黄连不同炮制方法和制剂工艺体外抑菌作用比较

卢肖英 赖静雯 罗 维

黄连不同炮制方法和制剂工艺体外抑菌作用比较

卢肖英 赖静雯 罗 维

目的探讨黄连不同炮制方法和制剂工艺的体外抑菌作用。方法采用固体培养基稀释法，观测不同炮制方法及制剂工艺对金黄色葡萄球菌以及大肠杆菌的抑菌作用。结果对金黄色葡萄球菌的抑菌作用中，生黄连水浸液的最低抑菌浓度（MIC）值为0.6 g/L，生黄连水煎液、酒制黄连水浸液以及酒制黄连水煎液的MIC值均为1.25 g/L；对大肠杆菌的抑菌作用中，生黄连水浸液的MIC值为2.5 g/L，生黄连水煎液MIC值为5.0 g/L，酒制黄连水浸液以及酒制黄连水煎液的MIC值均为10.0 g/L。结论生黄连抑菌作用高于酒制黄连且水浸液的抑菌作用高于水煎液。

黄连；炮制方法；制剂工艺；抑菌作用

黄连是中药材之一，具有清热燥湿以及泻火解毒的功效。现代药理学研究表明，其具有抵抗微生物的作用，主要成分小檗碱是抵抗微生物的活性物质，但是不同炮制方法以及制剂工艺下，小檗碱含量会有所不同，可对黄连的效用产生一定影响[1]。因此，探究黄连不同炮制方法和制剂工艺体外抑菌作用具有重要意义，可为黄连的临床应用提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料、仪器和菌种

1.1.1 实验材料 生黄连、酒制黄连（合肥和义堂有限责任公司）。

1.1.2 实验仪器 细胞级超级粉碎机（济南达微机械有限公司，型号：XDW-6J）；超净工作台（上海智减分析仪器制造有限公司，型号：ZHJH-C11098）；磁力加热搅拌器（德国IKA公司，型号：RH）；恒温摇床（上海智诚分析仪器制造有限公司，型号：ZHWY-1038）；旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂，型号：RE52CS）；生物显微镜（日本OLY公司，型号：Olympus-CX21）。

1.1.3 菌种 金黄色葡萄球菌；大肠杆菌。

1.2 供试药物制备

1.2.1 黄连水 取70 ℃下烘干的生黄连10 g，酒制黄连10 g，加入200 ml去离子水浸泡40 min，每次煎煮30 min，共煎煮2次，以每分钟5000 r离心10 min，取上清液灭菌处理，于4 ℃环境下保存，制作成为20、10、5、2.5、1.25、0.6、0.3和0.15 g/L的浓度。

1.2.2 超微粉及水浸液的制备 取生黄连500 g，酒制黄连500 g，在70 ℃环境蒸干，运用超微细胞粉碎机粉碎20 min；送检后发现，粒径＜3 μm的为27.6%，1～10 μm的为57.1%，3～32 μm为70.1%。

在水浸液的制备中，将10 g超微粉加沸处理，去水离子，沉淀后取上清液，在高压蒸汽灭菌后保存于4 ℃冰箱中，制作成20、10、5、2.5、1.25、0.6、0.3和0.15 g/L的浓度。

1.3 LB液体和固体培养基 对于LB液体培养基的制备，采用酵母菌提取物0.5 g、氯化钠0.5 g、蛋白陈1 g、去离子水100 ml，配置100 ml培养基，调节pH值至7.4～7.6，行高压蒸汽灭菌处理。

对于LB固体培养基的制备，在上述实验材料基础上，加入2 g琼脂，其他条件相同。

1.4 LB药物固体培养基 取9个50 ml的血清瓶，8个中加入黄连液体，第9个加入去离子水。按照固体培养基方式，加入酵母菌提取物0.5 g、氯化钠0.5 g、蛋白陈1 g、去离子水100 ml，配置100 ml培养基，调节pH值至7.4～7.6，加热溶解后，测定最低抑菌浓度（MIC）值，制备方式同上。

1.5 菌液制备和抑菌实验 将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌传代处理后，运用LB液体培养基在37 ℃下培养，取生长期菌液，应用细胞计数法，将其浓度调整为5×104个/ml。取5×104个/ml浓度的100 μl溶液，于LB固体培养基中培养，均匀后覆盖1 min，在37 ℃下培养24 h，重复实验，将不含有药物的LB琼脂平板作为对照组。

1.6 判定标准 以LB琼脂培养基上金黄色葡萄球菌以及大肠杆菌的MIC值为判定标准。

2 结果

2.1 对金黄色葡萄球菌的抑菌作用分析 生黄连水浸液对金黄色葡萄球菌的MIC值为0.6 g/L，生黄连水煎液、酒制黄连水浸液以及酒制黄连水煎液的MIC值均为1.25 g/L，见表1。

表1 不同炮制方法及制剂工艺对金黄色葡萄球菌的抑菌作用

2.2 对大肠杆菌的抑菌作用分析 生黄连水浸液对大肠杆菌的MIC值为2.5 g/L，生黄连水煎液的MIC值为5.0 g/L，酒制黄连水浸液以及酒制黄连水煎液的MIC值均为10.0 g/L，见表2。

