气相色谱法测定红花软胶囊中亚油酸的含量〔1〕

翟晓茹，李永东，张红兵，张燕

(中国辐射防护研究院，山西 太原 030006)

药学研究

气相色谱法测定红花软胶囊中亚油酸的含量〔1〕

翟晓茹，李永东，张红兵，张燕*

(中国辐射防护研究院，山西 太原 030006)

目的：建立红花软胶囊中亚油酸含量的检测方法。方法：色谱柱为固定液88%二氰丙基聚硅氧烷(60 m×0.25 mm，0.20 μm)，检测器为氢焰离子化检测器，检测器温度280 ℃，进样口温度250 ℃，柱温控制采用程序升温，以140 ℃为起始柱温，保持5 min，以4 ℃/min升温至240 ℃，保持15 min。载气为氮气，载气流速：1.0 mL/min，分流比为30∶1。结果：用亚油酸甲酯作对照，其线性范围0.270 5～5.403 3 mg/mL，γ=0.999 8，平均回收率为97.02%(RSD=1.3%，n=9)。结论：该方法准确、灵敏高、重现性好，可用于红花软胶囊中亚油酸含量的测定。

红花软胶囊；气相色谱；亚油酸

红花软胶囊是以红花提取物、红花籽油为主要成分的软胶囊制剂，具有辅助降血脂、提高缺氧耐受力的功能。红花提取物是以菊科植物红花Carthamus tinctorius L.为原料，经过加水煎煮、浓缩、干燥而来。红花中含有黄酮类物质、有机酸、色素、甾醇、多糖等，其中黄酮类化合物是最主要的化学成分，而总黄酮又是黄酮类化合物中的有效成分。文献报道，红花具有抗凝血、抗血栓、抗炎、抗氧化等功效；同时能够解除血管平滑肌的痉挛，从而改善组织缺氧状态并增强耐缺氧能力[1-4]。红花籽油为红花的果实经榨取精制而得到的脂肪油，主要含有亚油酸、亚麻酸、维生素E等，其中亚油酸含量达80%，有“亚油酸之王”的称号[5-8]。经研究发现，红花籽油具有明显的降低动物血清脂质的功效，具有能显著降低高脂血症大鼠的血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平，提高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平；另外还具有降血压、抗血栓、抗炎、抗动脉硬化等作用[9-12]。因此，红花软胶囊中的主要指标性成分确定为总黄酮、亚油酸。目前，关于红花软胶囊中总黄酮的含量测定已有报道。而关于亚油酸的含量测定都是用GC法基于油脂类物质中的含量测定，关于红花软胶囊中的亚油酸含量测定，尚未见报道。因此，本研究以亚油酸作为研究对象，采用气相色谱法考察红花软胶囊中亚油酸含量的测定方法。本研究参照《GB5413.27-2010婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定》的要求及相关文献[13-17]，建立了红花软胶囊中亚油酸含量的检测方法，以更好地控制红花软胶囊的生产过程及成品的内在质量。

1 材料与方法

1.1 仪器与材料

SP-3240A气相色谱仪(北京北分瑞利)；MS204S万分之一天平(梅特勒)；MS105DU十万分之一天平(梅特勒)；红花软胶囊(自制，规格：每粒0.5 g，批号：11100801、11100901、11101001)；亚油酸甲酯对照品(中国生物制品鉴定所，批号：111625-200502)；正己烷、甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件

色谱条件：色谱柱(安捷伦，固定液100%二氰丙基聚硅氧烷，60 m×0.25 mm，0.20 μm)，检测器温度280 ℃，进样口温度250 ℃，柱温控制采用程序升温，以140 ℃为起始柱温，保持5 min，以4 ℃/min升温至240 ℃，保持15 min。载气为氮气，载气流速：1.0 mL/min，分流比为30∶1。分别吸取对照品溶液和供试品溶液1.0 μL，进样，以色谱峰面积定量。

1.2.2 对照品溶液的制备

精密称取亚油酸甲酯对照品270.5 mg，置10 mL容量瓶中，加正己烷稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。

1.2.3 供试品溶液的制备

精密称取红花软胶囊内容物1.0 g，加入65 ℃的水10 mL，溶解后，加入2 mL氨水，置65 ℃水浴中15 min，轻摇，放至室温。加入10 mL乙醇，混匀。加入25 mL乙醚，振摇1 min。加入25 mL石油醚，加塞振摇1 min，静置分层后，取上层液体。重复3 次，合并提取液，用旋转蒸发仪浓缩至干。向残渣中加入1.0 mL焦性没食子酸甲醇溶液，浓缩至干，向残渣中加入10 mL氢氧化钾甲醇溶液，置80℃水浴上回流25 min，并于回流10 min时加入5 mL三氟化硼甲醇溶液。冷却至室温。将液体转移至离心管中，用饱和氯化钠清洗3 次，每次3 mL，合并清洗液至离心管中，加入10 mL正己烷，摇匀后，离心5 min，取上清液，即得供试品溶液。

