灵芝孢子粉对癫痫大鼠脑组织BDNF与livin的影响

刘 辉

（江苏省南通卫生高等职业技术学校 护理系，江苏 南通 226001）

灵芝孢子粉对癫痫大鼠脑组织BDNF与livin的影响

刘 辉

（江苏省南通卫生高等职业技术学校 护理系，江苏 南通 226001）

目的研究灵芝孢子粉对癫痫大鼠脑组织BDNF与livin的影响，探讨灵芝孢子粉保护癫痫大鼠脑细胞的可能机制。方法对健康雄性Wistar大鼠36只进行建模，随机分成对照组（生理盐水腹腔注射+生理盐水灌胃），模型组（PTZ腹腔注射+生理盐水灌胃），灵芝孢子粉组（PTZ腹腔注射+灵芝孢子粉灌胃），每组各12只，采用免疫组织化学方法检测3组脑组织BDNF与livin水平。结果BDNF与livin在大鼠皮质区、海马区均可见表达。与对照组和模型组比较，灵芝孢子粉组的BDNF、livin表达水平明显增加（P＜0.05）。结论BDNF与livin的表达可能在癫痫发病过程中扮演着重要的角色，推测灵芝孢子粉通过调控BDNF与livin表达来减少脑细胞损伤及凋亡，进而对癫痫脑组织起到保护作用。

灵芝孢子粉；癫痫；大鼠；脑组织；BDNF；livin

癫痫属于临床一大顽疾，其具体病因尚不清楚[1]。我国近年来癫痫发病人数呈日益上升的趋势，一些癫痫患者虽然经过正规治疗，病情有所好转，但是有一部分患者为“难治”癫痫[2]，病情难以得到控制。相关研究表明[3]，癫痫脑损伤是诱发癫痫发作之主要因素，也是癫痫难治、癫痫致残之主要因素。灵芝孢子粉在免疫调节以及神经系统保护等方面具有重要的作用，但是关于其对癫痫脑细胞之保护作用的研究尚少。本文主要揭示灵芝孢子粉对癫痫大鼠脑组织BDNF与livin的影响，探讨灵芝孢子粉保护癫痫大鼠脑细胞的可能机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料：灵芝孢子粉：购自山东云海灵芝专业合作社；戊四氮（PTZ）：购自上海博顿生物化工有限公司；兔抗大鼠BDNF、livin多克隆抗体：购自艾美捷科技有限公司。DAB 显色试剂盒：购自北京百奥莱博科技有限公司。

1.2 实验动物分组：健康雄性Wistar大鼠36只，体质量152～234 g，普通级动物，由某医科大学动物实验中心提供。实验过程中大鼠的处置符合动物伦理学标准。依据体质量把36只大鼠随机分成3组：分成对照组（生理盐水腹腔注射+生理盐水灌胃），模型组（PTZ腹腔注射+生理盐水灌胃），灵芝孢子粉组（PTZ腹腔注射+灵芝孢子粉灌胃），每组各12只。

1.3 取材：将3组大鼠麻醉后进行断头处死操作，低温下快速取脑，并分离出海马组织，运用中性甲醛溶液对其行24 h以上的固定操作，接着采用PBS水给予冲洗5次，使用酒精梯度实施脱水之后，运用石蜡进行包埋大脑皮质和海马组织，采用锡纸包裹好之后置入冰箱中待测。

1.4 BDNF与livin的测定：使用免疫组织化学方法测定各组大鼠大脑皮质和海马组织中的BDNF、livin水平，操作步骤分别严格按照兔抗大鼠BDNF、livin试剂盒说明书操作。染色切片在BI-2000医学图像分析系统显微镜下观察，呈棕黄色颗粒者为阳性。每张切片观察10个有代表性的视野，并计数每一个视野的阳性细胞数以检测BDNF与livin的表达情况。

1.5 统计学处理：应用SPSS20.0统计分析软件包进行统计分析。计量资料采用（x-±s）表示，组间比较采用t分析，计数资料采用χ2分析，均以α=0.05作为检验水准，P＜0.05具有统计学差异。

2 结 果

2.1 各组大脑组织BDNF表达水平比较：与对照组和模型组比较，灵芝孢子粉组的BDNF表达水平明显增加（P＜0.05），见表1。BDNF在大鼠皮质区的表达见图1；BDNF在大鼠海马区的表达见图2。

表1 各组大脑组织BDNF表达水平比较（个/视野，x-±s）

图1 BDNF在大鼠皮质区的表达

图2 BDNF在大鼠海马区的表达（DAB，X400）

2.2 各组大脑组织livin表达水平比较：与对照组和模型组比较，灵芝孢子粉组的livin表达水平明显增加（P＜0.05），见表2。livin在大鼠皮质区的表达见图3；livin在大鼠海马区的表达见图4。

3 讨 论

癫痫发作主要是因为脑部神经元发生异常放电，同时中枢神经系统出现兴奋性异常，致使大脑发生短暂性的功能障碍[4-5]。脑源性神经生长因子（BDNF）属于一种重要的神经营养因子，在中枢神经系统及神经元生长等过程中具有十分重要的作用[6-8]。本研究显示，BDNF在大鼠皮质区、海马区均可见表达。与对照组和模型组比较，灵芝孢子粉组的BDNF表达水平明显增加（P＜0.05）。说明，灵芝孢子粉能够促进癫痫大鼠脑组织中BDNF的表达，并能够延长BDNF的表达时程，进而对大脑起到一定的保护作用。

表2 各组大脑组织livin表达水平比较（个/视野）

图3 livin在大鼠皮质区的表达（DAB，x100）

图4 livinF在大鼠海马区的表达（DAB，x200）

相关研究表明[9-10]，Livin在脾、卵巢、肺与脑等组织中存在表达，但是在正常组织中的表达比较少。同时，Livin也属于抗损伤因子，可以促进痫性脑损伤的恢复。本研究显示， 与对照组和模型组比较，灵芝孢子粉组的livin表达水平明显增加（P＜0.05）。研究提示，灵芝孢子粉可以通过提高livin的表达，来降低大脑脑组织损伤。

综上所述，灵芝孢子粉可能是通过提高BDNF与livin的表达，而发挥出对神经元的保护作用，对癫痫具有良好的治疗效果。

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R742.1 文献标识码：B 文章编号：1671-8194（2017）23-0022-02

江苏省卫生科研项目JZ201319