北京地区 25例犬吉氏巴贝斯虫病例分析

郑思艳，陈艳云，袁春燕，夏兆飞

(中国农业大学动物医学院，北京 海淀 100193)

北京地区 25例犬吉氏巴贝斯虫病例分析

郑思艳，陈艳云，袁春燕，夏兆飞

(中国农业大学动物医学院，北京 海淀 100193)

为调查北京地区犬吉氏巴贝斯虫病的感染与治疗情况，2014年10月至2016年1月期间，本试验对中国农业大学动物医院就诊的25例犬吉氏巴贝斯虫感染病例进行调查统计，记录其临床症状，分析全血细胞计数(Complete Blood Count，CBC)、生化检测结果和三氮脒的治疗效果。结果显示，25例患犬均出现不同程度的贫血，73.3%(11/15)的患犬出现了免疫介导性溶血性贫血(Immune mediated hemolytic anemia，IMHA)，使用三氮脒和输血疗法治疗后，71.2%(10/14)的患犬取得良好的疗效，但目前跟踪的病例中，21.4%(3/14)的患犬已复发。

犬;吉氏巴贝斯虫;CBC;PCR检查

犬巴贝斯虫病，由巴贝斯虫通过蜱媒传播，寄生于脊椎动物血液红细胞中的一种寄生虫病［1－2］，常引起间歇性发热、进行性贫血、血小板减少、脾肿大等临床症状，严重感染导致死亡。该病在蜱流行区发病率较高，因此，东南亚、北美、南美等地广泛流行［1－4］。我国已报道的犬巴贝斯虫病多为吉氏巴贝斯虫感染，偶见韦氏巴贝斯虫感染，在我国江苏、河南的部分地区呈地方性流行，随着我国养犬业的快速发展，近年来有流行和暴发的趋势，这对宠物犬构成严重的危害［5－7］，因此对本病的及早诊断和治疗尤为重要。

1 试验对象与试验方法

1.1 试验对象 2014年10月至2016年1月期间，从中国农业大学动物医院就诊病例中选取25例有蜱接触史的患犬。

1.2 发病动物病例整理 记录其年龄、品种、性别、临床症状、实验室检验(包括CBC和生化检查)结果;对使用三氮脒治疗的患犬，跟踪其治疗效果，监测分析其各项实验室检验指标的变化。

1.3 PCR检测

1.3.1 DNA提取 参照QIAamp DNA mini kit试剂盒说明书提取DNA。

1.3.2 PCR扩增 参照Muhlnickle C J等人设计的引物和反应体系［1］，扩增巴贝斯虫的 18S rRNA基因。

1.3.3 电泳 将PCR反应结束后，取5μL产物置于1.0%琼脂凝胶上电泳。电泳后，紫外灯下观察结果。

1.3.4 PCR测序 将PCR产物送至奥美德诺公司测序，然后将测序结果与NCBI中的18S rRNA序列进行比对，同源性≥97%者判为吉氏巴贝斯虫(B．gibsoni)。

2 结果

2.1 年龄、品种和性别分布 本次调查显示，发病犬的年龄从7月龄至16岁不等，平均发病年龄为3.87±3.68岁，患犬多为公犬(16只，64%)，母犬8只(32%)，绝育犬1只(4%);患犬品种以杂种犬(4只，16%)、德国牧羊犬(4只，16%)、金毛寻回犬(3只，12%)居多，其他品种如拉布拉多寻回犬、雪纳瑞犬、贵宾犬和西施犬等也有发病

2.2 临床症状 24例患犬主要表现黏膜苍白、精神沉郁、食欲减退、发热、消瘦、呕吐等症状，仅1例(4%)患犬就诊时表现为明显黄疸。见表1。

表1 临床症状

2.3 实验室检验结果

2.3.1 CBC检查结果 患犬于初诊时表现为红细胞总数(2.68±1.48 ×1012/L)下降、红细胞比容(18.53±7.88%)下降、血红蛋白(6.83±3.76 g/ dL)下降、平均红细胞体积(72.39±12.76 fL)轻度升高，网织红细胞(214.92±193.17 K/μL)轻度升高;另外，白细胞总数(21.61±13.82 ×109/L)升高，血小板(83.67±102.06 K/μL)下降。见表2。

表2 患犬治疗前后血液检查结果

2.3.2 血清生化检查结果 患犬于初诊时总胆红素(21.09±29.87μmol/L)和直接胆红素(12.2± 21.59μmol/L)轻微升高;天门冬酰胺氨基转移酶(80.57±34.59 U/L)和碱性磷酸酶(396.6± 253.48 U/L)升高;肌酐(201.56±470.17μmol/L)和尿素氮(27.02±34.16μmol/L)升高;肌酸激酶(597.5±948.04 U/L)和乳酸脱氢酶(485.43± 465.35 U/L)升高。见表3。

表3 患犬初诊就诊时生化检查结果

2.3.3 PCR检查结果 25只患犬中，23只(92%)血涂片镜检 B．gibsoni阳性，PCR检查均为阳性(100%)。如图1。

2.4 治疗及监测 25例患犬中，其中仅有14例接受了三氮脒的治疗，4例患犬因严重贫血同时进行输血治疗，有4例患犬的主人直接放弃治疗，5例失联;电话回访结果显示，接受治疗的14例患犬中，10例(71.4%)于首期治疗后病情得到控制，但目前有3例(21.4%)复发;4例(28.6%)因贫血及其他严重的并发症死亡。

