NMBzAz诱导大鼠食管癌动物模型相关的分子机制探讨

贺婵婷+张玲

[摘要] 目的 探討甲基苄基亚硝胺（NMBzAz）诱导大鼠食管癌动物模型相关的分子机制。方法 2015年1月—2016年10月期间，该校病理学教研室选择90只健康清洁级 SD 大鼠作为研究动物，随机将90只大鼠分为观察组和对照组，各45只。该组大鼠雌雄各半，均为8 周龄。观察组大鼠：将甲基苄基亚硝胺（按5 mg/kg）加入2 mL纯净水中，食管内灌注；对照组大鼠：食管灌注2 mL纯净水；两组均灌注1次/周，连续灌注30周。实验后10、20周和30周时间点，两组各宰杀15只大鼠，取食管组织，常规行病理学检查，查看两组食管癌发病情况。同时，提取食管组织总RNA，统计两组不同时间段大鼠survivin mRNA转录水平。结果 经病理证实：对照组无大鼠罹患食管癌，观察组实验10周（26.67%）、20周（53.33%）、30周（86.67%）后食管癌发病率均高于对照组，组间差异有统计学意义（P<0.05）。观察组实验10周（0.25±0.09）、20周（0.26±0.11）、30周后（0.24±0.10）食管组织survivin mRNA转录水平均高于对照组[（0.44±0.18）、（0.46±0.16）、（0.47±0.017）]，组间差异有统计学意义（P<0.05）。结论 NMBzAz诱导大鼠食管癌动物模型与survivin mRNA转录水平提升存在密切联系，可为食管癌分子靶向治疗提供参考依据。

[关键词] NMBzAz；大鼠食管癌；动物模型；分子机制

[中图分类号] R735.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2017）06（b）-0030-03

[Abstract] Objective To study the NMBzAz induced rat esophageal cancer animal model related molecular mechanism. Methods 90 cases of healthy SD rats in the pathological teaching and research room in our school from January 2015 to October 2016 were selected and randomly divided into two groups with 45 cases in each， and half of rats were females and half of rats were males， and all rates were 8 weeks， the rats in the observation group： methylbenzylnitrosamine 5 mg/kg was put into 2ml pure water， esophageal infusion， rats in the control group： esophageal infusion of 2ml pure water， once every two weeks for consecutive 30 weeks， and 15 rats were killed in 10 weeks， 20 weeks and 30 weeks after test and the esophageal tissues were taken and were given the routine pathological examination， and the incidence of esophageal cancer was searched， at the same time， the total RNA of esophageal tissues was taken out， and the survivin mRNA transcriptional level of rats at different time phases was counted. Results The pathology proved that there were no rats with esophageal cancer， and the morbidity of esophageal cancer in 10 weeks （26.67%）， 20 weeks （53.33%）and 30 weeks （86.67%）were higher than those in the control group（P<0.05）， and the survivin mRNA transcriptional levels in 10 weeks （0.25±0.09）， 20 weeks （0.26±0.11） and 30 weeks （0.24±0.10） in the observation group were higher than those in the control group[（0.44±0.18）、（0.46±0.16）、（0.47±0.017）]， and the differences were statistically significant（P<0.05）. Conclusion NMBzAz induced rat esophageal cancer animal model is closely related to the improvement of survivin mRNA transcriptional level， which can provide basis for the targeted treatment of esophageal cancer molecules.

[Key words] NMBzAz； Rat esophageal cancer； Animal model； Molecular mechanism

NMBzAz是一种亚硝胺类化合物，是与食管癌发病关系最密切的硝酸盐类物质，其在诱导动物食管癌试验中应用较多，建模效果较好[1]。但是，目前尚未探明NMBzAz诱导食管癌动物模型的分子机制，而这一机制的探明对于人类食管癌治疗具有重要意义[2]。为此，2015年1月—2016年10月期间，该校病理学教研室探索NMBzAz诱导大鼠食管癌的分子机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料

选择河北医科大学实验动物中心购进的90只健康清洁级 SD 大鼠作为研究动物，随机将90只大鼠分为观察组和对照组，各45只。该组大鼠雌雄各半，均为8 周龄。观察组，雌雄各半，体重 160～210 g，平均（185.13±25.01）g。对照组，雌雄各半，体重 170～210 g，平均（180.03±20.12）g。两组样本在体重、性别等一般资料方面，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 实验方法

观察组大鼠：自由取食，将甲基苄基亚硝胺（国药准字H32026237）（按5 mg/kg）加入2 mL纯净水中，食管内灌注，1次/周，连续灌注30周；对照组大鼠：自由取食，食管灌注2 mL纯净水，1次/周，连续灌注30周。两组大鼠实验室平均温度为（22±2）℃，相对湿度60% ，均使用普通饲料。

