简易细胞块制作法在玻璃体淀粉样变性诊断中的应用

2017-09-15石群立周晓军马恒辉

临床与实验病理学杂志 2017年8期

陈辉，梁艳，饶秋，石群立，周晓军，马恒辉

陈辉，梁艳，饶秋，石群立，周晓军，马恒辉

眼球；玻璃体；淀粉样变性；细胞块；刚果红；甲基紫；病理诊断

人眼球玻璃体淀粉样变性是一种罕见的疾病，国内外文献中仅见少数病例报道[1]。其主要症状是眼前黑影或羽毛状飘动并伴有视力进行性缓慢下降直至完全丧失，眼部检查可见玻璃体混浊，其间杂有灰色颗粒状物，而附着于晶状体后囊的“足盘样”混浊有助于诊断[2]。目前医学界认为其可能是由于分子构象异常导致难溶性的淀粉样物质在细胞外的异常沉积所致，有些玻璃体混浊可能是全身病变的早期改变，而有些很可能是唯一症状[1]。对于散在、絮状漂浮以及少量不定形的病变玻璃体，如果按照常规组织处理方法或普通细胞学方法均难以获得满意的病理制片效果，给病理医师的正确诊断带来一定的难度。为此，本科室经过简单处理，把散在、絮状漂浮以及少量不定形的病变玻璃体，制作成简易细胞块，并在此基础上行甲基紫染色和甲醇刚果红染色，就能很好的解决上述问题，从而为正确的病理诊断打下了良好的基础[3]。现将玻璃体简易细胞块制作法介绍如下。

1 材料与方法

1.1 耗材试剂一次性试管(50 mL)，一次性吸管(10 mL)，擦镜纸，石蜡(熔点56～58 ℃)。10%中性福尔马林、二甲苯、无水乙醇和95%乙醇，均为分析纯，500 mL，购自南京化学试剂公司。1%甲基紫水溶液。1%醋酸水溶液。甲醇刚果红：刚果红0.5 g，甲醇80 mL，甘油20 mL。碱性乙醇分化液：氢氧化钾0.2 g，80%乙醇100 mL。

1.2 仪器设备低速离心机，LEICA ASP300S全自动脱水机，SAKURA Tissue-TeK TEC包埋机，LEICA RM2235切片机，Dako Coverstainer染色封片机。

1.3 组织标本眼球玻璃体浑浊液及冲洗液。样本量最好在50 mL以上。新鲜标本应立即加入样本量5～10倍的10%中性福尔马林中固定。

1.4 方法将标本静置10～20 min，经低速离心机2 000 r/min离心5 min，弃上清留沉淀物，用药匙刮取沉淀物到经95%乙醇浸泡的显微镜擦镜纸上，用显微镜擦镜纸包好后在上机脱水之前先用10%中性福尔马林预固定2 h后，再放入全自动脱水机中行后续常规脱水、透明、浸蜡处理约12 h[3-4]。脱水后浸入石蜡包埋机包埋成细胞块，再将细胞块切成3 μm厚的切片，65 ℃烘干1 h，防止组织脱片[5]。HE染色、甲基紫染色和甲醇刚果红染色具体染色操作步骤均参考《临床技术操作规范-病理学分册》中的方法进行[6]。

2 结果

光镜下淀粉样物质呈浅红色，可见片状嗜伊红无定形物质沉积，呈结节状或弥散分布于结缔组织内或血管周围，界限较清楚(图1)。甲基紫染色后淀粉样物质呈浅红色，其他组织呈紫色(图2)。甲醇刚果红染色后淀粉样物质呈砖红色，背景不着色，亦可略带黄色或淡红色，纤维排列整齐，沿一定方向走行(图3)。在偏光镜下观察淀粉样物质呈黄绿色的双折光(图4)。

3 讨论

玻璃体位于晶状体与视网膜之间，是由蛋白质(可能一部分是胶原)形成的小纤维网状结构做支架，内中充以玻璃样酸而形成的凝胶体，其具有一定的稠度和弹性，从而能保持一定的形体和某种程度的伸缩性，若是玻璃状体因某种原因(如老年变性、视网膜疾病、葡萄膜炎等等)发生变性，导致玻璃体混浊，往往难以恢复。其主要症状是眼前黑影或羽毛状飘动并伴有视力进行性缓慢下降直至完全丧失，眼部检查可见玻璃体混浊，其间杂有灰色颗粒状物。由于玻璃体在制作标本时高度收缩，故一般在常规取材染色后无法看到，而把它制作成简易细胞块就能很好的提供给我们所需要的相关病理检查。

由于玻璃体病变的组织标本是散在、絮状漂浮的不定形物，在制作细胞块前一定要进行离心处理。在上机脱水之前先用10%中性福尔马林预固定2 h，再进行常规脱水等后续处理，细胞块浸蜡要彻底，温度65～70 ℃，切片厚度不超过3 μm。采用上述方法制作的细胞块更加完整贴片不易碎，染色时无背景着色，细胞清晰，使绝大多数常规细胞涂片不能解决的方法均能通过简易细胞块切片进行辅助诊断，有效地弥补了普通细胞涂片及常规制片的不足，为病理诊断提供了有力的保障。