无偿献血者血液标本行核酸检测对降低经血传播HIV的风险评估

霍宝锋?张天弼?刘智敏?温芳丹

[摘要] 目的 探讨无偿献血者血液标本行核酸检测对降低经血传播HIV（人类免疫缺陷病毒）风险的影响。 方法 选取2016年1月～2017年1月无偿献血者血液标本24317份，所有献血者献血前均接受完整健康征询及全面健康体检，所有血液标本均经血液快速检测，酶联免疫吸附测定法（ELISA）与核酸检测。分析ELISA检测与核酸检测结果。 结果 24317份血液标本经血清学两次检测，24107份合格，210份不合格，不合格标本中12份ELISA三项检测均不合格；24107份ELISA检测合格标本经核酸检测出1份HIV-RNA呈阳性，并经生物公司实验证实；ELISA检测不合格标本中，核酸检测57份呈阴性。 结论 核酸检测有助于提高无偿献血者的血液质量，减低经血传播HIV等病毒的风险，保障临床安全用血；同时，临床应加强两种检测方式的联合应用，最大限度的避免病毒感染漏检现象。

[关键词] 核酸检测；人类免疫缺陷病毒；血液标本；风险评估

[中图分类号] R392 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2017）10-229-03

Risk evaluation of blood samples from volunteer donors undergoing nucleic acid detection in reducing blood transmission of HIV

HUO Baofeng ZHANG Tianbi LIU Zhimin WEN Fangdan

Shaoguan Central Blood Station，Shaoguan 512026，China

[Abstract] Objective To explore the effect of blood samples from volunteer donors undergoing nucleic acid detection on reducing risk of blood transmission of HIV （human immunodeficiency virus）. Methods 24317 blood samples from volunteer donors from January 2016 to January 2017 were selected.All volunteer donors were given complete health consultation and comprehensive physical examination.And all blood samples were all given rapid detection by blood transmission such as enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and nucleic acid detection. Results Of ELISA and nucleic acid detection were analyzed. Results In 24317 blood samples detected by serology，there were 24107 qualified samples and 210 unqualified samples.In unqualified samples，three detections of ELISA in 12 samples were unqualified.In 24107 qualified samples whose ELISA were qualified，1 sample was with positive HIV-RNA after nucleic acid detection and it was experimentally proved by biological company.In unqualified samples detected by ELISA，nucleic acid detection of 57 samples were negative. Conclusion Nucleic acid detection is helpful to improve blood quality of volunteer donors，reduce risk of blood transmission of HIV and guarantee clinical safety of blood.In addition，combined application of two detections in clinic should be enhanced to maximumly avoid missed detection of virus infection

[Key words] Nucleic acid detection；Human immunodeficiency virus；Blood samples；Risk evaluation

輸血是一种通过静脉经血液输注给患者的治疗方法，目前已广泛应用于临床，且具有无可替代的地位。但受血液安全性影响，输血治疗存在着较大风险，血液质量对治疗效果亦具有显著影响。因此血站工作人员一直将确保血液安全、减小血液传播疾病风险，尤其是HIV感染作为工作质量持续改进的目标[1-2]。临床研究发现，病毒隐匿性、变异性、病毒感染“窗口期”及试剂灵敏度等均在很大程度上影响检测结果[3]。核酸检测技术能够有效检测窗

口期病毒感染、隐匿性与变异性病毒，降低漏检率，从而提高血液安全性。根据国家卫生部门要求，核酸检测已作为无偿献血者血液标本常规检测方法进行病毒感染筛查[4]。本研究在传统血清抗体酶联免疫吸附测定法（ELISA）基础上加用核酸检测，深入分析核酸检测在减低经血传播HIV风险中的应用价值。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月～2017年1月无偿献血者血液标本24317份，所有献血者体检健康，符合献血要求，血液标本均经乙肝金标试纸条筛查与干式生化分析仪筛查谷丙转氨酶（ALT）合格。各献血者均留取2管血液，分别5mL。1管采用EDTA-K2抗凝，以备ALT、酶免及血型检测，1管采用无菌、无RNA酶与DNA酶带分离胶的EDTA-K2抗凝，以备核酸检测。将标本置于2℃～8℃保存，其中用于核酸检测标本于4h内进行离心处理，将血浆与细胞分离，运输时保持2℃～10℃。检测需于72h内完成。

