in Jilin Province.Blood samples of 10 healthy roe deer were used as a control.Our objective was to identify the cause of alopecia in captive roe deer.The blood of alopecia roe deer showed reduced numbers of red blood cells，lower hemoglobin content，higher percentage of neutrophil cells，and lower percentage of lymphocytes.Blood biochemical analysis showed that the enzymatic activity of alanine aminotransferase，aspartate aminotransferase，and creatine kinase increased，while the enzymatic activity of total superoxide dismutase，copper zinc superoxide dismutase，alkaline phosphatase，and glutathione peroxidase decreased significantly.Blood content of uric acid also decreased.Levels of Se，Cu，Zn and S in serum decreased.

吉林省教育厅十二五重点科研项目“东北地区狍规模化饲养关键技术的研究”(吉教科合字[2012]第307号)；吉林农业科技学院种子基金项目“母狍妊娠过程胚泡滞育生理机制的研究”(吉农院合字[2014]第Z10号)

李长生，男，53岁，副教授；主要从事特种经济动物养殖研究。E-mail：csli-64@163.com

2016-10-25

Q959.9

A

修回日期：2016-12-15

发表日期：2017-05-10

2310-1490(2017)02-175-07