维生素D3 对异烟肼联合利福平所致小鼠肝损伤的保护作用

宋佳奇，汪求真，迟菁华，寇廷艳，杜宝利，孙 立，李园园，胡一丹，李 茂，高晓丽，晋梦頔

(1. 青岛大学医学院医学营养研究所，山东 青岛 266021；2. 青岛大学医学院病理学教研室，山东 青岛 266071)

维生素D3 对异烟肼联合利福平所致小鼠肝损伤的保护作用

宋佳奇1，汪求真1，迟菁华2，寇廷艳1，杜宝利1，孙 立1，李园园1，胡一丹1，李 茂1，高晓丽1，晋梦頔1

(1. 青岛大学医学院医学营养研究所，山东 青岛 266021；2. 青岛大学医学院病理学教研室，山东 青岛 266071)

维生素D(vitamin D,VD)的经典生物学作用是调节钙磷平衡，维持骨骼健康[1]。近年的研究发现，VD3具有抗炎、抗氧化等生物学作用。有文献指出，VD3补充对四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤具有明显的改善作用[2]。但其对药物性肝损伤是否具有保护作用，尚未见报道。本研究以异烟肼联用利福平建立小鼠肝损伤模型，探讨不同剂量VD3补充对肝损伤是否具有保护作用。

1 材料与方法

1.1 材料 异烟肼(安徽东盛制药)，利福平(沈阳红旗制药)，维生素D滴剂(青岛双鲸药业)，复方甘草酸苷胶囊(潍坊中狮制药)。

1.2 分组及检测指标 50只SPF级♂昆明种小鼠,体质量(20±2)g，购自山东省鲁抗制药公司，合格证号：SCXK(鲁)20140001。适应性喂养1周后，随机分成5组：正常对照组(NC)、模型组(M)、5倍、10倍VD3生理剂量组(5N、10N)、阳性对照组(PC)。除NC组外，其余4组一次性给予异烟肼和利福平各100 mg·kg-1·d-1，制备肝损伤模型[3]；NC组给予等剂量溶剂灌胃。1 h后，5N、10N组分别给予5倍、10倍生理剂量的VD3，剂量分别为180 IU·kg-1·d-1、360 IU·kg-1·d-1；PC组给予200 mg·kg-1·d-1复方甘草酸苷胶囊；NC组和M组均给予等剂量溶剂灌胃。连续灌胃2周后，测空腹血糖，处死小鼠，分离血清，检测肝功能及脂质指标，计算肝脏指数，HE染色观察肝脏病理学改变。

2 结果

2.1 VD3对小鼠体质量、肝湿重和肝脏指数的影响 各组小鼠之间体质量差异无统计学意义。与NC组相比，M组的肝湿重、肝脏指数明显增大；不同剂量的VD3干预后肝湿重和肝脏指数明显降低(Tab 1)。

Tab 1 Effects of VD3 on body weight, liver weight and liver index in mice (±s, n=10 )

*P<0.05,**P<0.01vsNC;△△P<0.01vsM;#P<0.05vsPC

Tab 2 Effects of VD3 on serum biochemical levels in mice (±s, n=10)

*P<0.05,**P<0.01vsNC;△P<0.05,△△P<0.01vsM;##P<0.01vsPC

Tab 3 Effects of VD3 on glucose and lipid metabolism in mice(±s, n=10)

*P<0.05,**P<0.01vsNC;△△P<0.01vsM;##P<0.01vsPC;▲▲P<0.01vs10N

2.2 VD3对肝功能、血糖和脂质代谢的影响 与NC组相比，M组血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase, AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、直接胆红素(direct bilirubin,DBIL)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)的活性及空腹血糖、甘油三酯(triglyceride，TG)、胆固醇(cholestrol,CHOL)水平都明显升高。VD3补充能降低ALT、ALP、DBIL、TBIL的活性及TG水平；5N、10N组之间差异没有显著性。但5N组能明显降低血清AST活性、空腹血糖及CHOL水平 (Tab 2、3) 。