1.2 仪器与试剂

仪器：全自动加样酶免一体机、离心机、全自动生化分析仪、荧光定量PCR仪、汇集与核酸提取仪、核酸检测系统、数据分析系统。试剂：ALT、ELISA、乙肝表面抗原（HBsAg）、抗-丙型肝病毒（抗-HCV）、抗HIV等检测试剂，质控物。

1.3 方法

ELISA检测：采用加样酶免一体机检测抗-HIV、抗-HCV、抗HBsAg，所有标本均由不同人员与厂家试剂进行两次检测，试剂分别由（北京万泰，试剂批号：H20160909）和（B10-RAD，试剂批号：6J0373）提供，严格遵照试剂说明书进行操作。ALT高于40U/L视为不合格，ELISA检测S/CO值0.7～1.0，灰区；S/CO≥1.0，有反应性，进行双孔复试，双孔中有1孔存在灰区或反应性判定不合格。分别记录单试剂阳性率和双试剂阳性率。核酸检测：次日对血清学检测合格及待测标本予以核酸检测，试齐由（达安基因，试剂批号：2016003）提供，将核酸标本置于离心机上离心上20min、离心速度为3000r/min。取血清学检测合格的8份混样标本进行三联检测（HIV-RNA、HCV-RNA、HBV-DNA），设置阳性对照、阴性对照、阳性质控各1个，采用加样器将8个标本全自动汇集至一个pool内，各pool内均含有对照组，随后提取、加至中转板、反应板。对pool检测混样标本拆分至单人份检测，若拆分试验有反应，判定核酸检测为阳性，拆分试验呈阴性者判定核酸检测为阴性。对于血清学检测不合格标本同样进行上述检测。将核酸检测呈阳性标本递送至生物科技公司进行确诊。

2 结果

2.1 ELISA检测结果分析

24317份标本中，有210份ELISA检测不合格，24107份合格，其中12份ELISA三项检测不合格。见表1。

2.2 核酸检测结果分析

ELISA检测合格标本中，核酸检出1份HIV-RNA呈阳性，而在ELISA检测不合格标本中，核酸检测57份呈阴性。见表2～3。

3 讨论

无偿献血是输血治疗的主要血液来源，减低经血传播风险，尤其是HIV感染，是医疗部门关注的重要话题，同时也是采血站持续改进工作质量的首要目标[5-6]。随着血液检测技术的发展，HIV、HCV感染“窗口期”明显缩短，而窗口期是指病原感染开始至可采用检测方法检测出病原时间[7-8]，临床研究显示，采用ELISA检测抗HIV、抗HCV、HBsAg的“窗口期”平均为22d、56d、82d，应用核酸检测则可进一步缩短平均窗口期，提高经血病毒检出率[6]。

据相关研究报道，我国部分地区HIV漏检率仍有0.0044%，由于HIV对人类健康危害性极大，一旦感染，无法治愈，给患者自身、家庭及社会均可造成经济负担[9-10]，因此加强血液检测技术持续改进，避免HIV漏检现象具有重大意义。目前，血站对血液的采取的检测策略是：血液采集前应用金标快速法对HBsAg与ALT进行检测，血液回站后，由不同医务人员采用不同厂家的试剂进行ELISA检测，随后予以核酸检测[11]。本研究中，24317份标本中，有210份ELISA检测不合格，24107份合格，其中12份抗HIV、抗HCV及HBsAg经ELISA检测均为不合格，ALT快速检测不合格129份。血液ELISA检测报废率较以往调查研究有所下降。提示对献血者进行健康询问、常规体检及ALT检测是确保血液安全的首要环节。在24107份ELISA检测合格血液标本中，由核酸检测出HIV-RNA呈阳性1份，占0.001%，血液筛查结果与襄阳地区相似，与南宁地区相比有所降低。至于210份ELISA三项检测不合格血液标本中，核酸检测阳性45份、阴性57份，表明ELISA检测与核酸检测两种方式具有相互补充作用，临床实际检测中可充分发挥各自檢测的优势，提高HIV等病毒感染检出率。另外，1份ELISA检测合格但核酸检测HIV呈阳性标本，经生物公司再次检测证实为HIV感染，表明核酸在检测HIV感染的隐匿性、变异性、“窗口期”中具较高的灵敏度，可有效提高HIV感染检出率，避免HIV感染造成不良事件，从而有效预防医疗事故，减少医疗纠纷[12-13]。同时有助于维护社会公共卫生安全。但核酸检测技术对整个检测操作流程及实验室环境等要求较高，临床应用务必严格管理实验标与耗材，科学规划与设计实验室，预防交叉感染，降低假阴性率，为检测结果的准确性提供有力保障[14-15]。同样，ELISA检测亦需加强质量管理，方可保证准确的检测结果。