1.3 空白干扰试验

分别取正己烷(不含亚油酸甲酯对照品)和经正己烷稀释的亚油酸甲酯对照品溶液，照“1.2.1项”色谱条件进行试验，记录色谱图。

1.4 方法学考察

1.4.1 线性考察

分别精密吸取亚油酸甲酯储备液0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL至10 mL容量瓶中，用正己烷稀释至刻度，作为亚油酸甲酯标准工作液。将各亚油酸甲酯标准工作液照“1.2.1项”，在气相色谱仪上分别进样3次，以浓度为横坐标、平均峰面积为纵坐标，进行线性回归。

1.4.2 精密度考察

精密吸取同一浓度的对照品溶液，照“1.2.1项”色谱条件，连续进样6 次，计算亚油酸甲酯峰面积的相对标准偏差(RSD)。

1.4.3 重现性考察

取同一批号红花软胶囊(11100901)的内容物1g，按“1.2.3项”的方法制备供试品溶液6份，并照“1.2.1项”色谱条件进行试验，计算6 份供试品溶液的亚油酸甲酯峰面积相对标准偏差。

1.4.4 稳定性考察

取同一批号红花软胶囊(11100901)的内容物1g，按“1.2.3项”制备供试品溶液，密闭置于室温条件下放置，分别于0、12、24、36、48 h，照“1.2.1项”色谱条件进样测定，计算亚油酸甲酯峰面积的相对标准偏差。

1.4.5 回收率试验

精密称取同一批次样品9份，分别加入一定量的亚油酸对照品，按“1.2.3项”方法操作，制备加样回收供试液，每个质量浓度配制3 份(相当于处方量的80%、100%、120%)，并依法测定，计算其回收率、平均回收率及RSD值。

1.5 样品测定

分别取3批红花软胶囊内容物1 g，精密称定，按“1.2.3项”方法操作，制备供试品溶液，各精密吸取1 μL，连续进样2次，注入气相色谱仪，记录色谱图。以相对峰面积，计算样品中亚油酸的含量。

2 结 果

2.1 对照品溶液的制备

制得的亚油酸甲酯对照品贮备液浓度为27.05 mg/mL，亚油酸甲酯标准工作液浓度为0.270 5、0.540 3、1.350 8、2.701 7、5.403 3 mg/mL。

2.2 空白干扰实验

分别取正己烷(缺亚油酸甲酯对照品的阴性对照品)和经正己烷稀释的亚油酸甲酯对照品溶液，照“1.2.1项”色谱条件进行试验，色谱图显示，阴性样品溶液在29～31 min处无任何峰。亚油酸甲酯对照品溶液在30.1 min处有明显的峰。结果表明阴性样品无干扰，该色谱条件可用于定量分析。进样图谱见图1。

2.3 方法学考察

以不同浓度的亚油酸甲酯标准工作液，进样。得回归方程y=61 408x+21 133，R=0.999 8。结果表明，亚油酸甲酯在0.270 5～5.403 3 mg/mL，线性良好。精密度、重现性及稳定性考察的亚油酸甲酯峰面积的RSD均<3%，表明仪器精密度良好，该方法重现性较好，供试品溶液在48h内较为稳定。回收率试验平均值为97.02%，相对标准偏差为1.3%(n=9)，说明以此方法测定红花软胶囊中亚油酸的含量，结果准确、可靠(见表1)。

2.4 样品测定

三批红花软胶囊中亚油酸含量均>30%(见表2)，样品色谱图见图2。

A 正己烷色谱图 B 亚油酸甲酯对照品

表1 亚油酸回收率试验结果

3 讨 论

红花软胶囊是由红花提取物、红花籽油等配比制备而成，配方中红花籽油达70%。红花籽油中主要含亚油酸，因此将亚油酸作为红花软胶囊质量控制的指标之一。本试验考察了固定液为88%二氰丙基聚硅氧烷60 m×0.25 mm，0.20 μm；100 m×0.25 mm，0.20 μm两个规格的色谱柱。用上述两个色谱柱，进行红花软胶囊中亚油酸的含量测定，结果发现：亚油酸甲酯在两个色谱柱中的出峰时间一致，红花软胶囊中亚油酸的含量测定结果基本一致。60 m色谱柱约55 min即可完成一个样品的测定，100 m色谱柱约105 min可完成一个样品的测定，100 m色谱柱较60 m色谱柱的测定时间长。为缩短样品测试时间、节约试验成本，故选择60 m×0.25 mm，0.20 μm规格的色谱柱即可满足本试验的要求。

