替米考星对水产致病菌体内外抗菌和对异育银鲫毒性作用

刘永涛，李乐，杨红，艾晓辉*

(1.中国水产科学研究院长江水产研究所, 武汉 430223；2.淡水水产健康养殖湖北省协同创新中心，武汉 430223；3.中国水产科学研究院农业部水产品质量安全控制重点实验室，北京 100141)



替米考星对水产致病菌体内外抗菌和对异育银鲫毒性作用

刘永涛1,2,3，李乐3，杨红1,2，艾晓辉1,2,3*

(1.中国水产科学研究院长江水产研究所, 武汉 430223；2.淡水水产健康养殖湖北省协同创新中心，武汉 430223；3.中国水产科学研究院农业部水产品质量安全控制重点实验室，北京 100141)

研究替米考星对3种水产致病菌体外抗菌作用，替米考星对嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophilia) 感染异育银鲫的防治效果和替米考星对异育银鲫的急性毒性作用。应用二倍稀释法研究质量浓度为0.125、0.25、0.5、1、2、4、8、16、32、64、128 mg/L的替米考星对嗜水气单胞菌(Aeromonashyolrophila)、温和气单胞菌(Aeromonassobria)和鳗弧菌(Vibrioanguillarum)的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)，并计算MBC/MIC比值。腹腔注射0.3 mL浓度为9×108CFU/mL的嗜水气单胞菌菌液感染体质量为(217.65±25.26)g的异育银鲫，分别在感染后1、24和48 h以0、50、100、150 mg/kg鱼体重的剂量分别口灌替米考星，计算替米考星对嗜水气单胞菌感染异育银鲫的保护率。应用剂量为0、260、300、340、387、440 mg/kg的替米考星口灌异育银鲫，记录异育银鲫的死亡率，计算替米考星对异育银鲫的半数致死量LD50。结果表明，替米考星对嗜水气单胞菌、温和气单胞菌和鳗弧菌的MIC分别为4.00、0.50和1.00 mg/L，MBC分别为64、32和32 mg/L，MBC/MIC比值分别为16、64和32；100和150 mg/kg鱼体重剂量的替米考星对嗜水气单胞菌人工感染异育银鲫的保护率可达100%；替米考星对异育银鲫口灌的24、48、72和96 h的半数致死剂量LD50分别为344.0、306.3、298.5和298.5 mg/kg。替米考星对3种水产致病菌具有一定的体外抗菌效果；替米考星对嗜水气单胞菌感染的异育银鲫具有一定的保护作用；但同时替米考星对异育银鲫也具有中等毒性。本研究可为替米考星在水产养殖中的合理使用提供参考。[中国渔业质量与标准，2017,7(4):51-58]

替米考星；异育银鲫；水产致病菌；防治效果；毒性

替米考星(tilmicosin)是泰乐菌素的衍生物，属于大环内酯类抗生素，被广泛用于治疗牛、猪和鸡等畜禽的呼吸道疾病。替米考星对多杀性巴氏杆菌(Pasteurellamultocida)和溶血性巴氏杆菌(Pasteurellahemolytica)的抗菌作用比同属大环内酯类的泰乐菌素强[1-2]；但替米考星被用作抗胸膜肺炎放线杆菌时，比泰妙菌素、氨苄青霉素和四环素的耐药性低[3]。替米考星及其衍生物也被用于治疗水产动物的疾病[4]。国外学者Plumb等[5]报道了斑点叉尾鮰6种革兰氏阴性菌病原菌，爱德华氏菌(Edwardsiellaictaluri)、迟钝爱德华菌(Edwardsiellatarda)、产气单胞菌(Aeromonasspp.)、嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)、温和气单胞菌(Aeromonassobria)和假单胞菌(Pseudomonasspp.)中有40.4%对替米考星敏感。以添加200、600和1 000 mg/kg替米考星的饲料饲喂大西洋鲑与不添加空白组在采食和生长方面无显著性差异[4]。王秀珍等[6]提出与替米考星同属大环内酯类的北里霉素是防治草鱼“三病”的有效药物。周邦靖[7]报道大环内酯类药物被广泛用于治疗和预防畜禽、水产品的微生物感染，同时亚临床治疗剂量则用于促生长[8]。为进一步探讨大环内酯类药物在水产养殖业中的应用，本实验开展了替米考星对水产致病菌体外抗菌作用，替米考星对嗜水气单胞菌人工感染异育银鲫防治效果和替米考星对异育银鲫的急性毒性研究，以期为大环内酯类药物替米考星在水产上的应用提供基础数据和科学依据。

1 材料与方法

1.1 供试菌种与试验鱼

嗜水气单胞菌和温和气单胞菌由中科院武汉水生生物研究所惠赠，从患病异育银鲫体内分离；鳗弧菌(Vibrioanguillarum)由中国水产科学研究院黄海水产研究所惠赠，从患病大菱鲆体内分离。

异育银鲫，体质量(217.65±25.26)g，由长江水产研究所窑湾试验场提供，运输至实验室后，用2%食盐水消毒10 min，然后放置于已清洗并用高锰酸钾消毒水族箱(100 cm×80 cm×60 cm)中暂养1周，实验用水为经曝气的自来水。采用连续充氧，保持水中溶氧大于8.0 mg/L，水温(28.1±0.9)℃，暂养期间按鱼体质量的3%投喂鲫鱼饲料。每日9:00～10:00和16:00～17:00各投喂一次，日投喂总量为鱼体总体质量的6%，每天换水一次，暂养结束后，选择规格整齐、活跃、无明显病伤的个体鱼进行试验，实验前停饲24 h。

