猪链球菌耐药现状分析及防控

易新健，刘 准，凌云志，张翠翠，陈申秒

（山东滨州沃华生物工程有限公司，山东省动物病原微生物工程实验室，山东 滨州 256600）

猪链球菌耐药现状分析及防控

易新健，刘 准，凌云志，张翠翠，陈申秒

（山东滨州沃华生物工程有限公司，山东省动物病原微生物工程实验室，山东 滨州 256600）

近年来，随着猪场抗生素的大量、不合理使用，导致猪群细菌性病原的耐药性非常严重。文章以临床发病猪分离到的53株链球菌为研究对象，通过纸片法对其进行了20种临床常用抗生素的耐药性分析。结果表明，猪链球菌对常用抗生素耐药率高，耐药情况复杂，特别是对四环素、链霉素、卡那霉素和林可霉素的耐药率均在80%以上，而脑膜炎型链球菌必用的磺胺类药物的耐药率达到73.58%。针对链球菌耐药严重的情况下，建议猪场进行疫苗免疫，选用敏感抗生素用于治疗。

猪链球菌；耐药性；疫苗免疫；抗菌药物

引起猪链球菌病链球菌种类有猪链球菌、马链球菌兽疫亚种和类猪链球菌等，目前在国内猪场主要流行的链球菌有猪链球菌2型、7型、9型和马链球菌兽疫亚种[1-3]，主要临床表现为败血型、脑膜炎型、关节肿胀型和淋巴脓肿型等。

目前国内对猪链球菌病的预防没有足够的重视，简单地认为使用抗生素治疗就能解决链球菌问题。但在养殖过程中，大量不合理的添加抗生素用于促进动物生长和防治细菌性疾病的发生，使得猪链球菌对大部分临床应用的抗生素产生了不同程度的耐药性[4-7]，且多重耐药菌株不断增加，导致疫病无法得到有效控制，猪链球菌的疫情也日趋严重。本文以临床发病猪分离到的链球菌为研究对象，对其耐药性进行分析并结合临床实际情况提供防治方案供养殖户参考。

1 材料

1.1 培养基与试剂

新生牛血清购于浙江天杭生物科技有限公司；胰酪胨大豆琼脂（TSA）培养基购于上海中科生物技术开发有限公司；药敏纸片和细菌微量生化管购于杭州微生物试剂有限公司。

1.2 病料来源

病料来源于2016年全国各地送检至山东省病原微生物工程实验室的327份样品。无菌采集病死猪的脑、肝脏、脾脏、颌下淋巴结及关节积液等。

2 方法

2.1 细菌的分离鉴定

将病料接种于5%小牛血清TSA琼脂平板上，37℃培养24 h，挑取表面光滑的小菌落进行革兰氏染色，如有成对或链状球形革兰氏阳性菌，则判定为可疑菌落，将细菌纯培养后进行生化鉴定。

2.2 药敏试验

参照CLSI的纸片扩散法（K-B）进行药敏试验。将分离纯化的菌株制成菌悬液，用灭菌PBS将菌悬液浓度调整至含活菌数为107CFU/mL左右，取稀释好的菌悬液100 μL均匀涂布在5%小牛血清TSA培养基上，用镊子夹取药敏纸片贴在培养基上。37℃培养16 h，用游标卡尺测定抑菌圈直径并记录下来。根据CLSI药敏试验结果判定标准，即敏感、中敏、耐药3种形式判断猪链球菌对抗生素的耐药性。

3 结果与分析

3.1 分离鉴定结果

通过革兰氏染色和生化鉴定，从327份病料中分离到53株链球菌，分离率为16.21%。本机构链球菌分离率为16.21%，明显低于其他研究机构的分离率（30%～40%）[1，8]，主要原因：一方面有部分病料送到检测室已经不同程度腐败，导致分离时杂菌太多，无法分离纯化；另一方面送至检测室的病猪已经用过不少抗生素治疗（某些猪肝脏和肾脏明显肿大），导致病料中病原菌很少。

3.2 药敏结果

通过纸片扩散法对分离到的53株链球菌进行药敏试验，结果表明（表1），猪链球菌对常用抗生素耐药率高，耐药情况复杂，特别是对四环素、链霉素、卡那霉素和林可霉素的耐药率均在80%以上，而脑膜炎型链球菌必用的磺胺类药物的耐药率达到73.58%；其次表现为中敏，对部分常用药物介于耐药与敏感之间，如庆大霉素、恩诺沙星、多黏菌素B等；而敏感的药物非常少，主要对头孢类药物比较敏感。进一步对其耐药谱进行分析，结果表明（表2），链球菌的耐药谱非常广，不同猪场耐药情况不一样，14～16重耐药率最高，占总数的62.26%。

