牛溶血性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

（青海省西宁市大通县黄家寨镇兽医站青海西宁810000）

牛溶血性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

赵美盈

（青海省西宁市大通县黄家寨镇兽医站青海西宁810000）

西宁市某肉牛养殖场饲养的多头犊牛出现了体温升高、咳嗽和呼吸困难等症状，采集该牛场病死犊牛肝脏、心脏和肺脏作为病料，通过病料抹片镜检、细菌分离培养及生化鉴定，对造成犊牛病死原因进行了分离鉴定，并对分离细菌做药物敏感性试验，为临床用药提供依据。

犊牛；溶血性巴氏杆菌；分离鉴定；药敏试验

2016年3月，西宁市某肉牛养殖场多头犊牛发病，临床主要表现为体温升高达41℃，咳嗽，呼吸困难，腹泻，流鼻涕，个别病牛出现抽搐和肌肉痉挛等症状，牛场兽医先后使用庆大霉素、青霉素、环丙沙星及磺胺嘧啶等药物治疗，效果不显著，急性病例3~4d死亡，该牛场一个多月先后死亡犊牛达80多头，造成了极大的经济损失。

1 材料与方法

1.1 材料

①病料源于西宁市某肉牛养殖场病死犊牛的肺脏、肝脏和心脏。②革兰氏染色液、瑞氏染色液；麦康凯培养基、血清肉汤培养基、血琼脂平板培养基、营养琼脂平板培养基和血琼脂斜面培养基；药敏试片。

1.2 方法

1.2.1 病料涂片镜检将病料新鲜切片置于载玻片上制成涂片，再滴几滴甲醇，经3min左右待其干燥后，分别进行革兰氏染色和瑞氏染色，镜检查看细菌形态特征和染色特性。

1.2.2 细菌分离培养通过接种环进行病料组织取样，划线接种在血琼脂平板培养基、营养琼脂平板培养基上，于37℃培养24h，查看菌落形态、细菌生长状况和血琼脂平板有无溶血现象。挑取典型菌落接种在血琼脂平板培养基上，37℃培养24h，生长菌落形态一致即可作为鉴定用菌株；从菌落形态一致的血琼脂平板培养基上挑取单个菌落分别接种在血清肉汤培养基、血琼脂斜面培养基，于37℃培养24h，涂片，革兰氏染色，显微镜观察可见革兰氏阴性球状杆菌或小杆菌。

1.2.3 生化试验①将血琼脂斜面培养基上的细菌（下同）分别接种在水杨苷、甘露醇、乳糖、D-山梨醇和D-木糖中，于37℃培养24h，观察结果。②将细菌接种于麦康凯培养基中，37℃培养18~24 h，查看是否有菌落生长，有则为阳性。③将细菌接种在硝酸盐培养基中，于37℃恒温箱内培养18~24h，然后加入硝酸盐还原试验试剂，查看细菌是否还原硝酸盐。

1.2.4 药敏试验采用圆形纸片扩散法进行药物敏感性试验，检测细菌对药敏纸片的敏感程度。

2 结果

2.1 病料涂片镜检结果

革兰氏染色镜检可见革兰氏阴性小杆菌；瑞氏染色镜检可见两极着色的小杆菌。

2.2 细菌分离培养结果

血清肉汤培养基上的细菌生长良好，肉汤浑浊；血琼脂平板培养基上的细菌生长良好，形成湿润、边缘整齐、半透明的圆形菌落呈灰白色，且出现β-溶血；营养琼脂平板培养基上的细菌生长不良。挑取典型菌落涂片后，经革兰氏染色镜检可见以单个或成双排列、两端钝圆的革兰氏阴性小杆菌。

2.3 生化试验结果（见表1）。

2.4 药敏试验结果

从该场病死犊牛脏器组织中分离的细菌对强力霉素、红霉素、复方新诺明和青霉素等药物表现出耐药性；对氯霉素、卡那霉素、庆大霉素和氧氟沙星等药物敏感。临床用药时可选择敏感药物进行治疗。

表1 生化试验结果

3 小结与讨论

1）根据细菌分离鉴定结果可确诊该肉牛养殖场发生牛溶血性巴氏杆菌病。溶血性巴氏杆菌作为一种条件性致病菌，在营养缺乏，潮湿和气温骤变等诱因条件下会降低牛机体抵抗力，病原菌伺机侵入机体而致病。

2）养牛户（场）要采取综合性预防措施，改善犊牛饲养环境条件，保持圈舍通风良好，以防湿度过大，降低氨气浓度，同时做好气温偏低时犊牛防寒保暖工作，避免不良环境因素的刺激。此外，确保犊牛吃到、吃足初乳能够有效抵御溶血性巴氏杆菌的感染。■

10.3969/j.issn.1008-4754.2017.04.011