CD3+CD4+、CD3+CD8+T细胞在IgA肾病患者外周血的表达及临床意义

李 琳，陈 志，孙 韬，吴 昊

(吉林大学第一医院 肾病科，吉林 长春130021)

CD3+CD4+、CD3+CD8+T细胞在IgA肾病患者外周血的表达及临床意义

李 琳，陈 志，孙 韬，吴 昊*

(吉林大学第一医院 肾病科，吉林 长春130021)

IgA肾病(immunoglobin A nephropathy)是最常见的原发性肾小球肾炎[1],也是导致终末期肾衰竭最常见的原因之一[2]。IgA肾病的病因未明，被认为多种免疫细胞及相关因子参与了其发病机制[3]。

T细胞亚群主要包括CD3+CD8+的细胞毒性T 细胞(cytotoxic T cells，Tc)和CD3+CD4+的辅助性T 细胞(helper T cells，Th)等[4]，CD4+T细胞和CD8+T细胞在调节宿主免疫中发挥了重要作用[5，6]。本文拟通过检测IgA肾病患者外周血CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞的水平以及CD4+/CD8+的比值，来反映IgA肾病患者的细胞免疫状态。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 研究对象 研究对象为2015年3月到2017年3月吉林大学第一医院收治IgA肾病患者26例。所有患者经肾穿刺经病理明确诊断。所有病例排除了合并有严重感染和自身免疫性疾病，以及既往有恶性肿瘤病史的患者。所有入组病例3个月内未用过激素及免疫抑制剂。 随机选择20 例年龄与性别匹配的健康正常者,均排除心、肝、肾等疾病为对照组。

1.1.2 试剂和仪器 试剂：CD3 anti-human PE cy7,CD4 anti-human FITC,CD8 anti-human pacific blue均购自美国BD公司，淋巴细胞分离液Ficoll-Histopaque 1.077购自美国Sigma公司。仪器：FACS Fortessa 流式细胞仪(美国BD公司)。

1.2 方法

1.2.1 标本收集 取IgA肾病患者组及健康对照组清晨空腹静脉人乙二胺四乙酸(ethylene diamietetraacetic acid，EDTA)抗凝血5 mI,立即轻摇混匀,室温保存,3 h内测定。

1.2.2 外周血单个核细胞(PBMC)的提取 超净台中，将采到的抗凝血加PBS1∶1混匀。取离心管，每管加5 ml淋巴细胞分离液。将稀释的抗凝血沿管壁缓慢匀速加到分离液的上面。将离心管置于水平离心机，室温下2 000 rpm，离心20 min。离心结束后，用毛细吸管轻轻穿过血浆层至白膜层，沿离心管周缘吸出白膜层细胞，置于新离心管中。加PBS液，吸管吹打细胞均匀，室温1 200 rpm，离心5 min，洗涤2次。用含0.1%BSA的PBS重悬提取的PBMC细胞。

1.2.3 荧光标记细胞外抗原染色 流式管中每管细胞数为5×105，1 650 rpm，离心5 min，弃上清。加入100 μl流式洗液，并加入细胞表面抗原hCD3 PE-cy7/hCD4 FITC/hCD8 pacific blue各10 μl。混匀后置4℃避光孵育20 min。冷流式FACS洗液洗涤细胞2次。弃上清，重悬至500 μl流式洗液中。

1.2.4 流式分析 应用流式细胞仪检测IgA肾病患者组和健康对照组外周血中CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞的表达情况。

1.2.5 统计学处理 采用GraphPad Prism 5.0作图，流式数据采用Flowjo分析数据并作图，组别间差异比较采用配对t检验，P<0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 流式分析IgA肾病患者组与健康对照组CD3+CD4+T细胞的比例

结果表明IgA肾病患者外周血CD3+CD4+T细胞的比例低于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.001)。结果见表1及图1。

2.2 流式分析IgA肾病患者组与健康对照组CD3+CD8+T细胞的比例

结果表明IgA肾病患者外周血CD3+CD8+T细胞的比例高于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。结果见表1及图1。

2.3 测定IgA肾病患者组与健康对照组CD4+/CD8+比值

结果提示IgA肾病患者外周血CD4+/CD8+比值低于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.001)，结果见表1。

表1 IgA肾病患者外周血T 细胞亚群检测结果比较(%，

Note:**,P<0.01;***,P<0.001

图1 健康对照组、IgA肾病患者组CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞及CD4+/CD8+比值的比较**,P<0.01;***,P<0.001

3 讨论

IgA肾病为最常见的原发性肾小球疾病[7],据统计，IgA肾病发生率占全部原发性肾小球疾病的45%-50%[8]。IgA肾病发病机制不明，目前认为与免疫因素、基因异常及上呼吸道感染有关。尽管IgA肾病的发病机制尚未阐明，但IgA肾病肾组织中明确有IgA免疫球蛋白沉积，提示与免疫炎症性反应相关[9]。多种免疫细胞和相关细胞因子参与IgA肾病发病机制[10]。

T细胞亚群是目前临床上较常用的反映免疫功能状态的指标，T细胞的免疫调节作用主要由CD4+T细胞、CD8+T细胞完成[11]。其中，CD4+T细胞可协调B细胞分化产生抗体，CD8+T细胞可抑制抗体的合成及T细胞增殖，两者的稳态维持着机体正常的免疫应答[12]。我们检测了IgA肾病患者的这两种T淋巴细胞亚群，发现与对照组相比，IgA肾病患者CD4+T细胞数量及CD4+/CD8+比值均降低，差异有统计学意义，显示患病机体T淋巴细胞数量异常，免疫功能低下。此外这也提示了IgA肾病患者容易并发感染。

综上，我们认为IgA肾病患者外周血的CD4+T细胞减少而CD8+T细胞增多，这种T细胞亚群改变也反映了IgA肾病中免疫功能的紊乱及容易并发感染。

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本研究受国家自然科学基金(81641064)，吉林省省级产业创新专项资金项目(2016C041-2)，吉林省教育厅“十三五”科学技术研究规划项目(JJKH20170841KJ),吉林省发改委产业技术研究开发专项(2015Y036-1)资助

1007-4287(2017)08-1305-02

2017-06-15)

*通讯作者