采用定量参数校正因子法测定5种喹诺酮药物的含量

李 伟，李慧敏

（1.湖南师范大学附属岳阳医院，岳阳 414000；2.岳阳市食品药品检验所，岳阳 414000）

采用定量参数校正因子法测定5种喹诺酮药物的含量

李 伟1，李慧敏2

（1.湖南师范大学附属岳阳医院，岳阳 414000；2.岳阳市食品药品检验所，岳阳 414000）

目的：建立定量参数校正因子用于五种喹诺酮药物含量测定的方法。方法：采用HPLC法测定，用Phenomenex C18（150mm×4.6mm，5μm）、DIKMA C18（150mm×4.6mm，5μm）和Alltima（150mm×4.6mm，5μm）三根色谱柱，柱温25℃；流动相为0.2mol·L-1枸橼酸溶液-甲醇-乙腈（84：12：4）；流速为1.0m L·min-1；检测波长为319nm。以氟罗沙星或洛美沙星为参比物的定量参数校正因子法计算样品含量。结果：在三根不同的C18柱上相邻峰间的分离度均大于2.9，五种药物在25～250μg·mL-1线性关系良好，定量参数校正因子计算含量与法定方法测定的含量结果比较，经t检验，无显著性差异。结论：本方法快速、准确，只需采用氟罗沙星或洛美沙星为对照品即可同时测定五种喹诺酮药物的含量。

定量参数校正因子；喹诺酮；高效液相色谱法

依诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、氟罗沙星和洛美沙星是常见的喹诺酮类药物，均被中国药典2015年版［1］收载。其制剂均采用HPLC法进行含量测定，但分别采用不同的流动相系统。为了检测方便，我们考虑采用同一流动相和检测波长，以某一种物质为参比物的参数校正因子法［1-4］来测定5种喹诺酮药物的含量。经参考相关文献［5-8］并改进，我们发现可以只需氟罗沙星对照品或洛美沙星为对照品，采用一种流动相即可进行五种喹诺酮药物的含量测定，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 仪器与试药Waters高效液相色谱仪，含1525泵系统、2996 DAD检测器（美国Waters公司）；METTLER AE240型电子天平（德国梅特勒公司，精密度十万分之一）；氟罗沙星对照品编号为130458-200301，含量99.1%；洛美沙星对照品编号为0452-200001，含量90.0%；依诺沙星对照品编号为0452-9901，含量91.1%；诺氟沙星对照品编号为130450-200304，含量97.8%；环丙沙星对照品编号为30451-200302，含量84.9%，以上对照品均由中国食品药品检定研究院提供。试验样品为市售的不同厂家批号的喹诺酮药物31批；甲醇、乙腈均为色谱纯；其余试剂均为分析纯；水为去离子水。

1.2 定量参数校正因子的建立

1.2.1 色谱条件色谱柱：（1）Phenomenex C18柱（150mm ×4.6mm，5μm）；（2）DIKMA C18（150mm×4.6mm，5μm）；（3）Alltima（150mm×4.6mm，5μm）；柱温：25℃；流动相：0.2mol·L-1枸橼酸溶液-甲醇-乙腈（84：12：4）；流速：1.0m L·min-1；检测波长：DAD检测器扫描范围220～400nm；进样量：10μL。各品种理论板数均大于6000，各蜂之间的分离度均大于2.9。

1.2.2 测定波长的选择提取各对照品溶液的光谱图，见图1。可知氟罗沙星、依诺沙星、诺氟沙星、洛美沙星均在315～325间有次最大吸收且吸收峰较最大吸收峰曲线更平缓，依诺沙星在此区间吸收曲线也较平缓，波长变化带来的误差更小些，兼顾5个品种A/C值（单位浓度的峰面积）变化最小的波长区域，最后选择319nm作为测定波长。

1.2.3 定量参数校正因子的计算精密称取5种对照品适量加流动相配制成每种对照品浓度约为0.1mg·m L-1的混合溶液，平行做2份。吸取对照品溶液10μL，照“2.1”项下色谱条件进样，记录色谱图，见图2。提取315、317、319、321、323及325nm六个通道的色谱图，计算5个品种在6个波长处单位浓度的峰面积（E），E=A/C，并以其中RSD最小的连续3个波长处（如317 nm、319nm、321nm）的E值的平均值作为该品种的E值（折中各品种选择的RSD最小的连续3个波长，选出一致的连续3个波长）。分别计算各品种相对于两种参比物的校正因子（f），f=E待测/E参比。