综上所述，核酸检测可有效降低经血传播HIV风险，保障临床输血安全性，减少医疗事故的发生，为无偿献血工作的顺利开展提供重要支持；同时，采血与供血机构应遵循对献血者进行健康咨询、常规体检、快速检测、合理处理标本、血清学联合核酸检测的原则，尽可能的提高血液质量，控制经血传播HIV等疾病风险。

[参考文献]

[1] 陈素君，黄勇华，谢冬梅，等.2004～2013年清远市无偿献血者HIV检测结果分析[J].热带医学杂志，2015，15（7）：982-984，991.

[2] 程颖，李维，程燃.重庆市2008～2012年无偿献血者HBsAg，ALT及抗HIV、抗HCV、抗TP抗体检测结果的分析[J].国际检验医学杂志，2014，35（10）：1297-1304.

[3] 封婕，赵轶伦，许豪勤.2011～2015年南京地区无偿献血者血液筛查结果[J].江苏医药，2016，42（17）：1929-1931.

[4] 黄力勤，姚凤兰，葛红卫.核酸检测系统联检与鉴别检测结果不一致原因分析[J].中国输血杂志，2016，29（8）：802-806.

[5] 吴丹霄，吴亚玲，吕杭军.核酸检测在献血筛查中的应用[J].浙江预防医学，2015，27（5）：501-503.

[6] 何子毅，余霖，王庆，等.核酸检测技术在不同血液安全筛查模式的应用分析[J].中国输血杂志，2016，29（7）：693-695.

[7] 曹晓，曹庆宝，李杰，等.核酸检测技术在唐山地区献血者血液筛查中的应用[J].检验医学与临床，2014，11（5）：634-635，637.

[8] 曹志刚，李霜云.核酸检测技术在襄阳地区献血筛查中的应用分析[J].临床输血与检验，2013，15（2）：150-151.

[9] 苏武锦，陈悦，黄茜.南宁地区2006～2015年无偿献血者HIV阳性的分布特征[J].重庆医学，2016，45（29）：4110-4112，4116.

[10] 黄宏亮，徐志华，贾红志，等.核酸检测技术在江苏省盐城地区献血者筛查中的应用[J].国际输血及血液学杂志，2014，37（1）：20-22.

[11] 郭燕，蔡斌，段勇，等.结合核酸检测技术探讨ALT在献血者筛查中的意义[J].临床输血与检验，2016，18（4）：326-328.

[12] 陕柏峰.无偿献血者HIV抗体筛查阳性标本确认结果分析[J].检验医学与临床，2016，13（z1）：131-133.

[13] 庞栋，申卫东，张翙，等.ELISA筛查单试剂反应献血者追踪检测[J].中国输血杂志，2014，27（4）：381-383.

[14] 蓝文莉，谢敬文.广州番禺地区开展核酸血液筛查的应用情况[J].中国输血杂志，2015，28（4）：430-432.

[15] 黄秀琳，李维，程颖，等.無偿献血者血液标本酶联免疫吸附测定项目再检结果分析的意义[J].国际检验医学杂志，2013，34（9）：1177-1179.

（收稿日期：2017-04-05）