关于川贝清肺糖浆中甘草酸检验方法的探讨

莫艳娇

摘 要：目的：建立高效液相色谱法测定川贝清肺糖浆中甘草酸的含量。方法：采用C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm），以乙腈、0.05%磷酸为流动相，流速为1 mL/min，检测波长为250nm，以外标法测定含量.结果：甘草酸在0.0738μg～1.845μg的范围内峰面积与测定浓度呈良好的线性关系，r=1.0000（n=7），平均回收率为99.2%，RSD为1.5%（n=9）.结论：高效液相色谱法专属性好，简便、快速，准确，重现性好.

关键词：HPLC法 川贝清肺糖浆 甘草酸 含量测定

川贝清肺糖浆由枇杷叶、苦杏仁、川贝母、麦冬、地黄、甘草、桔梗、薄荷等组成的复方制剂，现行标准中仅检查性状和相对密度，无含量测定等项目，这对药品内在质量的全面控制是一个欠缺，为保证药品质量，根据现行药品质量标准及参考有关报道，在大量试验的基础上，对川贝清肺糖浆中甘草（甘草酸）含量测定方法进行了研究。

一、样品及试药

1.1仪器

高效液相色谱仪：Waters2695/2996

1.2材料

甘草酸（中检所，批号为100018-200408，供含量测定用）；川贝清肺糖浆（广西大力神制药股份有限公司提供，批号为160601）；乙腈（色谱纯，广州西陇化工）；水为重蒸馏水；磷酸（色谱纯，重庆光复）。

二、方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱选用岛津科技有限公司GL公司的C18（ODS3）色谱柱（150mm×4.6mm，5μm）；乙腈为流动相A，0.05%磷酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为1ml/min；检测波长为250nm。在此波长下主成分峰的出峰位置无杂峰干扰；进样量10μl。在该色谱条件下，甘草酸峰峰形好，前、后均无杂峰影响。见附图1。

考虑到样品溶剂对色谱的干扰，根据《中国药典》附录中样品溶剂宜尽量采用流动相作溶剂的要求，采用本法的流动相作为溶剂时，在甘草酸峰的前后有杂质峰，影响分离度。经试验用水作溶剂，在该色谱条件下无干扰。见附图2。

2.2专属性试验（空白试验）

按处方制成不含甘草酸的样品，按拟定方法测定，结果表明在甘草酸出峰处无吸收峰出现。见附图3。

2.3线性关系与范围考察

称取甘草酸对照品9.232mg，置100ml量瓶中加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置5ml量瓶中加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得含甘草酸对照品0.0369mg/ml（36.9ug/ml）的溶液。分別进样2、5、10、15、20、30、50ul，记录峰面积。以甘草酸的峰面积Y对进样量X（ug）进行线性回归，得回归方程为：

Y=875010X-3459 r=1.0000（n=7）

结果见表1。

结果表明，进样量在0.0738ug～1.845ug

（7.38ug/ml～184.5 ug/ml）的范围内峰面积与测定浓度呈良好的线性关系。

2.4重复性试验

取同一批号样品（批号：160601）6份，按含量测定项下方法制备供试品溶液，在拟定的色谱条件下，进样，测定甘草酸的含量，结果显示本方法重复性良好，结果见表2。

2.5精密度试验

在上述的重复性试验中，连续进样6次，

A B

C

A.对照品溶液 B.样品溶液 C.阴性对照溶液

2.6稳定性试验

取对照品溶液（0.04065mg/ml），于0，2，4，8，12h分别进样，依法测定甘草酸峰面积值，结果显示，溶液至少在12小时内是稳定的。结果见表4。

2.7加样回收试验

精密量取已知含量的同一批供试品（批号：160601，含量为0.25mg/ml）3份各20ml，置100 ml量瓶中，各精密加入一定量的甘草酸对照品（见表5），加水至刻度，摇匀，得3个不同浓度的样品溶液。各取3份做平行试验，计算加样回收率。测定结果令人满意。结果见表6。

三、讨论

3.1流动相的选择

流动相的选择上，有关文献报道均有不同，如以甲醇-0.2mol /L乙酸胺溶液（用冰醋酸调节pH值至4.2）（58： 42）、甲醇-0.2mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸（67：3：1）、乙腈-0.5%磷酸溶液（含1mmol/L醋酸铵溶液）（33：67）、10mmol/L醋酸铵溶液（pH=6.86）-乙腈（79.5∶20.5），等。以上流动相，经试验甘草酸峰形均不理想。采用《中国药典》2015版一部甘草含量测定项下的流动相，梯度洗脱的方法，经试验得到较好的分离效果，甘草酸峰形也很好。

3.2溶剂选择

甘草酸的溶剂选择上，各报道中各有不同，因甘草酸易溶于水、乙醇，分别采用乙醇、水、甲醇及流动相溶解，其中流动相和乙醇、甲醇的溶解度较好但所得分离效果较差，有杂质峰对甘草酸峰产生影响，各项条件均不能满足《中国药典》的要求；而用水作溶剂得到的色谱峰峰形好，各项条件均满足《中国药典》的要求，故本文选水作为溶剂。

3.3检测波长选择

甘草酸的吸收波长，有250nm、252 nm、255 nm等，但大部分定250nm为吸收波长，经对对照品在200nm～400 nm进行扫描，最大吸收在250nm处，故定250nm为检测波长能得到较好的检测结果。

四、结论

川贝清肺糖浆为《卫生部颁标准》品种， 标准中质量监控项目简单，不利于药品的质量监控。为了保证药品的质量，在参考有关报道和大量试验的基础上，对川贝清肺糖浆中的甘草进行含量测定。本文采用HPLC法测定甘草（甘草酸）的含量，方法灵敏、专属性强、操作简便、结果准确.

参考文献

[1]《中国药典》2015年版一、四部，化学工业出版社.

[2]薛非凡、曾丽、王丽玉、李炳森，川贝清肺糖浆质量标准研究，《中国药业》2014年12期.

[3]陈建琴，川贝清肺糖浆中苦杏仁苷、甘草苷和甘草酸的双波长UPLC法测定，《中国医药工业杂志》2015年 第8期.

[4]薛翌佳，HPLC测定川贝清肺糖浆中甘草酸的含量，《海峡药学》2014年 第12期.

[5]邓阳、丁雯雯、颜苗、盛志峰、龚慧，HPLC法测定甘草制剂中甘草酸的含量，《湖南中医杂志》 2013年08期.