表1 53株链球菌药敏试验结果 株

表2 53株链球菌耐药谱

4 防控

4.1 营养与饲养管理

营养是猪群健康的基础。目前养殖场特别是小规模的猪场，饲料中的霉菌毒素超标现象严重，导致猪群健康度明显下降。饲养管理是疫病防控的基础，包括猪场清洁度、干燥度、温度的控制、消毒、发病猪的隔离等，这些均与细菌性疾病的发生有着必然的联系，这也是细菌性疾病被称为环境性疾病的原因。

4.2 疫苗免疫

疫苗免疫是猪场链球菌控制的必要措施。原因一，目前各养殖场使用细菌性疫苗防疫意识较差，很多猪场通过添加抗生素来预防猪链球菌，导致猪链球菌的耐药性日趋严重复杂，而等链球菌病发生之时，已经无药可用；原因二，随着国家对肉制品安全的控制，对抗生素使用严格监管以及对无抗养殖的推广；原因三，猪链球菌主要表现为脑膜炎型、败血型、关节肿胀型及淋巴脓肿型，而脑膜炎型和败血型属于急性型，大部分一发现就属于疫病晚期，无法治疗；原因四，目前蓝耳病特别稳定的养殖场较少，而蓝耳病能够增加链球菌病和副猪嗜血杆菌病的发病率。目前市面上有3种疫苗，第一种猪链球菌三价灭活疫苗，该疫苗血清型覆盖面广，含猪链球菌2型、7型、马链球菌兽疫亚种；第二种猪链球菌二价灭活疫苗，该疫苗含猪链球菌2型和马链球菌兽疫亚种；第三种猪败血型链球菌活疫苗，由于链球菌血清型众多，活疫苗容易导致细菌重组与变异，因此不推荐使用链球菌活疫苗。猪链球菌血清型复杂，各血清型之间交叉保护能力差，而国内链球菌主要流行的血清型为2型、7型、9型及马链球菌兽疫亚种，因此猪链球菌三价灭活疫苗具有绝对的优势。

4.3 药物治疗

在做好疫苗防控后，针对个别发病猪采用药物治疗。药物采用猪场较少使用的抗生素用于治疗，效果较好。猪场特别是大规模猪场，需要对自己猪场细菌的药物敏感性进行摸底，筛选出比较敏感的药物，而这种药物只用在发病猪的治疗上，在平常的预防保健禁止使用（这一方案在之前猪场是无法做到，原因是药物多为复方抗生素和饲料中的药物添加，而目前国家对药物中违规添加查处较严，抗生素均属于单方药物，且大养殖场均有自己的饲料加工场可以严格控制饲料中抗生素的种类）。

[1]王宇婷，王云光，吴丹丹，等.2007-2015年黑龙江省猪链球菌病分子流行病学调查[J].黑龙江畜牧兽医，2016（9）：109-111.

[2]鞠爱萍.苏中地区猪链球菌分子流行病学调查及猪链球菌2型反应调控因子RevS缺失株的构建[D].南京：南京农业大学，2007.

[3]王巍.四川地区猪链球菌流行调查及其病原特性研究[D].雅安：四川农业大学，2015.

[4]刘志科，张秋雨，陈创夫.猪链球菌病原的分离鉴定与药敏试验[J].养猪，2017（2）：105-108.

[5]马国福.猪链球菌的分离鉴定及药敏试验[J].中国动物保健，2016（9）：80-81.

[6]张维谊，王晓旭，宁昆，等.猪源猪链球菌耐药情况分析[J].中国农业信息，2016（6）：101-103.

[7]龚团莲.26株猪链球菌对抗菌药物的敏感性分析[J].畜牧与饲料科学，2016，37（1）：16-17.

[8]Liu H S,Zhao Z Q,Xi X J,et al.Occurrence of Pasteurella multocida among pigs with respiratory disease in China between 2011 and 2015[J].Irish Veterinary Journal,2017,70(2):2-6.

（编辑：郭玉翠）

S858.28

A

1002-1957(2017)04-0107-02

2017-07-05

易新健（1988-），男，湖南长沙人，硕士，主要从事动物传染病学研究工作.E-mail：yixinjian2007@163.com

陈申秒（1983-），男，助理研究员，硕士，主要从事动物传染病的诊断与防治工作.E-mail：csmiao.science@163.com