图1 各对照品溶液紫外光谱图

图2 混合对照品溶液色谱

图3 样品溶液色谱图

通过考察三根不同色谱柱，均得出最佳波长段选为317 nm、319nm、321nm。以选定的三个连续波长的平均E值计算，分别以氟罗沙星、洛美沙星为参比物，计算各品种相对于参比物的校正因子f，结果见表1。

2 结果

2.1 色谱条件及系统适用性实验色谱柱：DIKMA C18（150mm×4.6mm，5μm）；柱温：25℃；流动相：0.2mol·L-1枸橼酸溶液-甲醇-乙腈（84：12：4）；流速：1.0m L．min-1；检测波长：319nm；进样量：10μL。

2.2 线性关系的考察精密称取氟罗沙星对照品12.31mg，依诺沙星对照品 13.85mg，诺氟沙星对照品12.42mg，环丙沙星对照品14.06mg，洛美沙星对照品14.69mg置50m L容量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液5m L和流动相5mL超声溶解，用流动相稀释至刻度，再分别精密量取10mL置25mL量瓶中，15mL、10mL、5mL置50m L量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别精密量取10uL注入色谱仪，以峰面积A对浓度C（μg·mL-1）进行线性回归，回归方程分别为：

A=2.1517×104C-3.1061×104r=1.000（n=5），线性范围为24.4～244μg·mL-1氟罗沙星

A=1.9692×104C-2.9125×104r=0.9999（n=5），线性范围为25.2～252μg·mL-1依诺沙星

A=2.0124×104C-9.0741×103r=0.9999（n=5），线性范围为24.3～243μg·mL-1诺氟沙星

A=2.1048×104C-7.2909×104r=0.9999（n=5），线性范围为23.9～239μg·mL-1环丙沙星

表1 各品种f值计算结果

A=2.2322×104C-4.0878×104r=1.000（n=5），线性范围为26.4～264μg·mL-1洛美沙星

2.3 精密度试验照样品含量测定项下方法配置的溶液，重复进样6次，测定峰面积，结果（n=6）氟罗沙星RSD=0.26%，依诺沙星RSD=1.18%，诺氟沙星RSD=0.77%，环丙沙星RSD=0.49%，洛美沙星RSD=0.18%。

2.4 稳定性考察取同一样品溶液于0，2，4，6，8，12，24h测定峰面积，结果氟罗沙星RSD=0.54%，依诺沙星RSD=0.71%，诺氟沙星RSD=1.01%，环丙沙星RSD=0.62%，洛美沙星RSD=0.38%，表明在24h内被测物溶液稳定。

2.5 重复性试验取同一样品6份，按含量测定项下的方法测定，结果RSD=1.1%，结果表明，该方法重复性好。

2.6 回收试验分别取研细的洛美沙星胶囊#1号样品各6份，每份约0.5粒（约含洛美沙星50mg），精密称定，相应加入约含50mg的洛美沙星对照品，按4.2项下的样品提取方法测定，分别用f1（氟罗沙星）和f2（洛美沙星）计算，回收率结果见表2。

表2 加样回收率实验（n=6）

2.7 耐受性考察分别在柱温25、30℃下测定同一批供试品（洛美沙星胶囊#1号）含量，平行测定2份，结果供试品含量无显著性差异。另外分别提取318、319、320nm波长处的峰面积计算，结果含量无显著差异。

2.8 样品含量测定

2.8.1 对照品溶液的制备精密称取氟罗沙星对照品25.26mg，洛美沙星对照品 28.30mg置50mL容量瓶中，加流动相超声溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取10mL置50mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。

2.8.2 供试品溶液的制备①片剂、胶囊剂：分别取各品种重量（装量）差异项下的样品，研细，精密称取相当于1片（粒）重的样品，置100mL容量瓶中，加流动相或0.1mol/L盐酸溶液（依诺沙星、诺氟沙星和环丙沙星制剂）适量溶解后，加流动相稀释至刻度，摇匀。再用流动相稀释至约0.1mg·m L-1，摇匀，即得。②滴眼液、注射液：精密量取注射液适量（滴眼液直接取1支），用流动相稀释至约0.1mg·mL-1，摇匀，即得。