1.2 药品与试剂仪器

替米考星原料药(含量≥98%，宁夏多维泰瑞制药有限公司)；盐酸环丙沙星(含量≥98%，山东华驰化工有限公司)；强力霉素(含量≥98.5%，扬州联搏药业有限公司)；乙醇(分析纯，天津市德恩化学试剂有限公司)；牛肉膏、蛋白胨、酸水解酪蛋白、葡萄糖、琼脂、磷酸氢二钾、氯化钠等均为国产分析纯。氨氮快速测试盒、亚硝酸盐快速测试盒、硫化氢快速测试盒、溶解氧快速测试盒(厦门北大泰普科技有限公司)。主要仪器有Percival I-36VL培养箱(美国Percival公司)，Labconco Class Ⅱ Type A2生物安全柜(美国Labconco公司)，MS-H-S型磁力搅拌器(美国Scilogex公司)，Sartorius PB-10型酸度计(德国赛多利斯公司)，麦氏比浊管(温州市康泰生物科技有限公司)。

水产致病菌培养基包括淡水鱼类液体培养基(FWA)和淡水鱼类琼脂培养基2种。 FWA的配制：MgSO4·7 H2O 0.05 g，牛肉膏 2.5 g，NaCl 5.0 g，K2HPO40.2 g，葡萄糖1.0 g，蛋白胨5.0 g，酵母膏2.5 g，H2O 1 000 mL，pH 7.2～7.4。淡水鱼类琼脂培养基的配制：MgSO4·7 H2O 0.05 g，牛肉膏 2.5 g，NaCl 5.0 g，K2HPO40.2 g，葡萄糖 1.0 g，蛋白胨5.0 g，酵母膏 2.5 g，琼脂粉 1.0 g，H2O 1 000 mL，pH 7.2～7.4。

水产致病菌抑菌和杀菌试验所用药物溶液的配制：替米考星药液的配制，取替米考星原料药0.256 g，用适量乙醇溶解后用灭菌蒸馏水定容至100 mL，配制成质量浓度为2 560 mg/L的替米考星药液，室温放置，现用现配。对照药物盐酸环丙沙星和强力霉素药液的配制，分别称取盐酸环丙沙星和强力霉素各0.256 g，分别用灭菌蒸馏水溶解并定容至100 mL，分别配制成质量浓度为2 560 mg/L的盐酸环丙沙星和强力霉素药液，室温放置，现用现配。

替米考星对嗜水气单胞菌感染的防治试验和对异育银鲫毒性试验用剂替米考星悬浊液的配制：用10 mL的无水乙醇将替米考星溶解后，用灭菌蒸馏水稀释并定容至100 mL，置磁力搅拌器上混匀配制成质量浓度为0.1 g/mL的悬浊液，使用时放置在磁力搅拌器上，边搅拌边使用。

1.3 实验方法

1.3.1 替米考星对水产致病菌的体外抗菌作用

将3种水产致病菌分别接种于FWA斜面培养基，置28 ℃恒温培养箱中培养24 h。取出后用0.85%生理盐水洗下菌苔，以麦氏标准比浊以确定菌液浓度，并用0.85%灭菌生理盐水稀释菌液，获终浓度为3×105CFU/mL的应用菌液。参考戴自英[9]试管两倍稀释法并略做改进，3种菌各取试管16支，向装有4.5 mL的液体培养基中加入0.5 mL原药液，使其终浓度为256 mg/L，然后再以两倍稀释法依次稀释药液至0.125 mg/L。替米考星的对照管：每组设不含药物加入等量乙醇溶液及等量菌液的阳性对照管，以及不含药物也不含菌的阴性对照管各一支，各管均设有一个平行。盐酸环丙沙星和强力霉素的对照管：每组设不含药物而含等量菌液的阳性对照管，以及不含药物也不含菌的阴性对照管各一支，各管均设有一个平行。将制备好的试管放入恒温培养箱中，28 ℃培养24 h。

最小抑菌浓度的测定(MIC)：培养24 h后，取出后根据试管内培养基的混浊度，判断菌体生长情况，试管内以无菌生长的最小药液浓度为药物对该菌的MIC，每个MIC试验重复3次。

最小杀菌浓度的测定(MBC)：分别自培养48 h观察药物最低抑菌浓度以上未见细菌生长的各试管中吸取0.1 mL培养物，接种到不含药物的平皿琼脂培养基上，置28 ℃恒温培养箱中培养24 h，以少于5个菌落的相应药液浓度为药物对该菌种的最小杀菌浓度，每个MBC试验重复3次。

MBC/MIC比率计算：分别用替米考星及对照药物盐酸环丙沙星和强力霉素对3种致病菌的MBC值与MIC值作比值，将其作为评价替米考星及其对照药物盐酸环丙沙星和强力霉素抗菌效率的参数。

1.3.2 替米考星对嗜水气单胞菌人工感染异育银鲫的防治效果

嗜水气单胞菌复壮：将嗜水气单胞菌反复接种异育银鲫，复壮，再分离，鉴定后接种于FWA液体培养基中，置于28 ℃培养箱中培养24 h备用。

嗜水气单胞菌菌株毒力测定：参照周邦靖[7]的方法，先确定使试验异育银鲫发生100%死亡和不死亡的两个剂量，然后根据这两个剂量间隔确定试验组剂量。腹腔攻毒，观察7 d，每天记录症状及死亡情况。将新培养的菌株斜面用灭菌0.85%的生理盐水洗下后，用麦氏比浊管测定菌液浓度使其终浓度为9×108CFU/mL，然后依次稀释101、102、103、104倍，配成5个浓度梯度的菌液。

人工感染及治疗试验：将暂养后体健无伤的异育银鲫随机分成5个组并设1个对照组，每组10尾鱼，腹腔注射0.3 mL菌液，对照组注射等量的0.85%生理盐水。注射后放入(100 cm×80 cm×60 cm)水族箱中。连续充氧保持水中溶氧大于8.0 mg/L。每隔24 h观察一次，连续观察7 d，试验期间不投喂、不换水，随时观察鱼发病情况，记录试验鱼死亡数量及其症状，并对注射菌液浓度为9×107CFU/mL和9×104CFU/mL高低剂量组的两个水族箱(分别定为2#和5#)中水质变化情况进行监测，监测采用水质快速检测试剂盒进行，水温和pH采用Sartorius PB-10型酸度计进行测定。以Reed-Muench法计算半数致死量(LD50)[7]。于攻毒后1、24和48 h 分3次给异育银鲫口灌替米考星悬浊液(试验组分别按50、100和150 mg/kg的剂量口灌，阳性和阴性对照组均不口灌替米考星)，每日观察记录症状和死亡情况，连续观察7 d，并对死亡鱼作病菌分离和腹水涂片镜检，计算替米考星对人工感染嗜水气单菌异育银鲫的保护率。保护率=存活数/总数×100%。

