产前抑郁症与生物钟基因表达水平的相关性研究

吴新华

[摘要] 目的 比较产前抑郁症患者与正常孕妇生物钟基因表达水平差异。 方法 方便选取2015年3月—2015年10月于该院就诊的20例产前抑郁症患者（研究组）和20名正常孕妇（对照组）为研究对象，检测生物钟基因Clock和PER1不同时间点的相对表达水平，并分析生物钟基因表达的节律性。结果 研究组和对照组不同时间点Clock和PER1表达水平差异有统计学意义（P<0.05），研究组各时间点Clock和PER1表达水平Ct值显著高于对照组（P<0.05），虽Clock和PER1在对照组（Clock： 0.000；PER1： 0.004）和研究组（Clock： 0.035；PER1： 0.038）的表达均有昼夜节律性（P<0.05），但研究组Clock和PER1表达水平的峰值和谷值之差（3.44，4.44）较对照组（6.36，5.35）更小。结论 产前抑郁症与生物钟基因表达水平变化具有相关性，应予以关注。

[关键词] 产前抑郁症；生物钟基因；表达水平；节律性

[中图分类号] R5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2017）06（b）-0156-03

[Abstract] Objective To compare the difference in the antenatal depression and expression level of circadian clock genes. Methods 20 cases of patients with antenatal depression and 20 cases of normal delivery women in our hospital from March 2015 to October 2015 were convenient selected as the research objects. Results The differences in the Clock and PER1 expression levels between the two groups at different time points were statistically significant（P<0.05）， and the Ct values of Clock and PER1 expression levels at different time points in the research group were obviously higher than those in the control group（P<0.05）， and the expressions of Clock and PER1 in the control group and in the research group had the diurnal rhythmicity， in the control group （Clock： 0.000；PER1： 0.004）and in the research group（Clock： 0.035；PER1： 0.038）（P<0.05）， but the difference in the peak value and valley value of Clock and PER1 expression levels in the research group was smaller than that in the control group[（3.44，4.44） vs （6.36，5.35）]. Conclusion The antenatal depression and expression level of circadian clock genes have the correlation， and we should pay attention to it.

[Key words] Antenatal depression； Circadian clock genes； Expression level； Rhythmicity

產前抑郁症是孕妇生产常出现的心理障碍疾病，临床常表现为睡眠减少、沮丧、焦虑、恐惧、绝望、易怒甚至自杀倾向[1-2]，对产妇健康造成不利影响[3-4]。前期关于产前抑郁症患者行为和心理改变的报道较多[5-7]，而鲜有关于产前抑郁症患者在基因调控层面变化的报道。该研究以2015年3—10月于该院就诊的20例产前抑郁症患者和20名正常待产孕妇为研究对象，比较产前抑郁症患者和正常孕妇生物钟基因表达水平的变化情况，以期为相关工作者提供借鉴。

1 对象与方法

1.1 研究对象

方便选取于该院就诊的20例产前抑郁症患者和20名正常孕妇为研究对象，纳入条件：①受试者产前无精神性疾病史和其他基础性疾病；②无沟通障碍；③未服用抗抑郁类药物；④自愿参与该研究。将产前抑郁症患者纳入研究组，平均年龄（25.32±4.79）岁；将正常待产孕妇纳入对照组，平均年龄（24.85±5.02）岁，两组患者数量、年龄和基础性疾病等情况差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 样品采集

入院15 d后，分别于00：00、06：00、10：00、14：00、18：00 和22：00 各采静脉血4 mL。

1.3 血液样本

RNA提取和cDNA的合成使用QIAamp RNA Blood Mini Kit试剂盒（德国 QIAGEN公司）提取总RNA。用紫外分光光度法对总RNA定量，OD260/OD280比值>1.7为合格样品。取1 μg总RNA，用TransScript II Reverse Transcriptase反转录试剂盒合成cDNA，合成产物使用紫外分光光度法定量，于-20℃保存。endprint

1.4 引物的合成与设计

参照NCBI数据库中Clock、PER1和β-actin的mRNA序列，使用OligoAnalyzer 3.1进行PCR引物设计，由大连宝生物公司合成引物，引物信息见表1。