图2 红花软胶囊样品色谱图

表2 红花软胶囊中亚油酸的含量测定结果

本实验对柱温的不同升温速率进行了考察。在检测器温度、进样口温度、初始柱温保持不变的条件下，柱温控制采用程序升温：以140 ℃为起始柱温，以4 ℃/min升温至240 ℃，以140 ℃为起始柱温，以10 ℃/min升温至240 ℃。结果发现：以4 ℃/min的升温速率，可以将组分实现较好分离，不拖尾，且保留时间适宜。本试验主要研究了红花软胶囊中亚油酸的含量测定方法，在测定过程中，参照《GB5413.27-2010婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定》及相关文献的检测方法，确定了色谱条件，并对测定方法进行了方法学考察。结果表明：本方法可靠、重现性好，可以作为红花软胶囊中亚油酸含量的测定方法；同时，确定红花软胶囊中主要指标成分亚油酸的含量≥30%。

[1]扈晓佳，殷莎，袁婷婷，等.红花的化学成分及其药理活性研究进展[J].药学实践，2013，3(3)：161-169.

[2]陈梦，赵丕文，孙艳玲，等.红花及其主要成分的药理作用研究进展[J].环球中医药，2012，7(5)：556-560.

[3]杨玉霞，吴卫，郑有良.红花研究进展[J].四川农业大学学报，2004，4(22)：365-368.

[4]国家药典委员会.中国药典(2015版)[S].中国医药科技出版社，2015：151.

[5]王兆木.红花[M].北京：中国中医药出版社，2001.

[6]吕培霖，李成义，王俊丽.红花籽油的研究进展[J].中国现代中药，2016，18(3)：387-389.

[7]杨丽华，张敏，马春，等.红花的现代研究进展[J].中国老年学杂志，2007，27(14)：1 429-1 430.

[8]海丽娜，陈业高，廖心荣.不同产地红花籽油中的脂肪酸的比较[J].云南师范大学学报：自然科学版，2004，24(1)：53-54

[9]蔺新英，徐贵发，王淑娥，等.红花籽油对动脉粥样硬化家兔血脂及脂质过氧化作用的影响[J].山东医科大学学报，2001，39(3)：212-214.

[10]王仁媛.红花籽油的抗炎作用的实验研究[J].河南中医，2008，28(2)：28-29.

[11]杨晓君，郭雪婷，王颖，等.复合红花油制剂降血脂作用初探[J].新疆农业科学，2012，49(5)：868-872.

[12]吴桂荣.红花油乳剂的降血脂作用研究[J].中国新药杂志，2003(2)：110-111.

[13]中华人民共和国卫生部.GB5413.27婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定[S].北京：中国标准出版社，2010.

[14]王书云，李国玉，黄健，等.GC法测定维吾尔药红花籽和红花籽油中亚油酸的含量[J].中国药师，2013，16(1)：13-17.

[15]蒲旭峰，胡文清.用气相色谱法测定红花籽油中亚油酸的含量[J].华西药学杂志，2001，16(6)：449-450.

[16]汪瑜，封雷.亚油酸气相色谱法测定方法探讨[J].预防医学情报杂志，2007，23(4)：503-504.

[17]芦雅丽，赵建邦，宋平顺.气相色谱法测定白苏子与紫苏子中亚油酸和α-亚麻酸的含量[J].中国药师，2010，13(8)：1 087-1 089.

Content determination of linoleic acid in safflower soft caplsule by gas chromatograp

ZHAI Xiaoru，LI Yongdong，ZHANG Hongbing，ZHANG Yan

(China Institute for Radiation Protection，Taiyuan 030006，China)

Objective：To establish the gas chromatograph method for quantitative determinate of linoleic acid in safflower soft caplsule.Methods：A column of 88% two cyanopropyl polysiloxane (60 m×0.25 mm，0.20 μm)was used.The FID was used as a detector，the temperature of the detector was 280 ℃.The injection port temperature was 250 ℃.The column temperature was controlled by temperature programming to 140 ℃ as a starting column，holded 5 min，with 4 ℃/min heated to 240 ℃，holded 15min，nitrogen was used an carrier gas，the flow rate was 1.0 mL/min，the splitting ratio was 30∶1.Results：The linear range of linoleum acid was 0.270 5～5.4033 mg/mL(r= 0.999 8)，the average recovery was 97.02%( RSD=1.3%，n=9).Conclusion：This GC method was accurate，sensitive and reproducible for the determination of safflower linoleic acid content in soft capsules.

safflower soft caplsule；gas chromatograp；linoleic acid

1671-8631(2017)06-0460-05

〔1〕本项目为新疆少数民族医药现代化专项课题(项目编号：200733146-1)

*本文通讯作者：张燕

R735.1

B

2016-10-09

(本文编辑：张红)

翟晓茹(1982— )，女，陕西省富平县，硕士学位，助理研究员。研究方向：药品质量管理及标准化研究。