1.3.3 替米考星对异育银鲫的急性毒性作用

试验分组：将健康无伤的异育银鲫随机分为6组，包括5个浓度组和1个对照组，各浓度组设3个平行，每组10尾异育银鲫，分别放入16只(100 cm×80 cm×60 cm)的水族箱中。试验用水为经曝气的自来水，连续充氧保持水中溶氧大于8.0 mg/L，水温(28.1±0.9) ℃，每日光照12 h。

试验方法：先按急性毒性试验的方法进行24 h预试验，以较大的剂量间隔染毒，找出0%～100%的致死剂量范围[10]。正式试验按照改良寇氏法进行，以预试验所得0%～100%的致死剂量为基础，按照等对数间距法选择一定的浓度梯度作正式急性毒性实验。分别设置5个质量浓度梯度，同时设1个对照组及3个平行组，数据取平均值。试验开始后连续观察中毒症状、死亡时间、数量，并及时捞出死鱼，记录24、48和96 h各浓度异育银鲫的存活和死亡情况。试验期间不投喂，每24 h换水1次，换水量为50%。试验过程中死鱼的判断标准为：以呼吸停止及对外界刺激无反应作为死亡的判断依据，即当试验鱼中毒后鳃盖完全停止活动，用玻璃棒轻轻刺激鱼体5 min无反应，即确定为死亡[11-12]。用氨氮快速测试盒、亚硝酸盐快速测试盒、硫化氢快速测试盒、溶解氧快速测试盒和Sartorius PB-10型酸度计分别测定试验期间水中溶解氧、氨氮、亚硝酸盐、硫化氢和试验期间的水温和pH。

根据急性毒性试验结果，采用改良寇氏法分别计算得出替米考星对异育银鲫在24、48和96 h接触时间内的半数致死量(LD50)。

logLD50=Xk-i(Σp-0.5)

式(1)

式(1)中，Xk为最高剂量组对数值；Σp为各组死亡率总和；i为相邻两组剂量对数值之差。

2 结果与分析

2.1 替米考星对水产致病菌的体外抗菌作用

如表1～表3所示，替米考星对嗜水气单胞菌、温和气单胞和鳗弧菌的MIC分别为4.00、0.50和1.00 mg/L， MBC分别为64、32和32 mg/L，MBC/MIC的比值分别为16、64和32。对照药物盐酸环丙沙星对3种水产致病菌的MIC分别为0.50、0.25和0.50 mg/L，MBC为8、4和4 mg/L，MBC/MIC比值分别为16、16和8；强力霉素对3种水产致病菌的MIC分别为0.50、0.25和0.50 mg/L，MBC为8、4和4 mg/L，MBC/MIC比值分别为16、16和8。结果显示，替米考星对上述3种水产致病菌的抑制和杀灭作用不如对照药物盐酸环丙沙星和强力霉素。

表1 替米考星和对照药物对水产致病菌的MICTab.1 The MIC of tilmicosin and reference drugs against aquatic pathogenic bacteria mg·L-1,n=3

表2 替米考星和对照药物对水产致病菌的MBCTab.2 The MBC of tilmicosin and reference drugs against aquatic pathogenic bacteria mg·L-1,n=3

表3 替米考星和对照药物对水产致病菌MBC/MIC比率Tab.3 The MBC/MIC of tilmicosin and reference drugs against aquatic pathogenic bacteria mg·L-1,n=3

2.2 替米考星对嗜水气单胞菌人工感染异育银鲫防治效果

2.2.1 试验期间水质变化情况

记录嗜水气单胞菌人工感染异育银鲫后1～7 d，2#(注射菌液浓度为9×107CFU/mL)和5#(注射菌液浓度为9×104CFU/mL)水箱中水质的变化情况，试验期间2#和5#水箱中水温分别为(28.2±1.1)℃和(28.0±1.2)℃，pH分别为7.15～7.64和7.33～7.63，溶解氧质量浓度均>8.0 mg/L，H2S质量浓度均<0.05 mg/L，氨氮质量浓度分别为0.6～0.9 mg/L和0.6～1.2 mg/L，亚硝酸盐质量浓度分别为0.05～0.30 mg/L和0.05～0.25 mg/L，测定的上述水质指标均符合中国渔业水质标准对相关指标的要求[13]。

2.2.2 嗜水气单胞菌对异育银鲫的半数致死剂量LD50的测定及症状观察

嗜水气单胞菌人工感染异育银鲫6 h后，注射菌液浓度为9×108CFU/mL的部分试验鱼在水中呈呆滞的抽搐状游动。将死鱼捞出观察，鳍基部和鳍条充血发红，腹部肿胀，眼球突出，解剖后观察体腔充满带血的腹水，肾脏变软、肿大，肝脏灰白带有小出血点，后肠及肛门常有出血症状，肠内有明显溢血和淡红色的黏液。

供试菌LD50的计算按Reed-Muench二氏计算法进行。

LD50的地位比值=

50%致死量的稀释度：lgLD50(dil)=lg(比LD50较大剂量的稀释倍数)+ lgd×地位比值=1+1×0.5=1.5。d代表稀释系数。

LD50(dil)=31.62，即将原菌液稀释31.62倍，每尾接种0.3 mL即为50%致死量。

50%致死量的细菌数：

lgLD50=lg(比LD50较大剂量的细菌数)-lgd×地位比值=6.68-0.5=6.18。

LD50=1.5×106，即每个LD50含嗜水气单胞菌1.5×106个。

由表4可知，第1组在攻毒3 h后鱼出现不安，8 h 后鱼鳍基部及腹部出现充血、发红、肛门红肿，在24 h内死亡率为90%，48 h内死亡率为100%。第2组攻毒后7 d内死亡70%，第3组和第4组7 d内死亡率分别为30%和10%，第5组和对照组试验结束时均未死鱼。