2.8.3 样品测定照3.1项下色谱条件进样，测定峰面积。用表1中相应的f值参与计算，并将结果与现行的法定方法测得的结果进行比较，以氟罗沙星校正因子计算的含量和以洛美沙星校正因子计算的含量分别与法定方法测定结果进行t检验，计算t值分别3.3406和4.1702（n=30），df=n-1=29，查t分布的双侧临界（ta/2）值表为2.756（a=0.01），t ＞ ta/2，无显著性差异（P＞0.01）。结果见表2。

3 讨论

3.1 流动相的选择喹诺酮类化合物多为两性化合物，具胺基和羟基，能在酸性和碱性溶液中溶解。我们比较了文献［4～6］报道的流动相有乙腈-0.05 mol·L-1柠檬酸溶液（20∶80），0.05 mol·L-1枸橼酸溶液（用三乙胺调节pH至4.0）-乙腈（87∶13）及三乙胺磷酸溶液（取三乙胺5ml与磷酸7ml，加水至1000ml）-乙腈（82∶18），经摸索用0.2mol·L-1枸橼酸溶液-甲醇-乙腈（84∶12∶4）作为流动相，可以同时分离以上5种喹诺酮化合物，且无须调pH值，操作更简单、方便。

3.2 不同色谱柱的比较在选定的色谱条件下，我们尽量使用150mm的短柱，分别采用Phenomenex C18（150mm ×4.6mm，5μm）、DIKMA C18（150mm×4.6mm，5μm）和Alltima（150mm×4.6mm，5μm）均获得了满意的效果，在不同色谱柱上出峰顺序一致，均为氟罗沙星、依诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、洛美沙星，最后一个组分洛美沙星的保留时间分别在26.932、26.409和37.778分钟，分析时间较适中。且峰对称因子均在1.17～1.50之间，各峰之间的分离度均大于2.9，理论板数均不低于6000。

3.3 与其他定性检测方法的比较用于这5种喹诺酮药物制剂的检测方法现有高效液相色谱法［5～8］、紫外分光光度法［8～10］、化学荧光法［11］，但高效液相色谱法操作比化学荧光法相对比较简便，而且比紫外分光光度法的检出限低。本文采用的定量参数校正因子方法能迅速地同时进行5种喹诺酮化合物的定量分析，且只需氟罗沙星、洛美沙星两种对照品，大大简化了其含量测定的操作过程，本法准确、简便，可同时用于依诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、氟罗沙星和洛美沙星片剂、胶囊剂、滴眼液的含量测定。

表3 两种方法测定结果的比较

3.4 方法建立的宗旨本文借鉴中药“一测多评”思维采用定量参数校正因子测定性质相似的同类化学药物也是今后检测趋势的一种尝试和探讨，此外，对照品的生产和标化都是非常宝贵的而且有时断货买不到，减少对照品的使用有利于节能环保，但需要提出的是，出具公正性报告仍要采用权威标准收录的法定方法。

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To determ ine the content of five quinolones by using rectifying factors of Quantity parameters

Li Wei1, Li Hui-min2
(1. Second People’s Hospital of Yueyang, Yueyang 414000, China; 2. Yueyang Institute of Drug Quality Control, Yueyang 414000, China)

Objective To establish the determination method of five quinolones by using rectify factors of quantity parameters. M ethod HPLC was used. columns are Phenomenex C18(150mm×4.6mm, 5μm) 、DIKMA C18(150mm×4.6mm, 5μm) and Alltima (150mm×4.6mm, 5μm); Column temperature was 25℃; the mobile phase was 0.2mol·L-1citrate–［methanolacetonitrile (3: 1) ］84: 16; flow velocity was 1.0 mL·min-1; detective wavelength was 319nm. fleroxacin or lomefloxacin was chosen as reference material to calculate the sample content by the method of rectifying factors of Quantity parameters. Results On the three C18 columns, the resolutions were beyond 2.9, The linear range of five quinolones were 25ug·mL-1～250ug·mL-1 . Conclusion This method is quick and accurate. just by chosing fleroxacin or lomefloxacin as reference material, It can be used to deterimine the content of the five quinolones at the same time,

rectify factor; quantity parameter; quinolones; HPLC

R927

A

1673-016X（2017）04-0189-04

2017-03-10

李伟，E-mail：178484526@qq.com