1.3 研究方法

实验后10、20周和30周時间点，两组各宰杀15只大鼠，戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后处死，将食管纵行剖开，取食管组织，常规行病理学检查，查看两组食管癌发病情况。同时，取100 mg中段食管保存于RNA-guard中，提取食管组织总RNA，采用异硫氰酸肌法（Trizol法）进行survivin mRNA转录水平检测，统计两组不同时间段大鼠survivin mRNA转录水平。

1.4 统计方法

该次研究采用SPSS 20.0统计学软件分析所有数据，计量资料采用t检验，用（x±s）表示；计数资料采用χ2检验，用[n（%）]表示，P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组不同时间段大鼠食管癌发病率比较

经病理证实：对照组无大鼠罹患食管癌，观察组实验10周（26.67%）、20周（53.33%）、30周（86.67%）后食管癌发病率均高于对照组，组间差异有统计学意义（P<0.05）。观察组实验30周后食管癌发病率最高，显著高于10周和20周，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 两组不同时间段大鼠survivin mRNA转录水平

观察组实验10、20、30周后食管组织survivin mRNA转录水平均高于对照组，组间差异有统计学意义（P<0.05）。观察组实验10、20、30周后survivin mRNA转录水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

3 讨论

亚硝胺类化合物是一种极强的强致癌污染物，可诱导食管癌发生，而在大鼠食管癌动物模型诱导中，NMBzAz最为常用，可较好的大鼠食管癌动物模型[3]。曾有专家提出，采用NMBzAz诱导了大鼠食管癌动物模型可明显提高食管癌发病率，周期越长发病率逐渐增加，经过10周后观察其发病率仅有28.70%，20周后发病率有所增加达到58.20%，30周后可高达88.50%[4]。该文结果显示，观察组食管癌发病率均高于对照组（无大鼠罹患食管癌），与专家提出数据相符合，且观察组实验30周后食管癌发病率最高，显著高于10周和20周（P<0.05），可知经过30周的NMBzAz诱导，可成功建立大鼠食管癌模型，而10周和20周效果不够理想，NMBzAz灌注后10周→20周→30周，食管癌发病率呈持续上升趋势。

食管癌的发生与最强凋亡抑制因子——surviving密切相关，而大鼠食管癌动物模型存在明显的survivin mRNA转录水平升高表现，较正常大鼠升高50%～200%[5]。该次研究可知NMBzAz诱导后大鼠食管组织始终处于survivin mRNA转录水平较高的水平，同时出现了食管癌发病率呈持续上升表现，可知大鼠食管癌发病与survivin mRNA转录水平升高存在密切联系。但是，目前survivin mRNA转录水平导致大鼠食管癌发病的作用机制尚不明确，仍需进一步探明[6-7]。NMBzAz诱导大鼠食管癌后survivin mRNA转录水平升高，为现代分子靶向治疗提供新的作用点，可以通过靶向治疗抑制survivin，从而控制食管癌进展，临床应用前景较好[8]。

综上所述，NMBzAz诱导大鼠食管癌动物模型与survivin mRNA转录水平提升存在密切联系，可为食管癌分子靶向治疗提供参考依据。

[参考文献]

[1] 邱斐斐.饮用水中亚硝胺和微囊藻毒素联合作用与食管癌的关系研究[D].南京：东南大学，2016：11-12.

[2] 唐欣，施文荣，刘艳，等.亚硝胺致食管癌前病变时大鼠血清氧化还原水平的变化及鸦胆子油的影响[J].时珍国医国药，2016（11）：2601-2603.

[3] 施文荣，谢佐福，刘艳，等.亚硝胺诱发大鼠食管癌survivin mRNA转录水平及与病理变化的关系[J].肿瘤防治研究，2011，38（10）：1113-1116.

[4] 邹丽辉.化学致癌剂诱导大鼠食管癌模型的系统调控研究[D].北京：北京协和医学院，2011：21-23.

[5] 辛国华，梁宗英，张乐，等.大蒜素对不同浓度甲基苄基亚硝胺诱发大鼠食管癌抑制作用实验研究[J].临床和实验医学杂志，2013，12（24）：1957-1960.

[6] 赵强，闻丹忆，孙建和.食管癌动物模型的建立[J].上海师范大学学报：自然科学版，2013，42（4）：398-404.

[7] 周童.Cox-2、Bcl-2、Fas蛋白在胆道不全梗阻大鼠胆总管上皮细胞中的表达及意义[D].泰安：泰山医学院，2014：23-24.

[8] 辛国华，梁宗英，张乐，等.选用不同方法应用甲基苄基亚硝胺诱发大鼠食管癌的对比实验观察[J].中国煤炭工业医学杂志，2013，16（12）：2044-2045.

（收稿日期：2017-03-19）