表4 人工感染嗜水气单胞菌异育银鲫的死亡率Tab.4 Mortality of Carassius auratus gibelio infected by Aeromonas hydrophilia n=10

注：菌液注射量为0.3 mL，对照组为注射0.3 mL 0.85%注射盐水。

2.2.3 替米考星对嗜水气单胞菌人工感染异育银鲫的保护作用

从表5看出，阳性对照组攻毒后没有给药治疗，结果异育银鲫第5 天时死亡率为100%，而阴性对照组异育银鲫均没有死亡。50 mg/kg给药治疗组死亡率为40%，相对保护率为60%；100和150 mg/kg给药治疗组保护率均为100%。

表5 替米考星对嗜水气单胞菌人工感染异育银鲫保护作用Tab.5 Protective effect of tilmicosin against the infection by Aeromonas hydrophilia on Carassius auratus gibelio n=10

2.3 替米考星对异育银鲫的急性毒性作用

由表6可知，260 mg/kg体重剂量组口灌替米考星后，24 h异育银鲫的死亡率为0，48 h死亡率为10%，96 h死亡率也未增加；300 mg/kg体重剂量组口灌替米考星后，24 h异育银鲫死亡率为40%，48 h死亡率为60%，72 h和96 h死亡率均未增加；340 mg/kg体重剂量组口灌替米考星后，24 h异育银鲫死亡率为60%，48 h死亡率为80%，72 h和96 h死亡率均未增加。387 mg/kg体重剂量组口灌替米考星后，24 h死亡率为60%，48 h死亡率为80%，72 h时死亡率为100%；最高浓度组440 mg/kg体重剂量组在给药后2 h有的异育银鲫游动迟缓，4 h就有异育银鲫出现死亡现象，24 h时死亡率达到80%，48 h的死亡率为100%。试验进行4 d 后，再连续观察3 d，各试验组均无继续死亡的异育银鲫。

表6 替米考星对异育银鲫的急性毒性作用Tab.6 Acute toxicity effect of tilmicosin on Carassius auratus gibelio n=10

按照联合国世界卫生组织(WHO)推荐的外来化合物急性毒性分级，替米考星对异育银鲫的口灌急性毒性属中等毒性[14]。试验期间，水温为27.2～29.0 ℃，pH为7.15～7.64，氨氮质量浓度0.4～0.9 mg/L，亚硝酸盐质量浓度0.005～0.25 mg/L，H2S质量浓度<0.05 mg/L，水质指标也符合中国渔业水质标准对相关指标的要求[13]。

3 讨论

目前国内外报道的替米考星对致病菌的抑制研究主要集中于畜禽，如Watkins等[15]报道替米考星对化脓棒状杆菌(Corynebacteriumpyogenes)和金色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的MIC分别为0.04和0.78 mg/L。替米考星对多杀性巴氏杆菌(Pasteurellamultocida)和溶血性曼氏杆菌(Mannheimiahaemolytica)的MIC分别为3.125和6.25 mg/L[16]。但替米考星对水产动物致病菌的抑制研究报道较少。Plumb等[5]报道从斑点叉尾鮰体内分离的6株致病菌中有40.4%的菌株对替米考星敏感。替米考星对从鲑肾中分离的12株杆菌也表现出了良好的抑菌效果(MIC为0.25～2 mg/L)[4]，但对罗非鱼链球菌的抑菌效果则欠佳[17-18]。本研究中替米考星对3种水产致病菌，嗜水气单胞菌、温和气单胞菌和鳗弧菌的MIC分别为4.00、0.50和1.00 mg/L，与替米考星对鲑肾杆菌的MIC相似[4]，但高于本研究中的对照药物盐酸环丙沙星和强力霉素的MIC，即替米考星的抑菌作用弱于本试验中的2种对照药物。因此，相较于2种对照药物，替米考星更适合作为预防药物使用。鉴于药物的Cmax与MIC的比值大于4∶1时被认定为该药物有效[19]，本研究中替米考星对3种水产致病菌，嗜水气单胞菌、温和气单胞菌和鳗弧菌的Cmax与MIC的比值分别为4.84、38.72和19.36，均大于4∶1(已知替米考星在鲫体内最大血药浓度Cmax为19.36 mg/L[20])，这说明替米考星对鲫由嗜水气单胞和温和气单胞菌引起的疾病具有较好的治疗效果。从替米考星对嗜水气单胞菌感染的保护试验中也可以看出，50 mg/kg体重剂量的替米考星口灌异育银鲫对嗜水气单胞菌攻毒的相对保护率为60%，而100 mg/kg和150 mg/kg两个剂量的替米考星对嗜水气单胞菌攻毒的异育银鲫的保护率均可达100%，这说明适当剂量的替米考星在预防和治疗嗜水气单胞菌感染具有一定的效果。本试验采用了助溶剂溶解替米考星，这可能与实践生产存有一定差异，在生产上是否保护率还会如此高还要进一步验证。

替米考星对异育银鲫具有一定的毒性，且致死率和浓度及接触时间有相关性，随着浓度的增加及处理时间的延长，异育银鲫的死亡率均呈上升趋势，72 h后各试验组异育银鲫的死亡率不再增加。按照WHO推荐的外来化合物急性毒性分级，替米考星对异育银鲫的半数致死剂量LD50为298.5～344.0 mg/kg，说明其对异育银鲫有中等毒性。按照新化学物质对鱼类急性毒性危害分级标准[21]，闫兆阳等[22]报道了替米考星对斑马鱼的半数致死浓度(LC50)为16.26 mg/L，其半数效应浓度(EC50)为6.424 mg/L，说明其对斑马鱼的急性毒性属中等毒性。替米考星在不同动物中表现出不同的毒性程度。替米考星对空腹大鼠的半数致死量LD50>800 mg/kg，非空腹LD50>2 000 mg/kg[23]，这大于该药物对异育银鲫的毒性。李宏胜等[24]研究了磷酸替米考星对小鼠的急性毒性试验，结果表明口服磷酸替米考星毒性很低(LD50=2 071 mg/kg)。按照WHO推荐的外来化合物急性毒性分级，替米考星对大鼠和磷酸替米考星对小鼠口灌急性毒性属低毒。在水产养殖中使用替米考星应注意其使用剂量，在保证有效的同时还应考虑其对鱼体的毒性；另一方面应从分子水平进一步研究替米考星对水产动物的毒性机理，为替米考星的有效开发和合理使用提供科学依据。