表2 不同炮制方法及制剂工艺对大肠杆菌的抑菌作用

3 讨论

黄连的炮制方法包括酒制、巴豆制以及姜汁制等，不同的炮制方式会对黄连的药性造成一定影响，改变其化学成分。生黄连具有苦寒的特点，具有清热燥湿以及泻火解毒的功效，但是酒制黄连则需要药引，可以缓和寒性，发挥功效[2]。因此，在应用黄连的过程中，需要根据应用途径，合理选择炮制方式。另外，超微粉碎技术具有较高的应用价值，可以将黄连粉碎成为颗粒，析出小檗碱，从而发挥黄连的抑菌作用[3]。

不同炮制方法对黄连的药性具有一定影响，其主要是由于炮制方法会改变药物寒热温凉药性，根据黄连的应用不同特性，对其采用针对性的炮制方法，可以纠正其偏胜或者偏弱的药性。如生黄连具有苦寒的特点，可以发挥清热燥湿以及泻火的功效；胆汁制黄连则对大肠杆菌具有明显的抑制作用，证明胆汁可以提升黄连的苦寒特性；而酒制黄连在炮制过程中，会增加药片的颜色，味道较苦且带有酒气。可见，在黄连的应用中，不同的炮制方法对于黄连的药性具有明显的影响，在临床应用中，需要对其进行合理划分，并且采用针对性的炮制方法。

在黄连的不同炮制方法中，其对药物的升降浮沉具有直接影响。升降浮沉主要是指药物对人体的作用趋势，其具有相同或者相反两种变化趋势。在药物应用中，对于性温热的药物，多采用升浮方式来调节；对于质重的药物，则多采用沉降方式。药物经过炮制后，会呈现不同的药性，酒制黄连经过酒精炮制后，则具有缓和寒性的特点，可以降低对患者脾胃的损伤，从而可以达到相应的功效；胆汁制黄连经过胆汁炮制后，会增加药物的苦寒特性，其可以有效抑制大肠杆菌，对于患者具有较高的应用价值。

不同炮制方式会对药物的有效成分产生一定影响，其主要是由于在中药炮制过程中，药物的有效成分会与不同物质产生化学反应，继而造成部分物质的分离。在黄连炮制过程中，其不同炮制方式同样对药物的有效成分具有一定影响。在黄连的炮制中，采用水煎液方式，可以在一定程度上释放黄连中的小檗碱，继而对金黄色葡萄球菌以及大肠杆菌产生一定抑制作用。但是在超微粉碎情况下，其分离的小檗碱成分含量则更多，其主要是由于小檗碱成分在接触面增大的情况下，会提升释放量，而超微粉碎方式则可以最大程度地扩宽药物的接触面，从而提升小檗碱的释放含量，提升药物的药用价值。

本研究结果显示，对金黄色葡萄球菌的抑菌作用中，生黄连水浸液的MIC值为0.6 g/L，生黄连水煎液、酒制黄连水浸液以及酒制黄连水煎液的MIC值均为1.25 g/L；对大肠杆菌的抑菌作用中，生黄连水浸液的MIC值为2.5 g/L，生黄连水煎液MIC值为5.0 g/L，酒制黄连水浸液以及酒制黄连水煎液的MIC值均为10.0 g/L。提示生黄连的抑菌作用高于酒制黄连且水浸液的抑菌作用高于水煎液。其可能是由于酒制黄连可能受到酒精作用，导致其化学成分出现变化，继而降低了抑菌效果；另外，超微粉碎下的黄连抑菌作用高于水煎液，其可能是由于超微粉碎可以促进黄连抑菌成分析出。实践研究显示，不同炮制方法对黄连的生物碱含量具有明确影响，超微粉碎则可以更好地析出小檗碱，从而提升黄连的抑菌效果[4]。还有研究指出，不同炮制方法对黄连的主成分及抗菌作用具有直接影响，如酒制黄连的抑菌作用较低，可能是由于酒精的作用，导致黄连的成分发生变化，进而影响黄连的抑菌作用[5]。

综上所述，生黄连抑菌作用高于酒制黄连且水浸液的抑菌作用高于水煎液。可见，黄连在不同炮制方式下，其小檗碱的含量会呈现差异性变化，在临床应用中，常常对于黄连难以进行有效区分，对于药物的药用价值产生了一定影响，在此情况下，应根据黄连的特性以及临床应用，采用差异化炮制方法，以最大程度地发挥黄连的药用价值。

[1] 文燕,张玉琴.不同炮制方法对黄连质量影响[J].大家健康(学术版),2015,9(21):39-40.

[2] 栗珍.黄连的不同炮制方法对不同微生物抑菌效果的影响[J].生物技术世界,2014(12):151-153.

[3] 吴朝阳.黄连的不同炮制方法及临床药用经验[J].北方药学,2013,10(6):58-60.

[4] 张帅,赵宏冰,何芳,等.不同炮制方法对黄连5种生物碱含量的影响研究[J].中国药师,2013,16(1):19-21.

[5] 王荣.不同炮制方法对黄连主成分含量及抗菌活性的影响[J].中国医药导报,2012,9(1):58-60.

10.12010/j.issn.1673-5846.2017.06.008

广州医科大学附属第一医院，广东广州 510120

卢肖英（1968.8-），大专学历，主管中药师。研究方向：中药药剂