1.5 实时定量PCR反应体系

以反转录得到的cDNA为模板，使用StepOnePlus？ Real-Time PCR System（美国Applied Biosystems Inc公司），PCR反应体系为25 μL：cDNA 2 μL（相当于100 ng），2× SYBR Premix Ex TaqTMⅡ×12.5 μL，10 μmol/L上游引物0.5 μL，10 μmol/L下游引物0.5 μL，双蒸水9.5 μL。反应条件：95 ℃变性5 min；扩增40个循环（95 ℃变性10 s，60 ℃退火延伸45 s）；72 ℃放置5 min。

1.6 统计方法

使用SPSS 19.0统计学软件进行数据统计，以目的基因与参比基因Ct值差值作为相对表达水平的评价指标，结果以（x±s）表示，进行t检验分析，P<0.05为差异有统计学意义；使用CircWave V1.4 软件和Clock Lab软件进行余弦分析，获得节律性参数。

2 结果

2.1 产前抑郁症患者和正常孕妇Clock基因的表达水平差异

产前抑郁症患者和正常孕妇不同时间点Clock表达水平均差异有统计学意义（P<0.05），且产前抑郁症患者较正常孕妇Clock表达水平显著下调（P<0.05）。经余弦分析，产前抑郁症患者和正常孕妇Clock表达均有昼夜节律性（P<0.05），正常孕妇Clock表达峰值为12.41，谷值为6.06；产前抑郁症患者Clock表达峰值为13.93，谷值为10.49。见表2和3。

2.2 产前抑郁症患者和正常孕妇PER1基因的表达水平差异

产前抑郁症患者和正常孕妇不同时间点PER1表达水平差异有统计学意义（P<0.05），产前抑郁症患者较正常待产孕妇的PER1表达水平显著下调（P<0.05）。经余弦分析，产前抑郁症患者和正常孕妇PER1表达均有昼夜节律性（P<0.05），正常孕妇PER1表达峰值为10.01，谷值为4.66；产前抑郁症患者PER1表达峰值为11.55，谷值为7.11。见表4和表5。

3 讨论

产前抑郁是产妇常见的精神障碍性疾病[3]。产前抑郁症患者常出现睡眠障碍，生物钟基因表达水平与睡眠质量直接相关[8]，Clock基因和PER1基因是人类生物钟正负反馈通路的重要调节基因[9]。该研究以2015年3月—2015年10月于该院进行就诊的20例产前抑郁症患者（研究组）和20名正常待产孕妇（对照组）为研究对象，通过检测生物钟基因Clock和PER1不同时间点的相对表达水平，比较产前抑郁症患者与正常孕妇生物钟基因相对表达水平和节律性差异。结果表明，研究组和对照组不同时间点Clock和PER1表达水平差异有统计学意义（P<0.05），研究组较对照组Clock和PER1扩增的Ct值显著增加，说明表达水平较对照组均显著降低（P<0.05），Clock和PER1在两组研究对象的表达均有昼夜节律性（P<0.05），正常孕妇Clock表达峰值为12.41，谷值为6.06，产前抑郁症患者Clock表达峰值为13.93，谷值为10.49；正常孕妇PER1表达峰值为10.01，谷值为4.66；产前抑郁症患者PER1表达峰值为11.55，谷值为7.11。研究组Clock和PER1表达峰值和谷值之差（3.44，4.44）较对照组（6.36，5.35）更小，说明产前抑郁症患者生物钟基因波动幅度更小，表达节律性较正常孕妇更不明显。有研究表明，PER1低表达水平下，90%受试者出现睡眠时间减少和易被唤醒的情况，PER1表达水平下降，更容易使人维持清醒状态而阻碍睡眠状态的持续[10]。该研究结果正好与之相符，生物钟基因相对表达水平的降低及节律性波动幅度减弱，可能是造成产前抑郁症患者睡眠障碍的原因。

综上所述，生物钟基因表达水平变化与产前抑郁相关，将生物钟基因表达水平作为产前抑郁症诊疗效果的辅助评价指标具有临床价值，值得推广。

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（收稿日期：2017-03-13）endprint