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水产品技术性贸易措施通报

日本有关拟定噻呋酰胺最大残留限量的通报(G/SPS/N/JPN/489)

日本健康、劳动和福利部于2016年12月19日发布了G/SPS/N/JPN/489号通报，标题为：拟定杀虫剂噻呋酰胺最大残留限量。

该通报称，日本拟修订杀虫剂噻呋酰胺(Thifluzamide)的最大残留限量(MRLs)。其中与水产相关的内容是将噻呋酰胺在水产品中的MRLs由2 mg/kg修订为1 mg/kg。

拟批准日期和公布日期：评议期截止日后尽快。

通报全文获取地址：http://members.wto.org/crnattachments/2016/SPS/JPN/16_5214_00_e.pdf。

巴西有关冷冻鱼质量标准的通报和巴西有关冷冻鱼特性及质量标准技术法规的通报(G/TBT/N/BRA/701和G/SPS/N/BRA/1213)

巴西农畜食品供应部(MAPA)于2016年12月21日发布了G/TBT/N/BRA/701号通报，标题为冷冻鱼质量标准；于2017年1月30日又发布了G/SPS/N/BRA/1213号通报，标题为：冷冻鱼特性及质量标准技术法规。

该通报称，巴西于2016年12月15日发布136号法规草案，规定了冷冻鱼适用特性及质量标准。将冻鱼肌肉中钠、钾含量分别规定为每100 g最多为134 mg和502 mg；水分和蛋白质成分的比值规定为最多为6.0。

拟批准日期和公布日期： 评议期截止日后尽快。

通报全文获取地址：http://members.wto.org/crnattachments/2016/SPS/JPN/16_1875_00_e.pdf。

新法规拟批准日期和公布日期：评议期结束后再定。

澳大利亚有关暂停进口生虾的紧急通报(G/SPS/N/AUS/412)

澳大利亚农业和水资源局于2017年1月10日发布了G/SPS/N/AUS/412号通报，标题为：关于暂停进口生虾的通知。

该通报称，澳大利亚农业和水资源局决定自2017年1月9日起对从除新喀里多尼亚外所有国家的生虾及其产品(包括生虾或虾肉、可供人食用的湿料或干料腌制虾或烤肉棒串成的虾串)采取为期6个月的暂停进口措施，暂停进口不包含虾肉加工成的饺子、春卷、三明治和其他类似产品及已经裹粉裹浆的面包虾产品。

拟公布日期： 2017年12月中旬。

通报全文获取地址：http://www.legislation.gov.au/Details/F2017L00034。

韩国有关修改食品标准规范的通报(G/SPS/N/KOR/556)

韩国食品和药物安全部于2017年1月16日发布了G/SPS/N/KOR/556号通报，标题为：食品标准规范拟定修改案。

该通报称，韩国发布食品标准规范拟定修改案。其中，与水产品相关的内容是拟定异丁香酚(Isoeugenol)作为镇静剂使用在鱼中的最大残留限量(MRLs)为0.01 mg/kg。

拟批准日期和公布日期： 待定。

通报全文获取地址：http://members.wto.org/crnattachments/2017/SPS/KOR/17_0322_00_x.pdf。

印度有关2017年食品安全标准修改法规的通报(G/SPS/N/IND/173)

印度食品安全标准局(FSSAI)于2017年2月21日发布了G/SPS/N/IND/173号通报，标题为：2017年食品安全标准修改法规。

该通报称，印度发布2017年食品安全标准(污染物、毒素及残留)修改法规，详细描述了1968年杀虫剂法案禁止的杀虫剂，包括与我国标准一致的涕灭威、艾氏剂、狄氏剂、氯丹、七氯、林丹(林丹γ-六氯环己烷和γ异构体)、硫丹、克百威(50%克百威可溶粉)、灭多威(12.5%灭多威乳油及24%灭多威制剂)、磷胺(85%磷胺水溶液)、敌菌丹(80%敌菌丹粉)、福美铁、安硫磷、甲基对硫磷(50%甲基对硫磷乳油和2%甲基对硫磷粉剂)、久效磷、滴滴涕等16种农药；以及我国未规定禁用的杀螟硫磷、西玛津、倍硫磷、二嗪磷等4种农药。

拟批准和公布日期： 待定。

通报全文获取地址：http://www.fssai.gov.in/home/fss-legislation/wto-notifications/wto-sps-notifications.html。

哥斯达黎加有关出口鱼及水产品相关问卷的通报(G/SPS/N/CRI/187)

哥斯达黎加农畜部国家动物卫生局(SENASA)于2017年3月27日发布了G/SPS/N/CRI/187号通报，标题为： 出口鱼及水产品相关问卷。

该通报称，哥斯达黎加发布国家动物健康决议(SENASA-DG-R066-2016)，要求所有向哥斯达黎加出口水产品的中国企业，填写相关问卷表格并提交给哥斯达黎加进行评估以判定出口资格。

拟批准日期： 本决议通报中国主管机构后60天； 拟公布日期： 待定。

通报全文获取地址：http://members.wto.org/crnattachments/2017/SPS/CRI/17_1506_00_s.pdf。

韩国有关修订进口水产品检验法规的通报(G/SPS/N/KOR/562)