图1 18S rRNA扩增结果(阴性条带排除B．gibsoni)

3 讨论

我国已报道的犬巴贝斯虫病多为B．gibsoni感染，在我国江苏、河南的部分地区呈地方性流行，对宠物犬构成严重危害［7］。本次调查在中国农业大学动物医院(全年接诊量约65 000例)完成，历时14个月，期间仅有25例犬被诊断为B．gibsoni感染，整体发病率并不高。这一结果提示北京并非犬B．gibsoni高发区，和流行病学特征相符。虽然北京并非蜱流行区，但根据Jefferies等人于2007年的报道，咬伤也可能会导致虫体经过直接的血液接触传播，这一途径不需要传播媒介，鉴于此，还应加强B．gibsoni流行病学的监控。

B．gibsoni感染的潜伏期从数天到数周不等，患犬主要表现精神沉郁、体重下降、黄疸、淤血等症状，实验室检验多表现再生性贫血、肝酶升高等，严重血管内溶血的病例还会出现黄疸［8］。本次调查中，所有患犬均表现出不同程度的精神沉郁，96%的患犬有食欲不振和黏膜苍白的症状，仅有一例有明显黄疸;实验室检验结果证实所有黏膜苍白的病例均出现了严重贫血(3.24±2.18× 1012/L)，贫血程度和病程有一定关系，精神沉郁超过1周的患犬贫血极其严重，这可能跟病原体在红细胞内进行胞内复制，引发血管内和血管外溶血性贫血有关。机体对抗虫体的免疫介导反应和自身抗原的改变能加重溶血性贫血，巨噬细胞受刺激后能引起发热和肝脾肿大。本次调查中，73.3%(11/15)的病例出现了IMHA，不但诱发了严重贫血，也会诱发骨髓代偿作用，使外周血白细胞升高(伴有核左移);另外，本次调查中，患犬的血小板也明显下降，由于这些患犬无明显出血现象，排除了血小板消耗的因素，最有可能的原因是免疫介导性的。

该病主要依靠实验室诊断，外周血血涂片见到病原体结合临床症状即可确诊，但随着PCR技术和血清学检查的应用，诊断率大大提高。本次调查中，25例患犬中23例血涂片检查为阳性，但所有PCR检查均为阳性，这一结果提示血涂片检查有一定的漏诊率，在临床工作中，若高度怀疑该病，可通过PCR检查辅助诊断。

目前尚无犬B．gibsoni感染的标准治疗方案，主要治疗原则为杀虫和辅助治疗(如输血治疗)［9］。亚洲一些国家地区普遍使用三氮脒(一线药物，3 mg/kg体重，肌肉注射，每天一次，连用3 d)和阿托喹酮(atovaquone，13.3 mg/kg体重，口服，每天3次)［10］，国内主要使用 DIMINAPHEN granules(主要成分为三氮脒和安替比林，10 mg/kg体重，皮下注射/肌肉注射，隔天1次，连用3次)。阿托喹酮和阿奇霉素(10 mg/kg，口服，每天1次)联合应用治疗效果良好。报道显示，三氮脒治疗的患犬复发率较高，近年来一些病例使用阿托喹酮治疗后也会复发，基因检测证实病原体已出现CYTb基因(抗阿托喹酮的基因)突变［11］。本次调查中，14例患犬接受了DIMINAPHEN granules的治疗，10例(71.4%)患犬于首期治疗后症状得到缓解，1例于治疗当天死亡;1例于治疗半个月时死亡，另外2例治疗20 d后仍未见好转。这些预后不良的病例于初次诊断时已出现严重的IMHA，提示本病需及时诊断，在治疗时还应注意加强对IMHA的控制。目前跟踪回访显示，3例患犬已复发，复发时患犬均表现严重贫血。由于本次调查未涉及耐药性研究，尚不清楚复发病例的病原对三氮脒的耐药性，需要进一步研究。

4 结论

本次调查中，北京地区犬B．gibsoni发病率并不高;主要通过血涂片检查诊断，但PCR检查能提高检出率;北京地区主要的特异性治疗药物为DIMINAPHEN granules，治疗效果和并发的IMHA有很大关系;有些病例出现复发，需进一步进行耐药性研究，以指导临床工作。

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Babeia gibsoni infection in 25 dogs in Beijing

ZHENG Si-yan，CHEN Yan-yun，YUAN Chun-yan，XIA Zhao-fei

(College of VeterinaryMedicine，China Agricultural University，Beijing 100193，China)

To investigate the infection and treatment of canine babesiosis in Beijing area，present study was conducted from Octorber 2014 to January 2016 to studied the infection of25 cases of canine babesiosis in the animal hospital of China Agricultural University．We recorded the clinical symptoms，performed complete blood count CCBC，biochemical test and diminazene treatment effect．The results showed that25 cases had differentdegrees of anemia，and the rate was 73.3%(11/15)in dogs with immune mediated hemolytic anemia．The use of diminazene and blood transfusion therapy，achieved good therapeutic effect and the response rate was 71.2%(10/14)．But in the case of the current track，21.4%(3/14)of the affected dogs had recurrence．

B．gibsoni;CBC;PCR

XIA Zhao-fei

S858.292

A

0529-6005(2017)06-0053-03

2016-06-29

郑思艳(1989-)，女，硕士生，研究方向为小动物内科学，E-mail:zhengsiyan@cau．edu．cn

夏兆飞，E-mail:drxia@126．com