2.3 VD3对肝组织病理学改变的影响 在相同放大倍数光学显微镜下观察发现，M组与NC组肝细胞的直径比为1 ∶0.7。M组大部分肝细胞肿胀，发生气球样变，点灶状性坏死，并伴有大量炎性细胞浸润。与M组相比，VD3干预组与PC组肝细胞损伤明显减轻。

3 讨论

血清中转氨酶水平的升高是药物引起肝细胞坏死性病变的标志[3]，当肝细胞膜及线粒体膜损伤导致通透性增加时，这些诊断标记酶释放进入血液，导致血清中ALT、AST活性升高。VD3干预能明显降低血清ALT、ALP、TBIL、DBIL水平。新近研究表明，抗结核药物抑制胆汁分泌，导致胆固醇蓄积和肝脏脂质代谢受损[4]。我们研究发现，VD3补充能够降低CHOL、TG水平，推测其可能通过调节脂质代谢对肝脏起保护作用。

从肝脏指数、AST、血糖、CHOL等指标来看，5倍VD3补充对抗结核药所致小鼠肝损伤的保护作用更为明显，而10倍VD3补充对这些指标未观察到类似效果。因此，我们推测一定范围内大剂量VD3补充对抗结核药所致肝损伤具有一定的保护作用，其作用机制有待进一步深入研究。

(致谢：本实验是在青岛大学医学院医学营养研究所实验室完成，在此对实验过程给予指导和帮助的老师和同学表示感谢！)

[1] 窦晓娟, 汪求真, 韩孝红, 等. 大剂量维生素D3补充对糖尿病大鼠淋巴细胞增殖活性的影响[J]. 中国药理学通报,2016, 32(4): 589-90.

[1] Dou X J, Wang Q Z, Han X H, et al. Effect of high dosage of vitamin D3 supplementation on lymphocyte proliferation activity in diabetic rats[J].ChinPharmacolBull, 2016, 32(4): 589-90.

[2] 朴美兰.维生素D3对四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤的保护作用[D]. 延边：延边大学, 2013.

[2] Piao M L. Protective effects of vitamin D3 on acute liver injury induced by CCl4in mice[D]. Yanbian: Yanbian University, 2013.

[3] Dong Y, Huang J, Lin X, et al. Hepatoprotective effects of Yulangsan polysaccharide against isoniazid and rifampicin-induced liver injury in mice[J].JEthnopharmacol, 2014, 152(1):201-6.

[4] Pal R, Rana S V, Vaiphei K, et al. Isoniazid-rifampicin induced lipid changes in rats[J].ClinChimActa, 2008, 389(1-2): 55-60.

Protective effects of vitamin D3 on liver injury induced by isoniazid and rifampicin in mice

SONG Jia-qi1, WANG Qiu-zhen1, CHI Jing-hua2, KOU Ting-yan1, DU Bao-li1, SUN Li1, LI Yuan-yuan1, HU Yi-dan1, LI Mao1, GAO Xiao-li1, JIN Meng-di1

(1.InstituteofHumanNutrition,MedicalCollegeofQingdaoUniversity,QingdaoShandong266021,China; 2.DeptofPathology,MedicalCollegeofQingdaoUniversity,QingdaoShandong266071,China)

VD3；异烟肼；利福平；肝损伤；AST；保护作用

VD3; isoniazid; rifampicin; liver injury; AST; protective effects

2017-04-26，

2017-05-23

国家自然科学基金资助项目(No 81472983)

宋佳奇(1992-)，女，硕士生，研究方向：营养与食品卫生学，E-mail：602855088@qq.com； 汪求真(1971-)，女，博士，副教授，硕士生导师，研究方向：营养与食品卫生学，通讯作者，E-mail：qdwangqiuzhen@126.com

时间：2017-7-7 11:05 网络出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170707.1104.056.html

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.08.028

A

1001-1978(2017)08-1183-02

R-332；R322.47；R575.105；R977.24