韩国食品和药物安全部于2017年4月18日发布了G/SPS/N/KOR/562号通报，标题为：进口水产品检验法规。

该通报称，韩国发布了有关《进口水产品检验法规》的修订草案。重点修订的条款包括，一是在确认冷冻水产品标识的净含量时，要求另附第7号格式的净含量检验结果表；二是针对动物用药检验项目的修订中新增了海洋双壳贝类和被囊类中麻痹性贝类毒素(PSP)的检验。

拟批准日期和公布日期：待定。

通报全文获取地址： 原文文本由WTO/TBT-SPS国家咨询中心农业部联系点向韩方索取后提供。

美国有关鲶形目鱼及其派生产品强制检验的补遗通报(G/SPS/N/USA/2171/Add.2)

美国农业部食品安全检验局(FSIS)于2017年5月2日发布了G/SPS/N/USA/2171/Add.2号通报，标题为： 鲶形目鱼及其派生产品强制检验的补遗信息。

该通报称，美国发布了新制定的《鲶形目鱼类及其制品屠宰和加工企业的合规指南》，主要包含8个部分内容，分别是检验许可(GOI)、提交标签进行审批(标签要求)、卫生执行标准(SPS)和卫生标准操作规程(卫生SOP)要求、危害分析和关键控制点(HACCP)要求、收获前标准及送往加工企业的运输、FSIS产品抽样、产品进出口要求、召回计划与食品防护计划等。该指南是FSIS以《鲶形目鱼类及其制品强制检验的最终法规》(2015年12月3日在通报G/SPS/N/USA/2171/Add.1中发布)的条款为基础，提出的帮助其国内鲶形目鱼类屠宰和加工企业更好地达到监管要求和政策的最佳规范建议。

通报全文获取地址：http://members.wto.org/crnattachments/2017/SPS/USA/17_2139_00_e.pdf。

日本有关拟定草甘膦最大残留限量的通报(G/SPS/N/JPN/514)

日本健康、劳动和福利部于2017年5月16日发布了G/SPS/N/JPN/514号通报，标题为：拟定杀虫剂草甘膦最大残留限量。

该通报称，日本拟修订杀虫剂草甘膦(Glyphosate)的最大残留限量(MRLs)。其中与水产相关的内容是将将鲑形目(如鲑和虹鳟)、鳗形目(如鳗鲡)、鲈形目(如鲣、竹荚鱼、鲭、黑鲈、海鲷和金枪鱼)和其他鱼类中草甘膦的MRLs由0.3 mg/kg降为0.01 mg/kg；将有壳软体动物、甲壳纲动物和其他水生动物中草甘膦的MRLs由3 mg/kg降低到0.01 mg/kg。

拟批准日期和公布日期： 评议期截止日后尽快。

通报全文获取地址：http://members.wto.org/crnattachments/2017/SPS/JPN/17_2249_00_e.pdf。

(全国水产标准化技术委员会秘书处 供稿)

17印度有关2017年食品安全标准修改法规的通报G/SPS/N/IND/1732017-02-21食品安全18日本有关拟定硅氟唑最大残留限量的通报G/SPS/N/JPN/4862016-12-19食品安全19日本有关拟定噻呋酰胺最大残留限量的通报G/SPS/N/JPN/4892016-12-19食品安全20日本有关拟定咯菌腈最大残留限量的通报G/SPS/N/JPN/5042017-04-13食品安全21日本有关拟定兽药螺旋霉素最大残留限量的通报G/SPS/N/JPN/5072017-04-13食品安全22日本有关拟定恶唑酮菌最大残留限量的通报G/SPS/N/JPN/5082017-04-13食品安全23日本有关拟定多效唑最大残留限量的通报G/SPS/N/JPN/5112017-05-16食品安全24日本有关拟定恶唑磷最大残留限量的通报G/SPS/N/JPN/5132017-05-16食品安全25日本有关拟定草甘膦最大残留限量的通报G/SPS/N/JPN/5142017-05-16食品安全26日本有关拟定氟酰胺最大残留限量的通报G/SPS/N/JPN/5162017-05-16食品安全27韩国有关消费化学品和生物杀菌剂安全管理法草案的通报G/TBT/N/KOR/7022017-01-12确保所有公民以安全的方式使用生物杀菌剂28俄罗斯有关修改鱼等动物饲料粉中砷含量的通报G/SPS/N/RUS/1362017-02-08食品安全29泰国有关修订食品内杀虫剂最大残留限量的通报G/SPS/N/THA/183/Rev.12017-01-27食品安全30土耳其有关动物源食品药理活性物质分类及最大残留限量的通报G/SPS/N/TUR/65/Add.12017-01-23补遗31美国有关拟否决撤销毒死蜱许可限量的通报G/SPS/N/USA/2912/Add.12017-04-24补遗卫生防疫类32澳大利亚有关暂停进口生虾的通报G/SPS/N/AUS/4122017-01-10食品安全、动物健康33澳大利亚有关暂停进口生虾豁免决定的通报G/SPS/N/AUS/412/Add.12017-02-13补遗34澳大利亚有关暂停进口生虾豁免决定的通报G/SPS/N/AUS/412/Add.22017-02-27补遗35澳大利亚有关暂停进口生虾豁免决定的勘误通报G/SPS/N/AUS/412/Add.2/corr.12017-02-28补遗36澳大利亚有关修改暂停进口生虾豁免决定的通报G/SPS/N/AUS/412/Add.32017-04-05补遗37澳大利亚有关暂停进口生虾豁免决定的补遗通报G/SPS/N/AUS/412/Add.42017-04-20补遗

38澳大利亚有关暂停进口生虾豁免决定的补遗通报G/SPS/N/AUS/412/Add.52017-05-18补遗39澳大利亚有关暂停进口生虾豁免决定的补遗通报G/SPS/N/AUS/412/Add.62017-05-31补遗40澳大利亚有关进口食用虾及虾产品生物安全建议的通报G/SPS/N/AUS/4222017-05-17动物健康41哥斯达黎加有关出口鱼及水产品相关问卷的通报G/SPS/N/CRI/1872017-03-27食品安全、动物健康42欧盟有关制定经第三国转运渔产品卫生证书的通报G/SPS/N/EU/1952017-02-06食品安全43韩国有关水生生物疾病控制法案执行规则的通报G/SPS/N/KOR/5542016-12-16动物健康44沙特阿拉伯有关水产品出口企业和控制机构要求的通报G/SPS/N/SAU/2712017-05-18食品安全45泰国有关鱼类和渔业产品进口许可文件类型和类别的通报G/TBT/N/THA/4922016-11-30防止进口渔业产品和从事非法捕鱼活动的外国船只进入泰国污染物管理类46南非有关食品中真菌毒素公差管理法规的通报G/TBT/N/ZAF/204/Rev.12016-09-26保护人类健康安全47南非有关食品中金属最高水平法规的通报G/TBT/N/ZAF/2112016-09-19保护人类健康安全外来物种入侵类48欧盟有关修改外来入侵物种名单的通报G/SPS/N/EU/2012017-03-06保护国家免受有害生物的其他危害49日本有关修改外来入侵物种监管生物名单的通报G/SPS/N/JPN/5192017-05-17动物健康加工及产品类50阿曼等海湾国家有关罐装太平洋鲑鱼要求的通报G/TBT/N/ARE/359、G/TBT/N/BHR/473、G/TBT/N/KWT/355、G/TBT/N/OMN/298、G/TBT/N/QAT/471、G/TBT/N/SAU/976、G/TBT/N/YEM/752017-04-06消费者健康

51阿曼等海湾国家有关速冻龙虾技术法规草案的通报G/TBT/N/ARE/331、G/TBT/N/BHR/451、G/TBT/N/KWT/333、G/TBT/N/OMN/271、G/TBT/N/QAT/447、G/TBT/N/SAU/953、G/TBT/N/YEM/532016-08-25食品安全52巴西有关动物源产品注册指南的通报G/TBT/N/BRA/676/Add.12017-01-25补遗53巴西有关冷冻鱼特性及质量标准技术法规的通报G/SPS/N/BRA/12132017-01-30食品安全54巴西有关冷冻鱼质量标准的通报G/TBT/N/BRA/7012016-12-21质量要求、消费者保护和信息55巴西有关冷冻鱼质量标准的补遗通报G/TBT/N/BRA/701/Add.12017-02-20补遗56瑞士有关海豹产品上市条件的通报G/TBT/N/CHE/2132017-02-01使瑞士的措施与欧盟关于海豹产品贸易的适用法律保持一致,考虑到动物福利57瑞士有关海豹产品上市条件的通报G/TBT/N/CHE/213.Corr.12017-02-08使瑞士的措施与欧盟关于海豹产品贸易的适用法律保持一致,考虑到动物福利58埃及有关罐装金枪鱼和鲣鱼标准的补遗通报G/TBT/N/EGY/74/Add.22016-08-15补遗59埃及有关咸鱼标准的补遗通报G/TBT/N/EGY/1/Add.12016-08-15补遗60欧盟有关修改加工动物蛋白规定的通报G/SPS/N/EU/2102017-06-02食品安全、动物健康、保护国家免受有害生物的其它危害61欧盟有关修改鱼粉及鱼油定义的通报G/SPS/N/EU/2112017-06-02食品安全62印度尼西亚有关金枪鱼、沙丁鱼和鲭鱼罐头标准的通报G/TBT/N/IDN/1132017-02-10提高竞争力、实现质量保证和产品安全、保护人类健康63土耳其有关食品辐照法规的通报G/TBT/N/TUR/842016-11-18保护人类健康安全64乌干达有关浓缩鱼蛋白规范的通报G/TBT/N/UGA/5882016-09-19促进贸易、质量要求、保护人类健康安全、防止欺诈行为和消费者保护65乌干达有关炸鱼规范的通报G/TBT/N/UGA/5892016-09-19促进贸易、防止欺诈行为和消费者保护、保护人类健康安全、质量要求

66乌干达有关冷冻龙虾尾规范的通报G/TBT/N/UGA/5902016-09-19促进贸易、防止欺诈行为和消费者保护、保护人类健康安全质量要求67乌干达有关罐装油浸金枪鱼规范的通报G/TBT/N/UGA/5932016-11-02保护人类健康安全、防止欺诈行为和消费者保护68美国有关暂停制定鲶鱼和鲶鱼产品自愿性等级标准的通报G/TBT/N/USA/1166/Add.12017-01-25补遗69南非有关活龙虾强制规范的补遗通报G/TBT/N/ZAF/201/Add.12016-09-19补遗标签标识类70厄瓜多尔有关批准家用杀虫剂标签技术法规的通报G/TBT/N/ECU/288/Add.12017-01-23补遗71美国有关修订肉类和家禽产品营养素标签及更新常规消费参考量的通报G/TBT/N/USA/12642017-01-26防止欺诈行为和消费者保护72美国有关修订肉类和家禽产品营养素标签及更新常规消费参考量的补遗通报G/TBT/N/USA/1264/Add.12017-02-24补遗有机产品管理类73欧盟有关修订有机水产动物饲料法规的通报G/TBT/N/EU/4552017-02-16动物健康74韩国有关促进环境友好型农业和渔业及管理和支持有机食品法案实施令的通报G/TBT/N/KOR/7082017-02-16保护人类健康安全75美国有关国家列表日落修订2016的通报G/TBT/N/USA/1054/Add.12016-08-05补遗投入品管理类76欧盟有关保证执行食品饲料法等法规进行官方控制法规草案的通报G/SPS/N/EU/43/Add.22017-04-26补遗77肯尼亚有关罗非鱼复合饲料规范的通报G/TBT/N/KEN/5042016-11-23质量要求、保护人类健康安全检测方法类78哥斯达黎加有关水产品中孔雀石绿检测的通报G/SPS/N/CRI/1832017-01-11食品安全,动物健康79欧盟有关饲料内二恶英和多氯联苯分析要求的通报G/SPS/N/EU/1782017-01-10食品安全80欧盟有关食品内二恶英和多氯联苯分析要求的通报G/SPS/N/EU/1792017-01-10食品安全81韩国有关边境食品检验法规拟定修改案的通报G/SPS/N/KOR/5572017-02-06食品安全

82韩国有关修订进口水产品检验法规的通报G/SPS/N/KOR/5622017-04-18食品安全83韩国有关修订食品和药品测试实验室评估法规的通报G/TBT/N/KOR/7142017-04-18保护消费者和促进公众健康84土耳其食品痕量元素和污染物水平控制取样与分析方法的通报G/TBT/N/TUR/832016-11-04保护人类健康安全负责任渔业规范类85墨西哥有关海龟逃生装置技术规范的通报G/TBT/N/MEX/3382016-12-19以保护海龟种群及减少这些生物的偶然捕获86墨西哥有关太平洋蓝鳍金枪鱼水产养殖责任规范的通报G/TBT/N/MEX/3502017-02-07对为养殖而捕捞太平洋蓝鳍金枪鱼的许可权和特许权持有人是强制性的其他综合型通报87澳大利亚有关进口食品法规修改提案的通报G/SPS/N/AUS/4112016-12-22食品安全88澳大利亚有关修订澳新食品标准法典的通报G/SPS/N/AUS/4132017-01-12食品安全89澳大利亚有关进口食品检验和分析修改提案的通报G/SPS/N/AUS/4242017-05-31食品安全90加拿大有关新联邦食品检验监管架构的修订通报G/SPS/N/CAN/700/Rev.22017-01-24食品安全91加拿大有关新联邦食品检验监管架构的修订通报G/TBT/N/CAN/394/Rev.22017-01-25加强和精简加拿大所有进口或国产食品的法律机构92韩国有关食品标准规范修改案的通报G/SPS/N/KOR/5522016-12-15食品安全93韩国有关修改食品标准规范的通报G/SPS/N/KOR/5562017-01-16食品安全94韩国有关修改食品标准规范的通报G/SPS/N/KOR/5642017-05-30食品安全95美国有关鲶形目鱼及其派生产品强制检验的补遗通报G/SPS/N/USA/2171/Add.22017-05-02补遗96越南有关渔业法修改草案的通报G/SPS/N/VNM/872017-02-21动物健康

(全国水产标准化技术委员会秘书处 供稿)

The antibacterial effect of tilmicosin on aquatic pathogenic bacteriainvitroandinvivoand toxic effect of tilmicosin onCarassiusauratusgibelio

LIU Yongtao1,2,3, LI Le3, YANG Hong1,2, AI Xiaohui1,2,3*

(1.Yangtze River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Wuhan 430223, China; 2.Hubei FreshwaterAquaculture Collaborative Innovation Center, Wuhan 430223, China; 3.Chinese Academy of Fishery Sciences, Key Laboratory ofQuality and Safety Control for Aquatic Products, Ministry of Agriculture, Beijing 100141, China)

Antibacterial effect of tilmicosin on 3 kinds of aquatic pathogenic bacteria, control effect of tilmicosin against the infection byAeromonashydrophiliatoCarassiusauratusgibelio, and toxic effect of tilmicosin onCarassiusauratusgibeliowere investigated. Eleven mass concentrations (0.125, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 16, 32, 64 and 128 mg/L) of tilmicosin were designed, and the minimum inhibitory concentration (MIC), the minimum bactericidal concentration (MBC) of tilmicosin againstAeromonashydrophilia,AeromonassobriaandVibrioanguillarumwere observed, and the ratios of MBC and MIC were calculated.Carassiusauratusgibeliowith the weight of(217.65±25.26)g were infected by intraperitoneal injection of 0.3 mL ofAeromonashydrophiliaat a concentration of 9×108CFU/mL, then they were given by oral administration of tilmicosin with the dosages of 0, 50, 100 and 150 mg/kg for three consecutive times at 1, 24 and 48 h, respectively, and protection rate of tilmicosin forCarassiusauratusgibelioinjected byAeromonashydrophiliawas calculated. Six dosages of tilmicosin (0, 260, 300, 340, 387 and 440 mg/kg) were given toCarassiusauratusby oral administration, respectively. Mortality rate was recorded, and the median lethal dose (LD50) was calculated. The MIC forAeromonashydrophilia,AeromonassobriaandVibrioanguillarumwere 4.00, 0.50 and 1.00 mg/L, respectively, the MBC were 64, 32 and 32 mg/L, and the ratios of MIC and MBC forAeromonashydrophilia,AeromonassobriaandVibrioanguillarumwere 16, 64 and 32, respectively. The doses of 100 and 150 mg/kg of tilmicosin were both effective for protecting theCarassiusauratusgibelioinfected byAeromonashydrophilia. TheLD50at 24 h, 48 h, 72 h and 96 h were 344.0, 306.3, 298.5 and 298.5 mg/kg, respectively. Tilmicosin showed the antibacterial effectinvitroto some extent, and the protective effect ofCarassiusauratusgibelioinfected byAeromonashydrophilia. But it also showed toxic effect forCarassiusauratusgibelio. It is helpful for the further development and utilization of tilmicosin in the field of aquaculture.[Chinese Fishery Quality and Standards, 2017, 7(4):51-58]

tilmicosin;Carassiusauratusgibelio; aquatic pathogenic bacteria; control effect; toxicity

AI Xiaohui, aixh@yfi.ac.cn

10.3969/j.issn.2095-1833.2017.04.008

2017-03-15；接收日期：2017-04-12

公益性行业(农业)科研专项(201503108)；中国水产科学研究院基本科研业务费资助(2016JBF0104)

刘永涛(1979-)，男，博士，副研究员，研究方向为水产动物药理和水产品质量安全研究，liuyt@yfi.ac.cn 通信作者：艾晓辉，研究员，研究方向为水产动物药理及药残控制技术研究，aixh@yfi.ac.cn

S91;O657.63

A

2095-1833(2017)04-0051-08