胸腺瘤组织中表皮生长因子受体和胰岛素样生长因子-1受体的表达及其与临床特征的关系

李新宇 张海云 何荣琦 张万飞 许荣誉

(福建医科大学附属泉州第一医院胸部肿瘤外科，福建 泉州 362000)

胸腺瘤组织中表皮生长因子受体和胰岛素样生长因子-1受体的表达及其与临床特征的关系

李新宇 张海云 何荣琦 张万飞 许荣誉

(福建医科大学附属泉州第一医院胸部肿瘤外科，福建 泉州 362000)

目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)、胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)在胸腺瘤组织中的表达及其与临床病理特征及预后的关系。方法 60例胸腺瘤患者及60例胸腺滤泡性增生患者，应用免疫组化法测定胸腺瘤患者及胸腺滤泡性增生患者组织中EGFR、IGF-1R阳性表达情况，分析胸腺瘤组织中EGFR和IGF-1R的表达及与临床特征及预后的关系。结果 胸腺瘤患者组织中EGFR、IGF-1R阳性表达率明显高于胸腺滤泡性增生患者(P<0.05)。EGFR阳性表达与Masaoka分期、淋巴结转移有关(P<0.05)，IGF-1R阳性表达与Masaoka分期有关(P<0.05)。EGFR阳性表达者5年生存率低于EGFR阴性表达者(χ2=5.040,P=0.025)；IGF-1R阳性表达者5年生存率低于IGF-1R阴性表达者(χ2=5.367,P=0.020)。结论 胸腺瘤患者组织中EGFR、IGF-1R高表达，其阳性表达可能与胸腺瘤发生及进展相关，EGFR、IGF-1R高表达可影响胸腺瘤患者生存率，可提示患者预后不良。

表皮生长因子受体；胰岛素样生长因子-1受体；胸腺瘤

胸腺瘤是纵隔肿瘤中较常见的一种，其临床病理特征表现为肿瘤细胞内伴有非肿瘤性淋巴细胞浸润〔1〕。胸腺瘤患者由于免疫系统失衡会产生多种免疫疾病(如常见的重症肌无力等)〔2〕。关于胸腺瘤的发病机制目前尚不完全清楚，但相关细胞因子的异常表达与胸腺瘤的发生有密切的关系。上皮生长因子(EGF)是机体中具有多种生物活性的细胞因子，可通过上调胸腺组织中上皮生长因子受体(EGFR)而促进上皮细胞分化、增生、迁移及浸润〔3〕。研究指出〔4〕，胸腺组织中EGFR异常表达与胸腺瘤发生、进展有密切的关系。胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)属于糖蛋白跨膜受体，可促进细胞增殖、分化、转移、抑制细胞凋亡，且与肿瘤发生、生长及新生血管形成有密切的关系〔5〕。本研究将旨在探讨EGFR、IGF-1R在胸腺瘤组织中的表达及其与临床病理特征及预后的关系。

1 资料及方法

1.1 临床资料 2011年1月至2016年1月选取福建医科大学附属泉州第一医院外科收治的60例胸腺瘤患者，均经病理组织确诊，术前均未接受过放化疗治疗。其中男35例，女 25例，年龄 40～78〔平均(61.2±2.4)〕岁，肿瘤直径：<5 cm 20例，≥5 cm 40例；WHO分型：A型8例，AB型12例，B1型15例，B2型 15例，B3型10例；Masaoka分期：Ⅰ+Ⅱ 29例，Ⅲ+Ⅳ 31例；合并重症肌无力 22例，合并淋巴结转移 25例。另选取同期收治的60例胸腺滤泡性增生患者为对照，男 32例，女 28例，年龄 28～80〔平均(60.8±3.2)〕岁，两组性别、年龄比较无统计学差异(P>0.05)，具有可比性。

1.2 免疫组织化学法

1.2.1 试剂及仪器 EGFR鼠抗人单克隆抗体(美国Sigma公司)；EGFR试剂盒(上海酶联实业有限公司)；IGF-1R鼠抗人单克隆抗体(美国NeoMarkers公司)；IGF-1R试剂盒(上海酶联实业有限公司)；电子显微镜(深圳超眼科技有限公司)。

1.2.2 测定方法 应用免疫组化法测定胸腺瘤组织中EGFR和IGF-1R蛋白表达，染色步骤：将胃癌组织及正常胃黏膜组织标本蜡块切成4 μm厚切片，常温下乙醇梯度脱水，二甲苯脱蜡，应用3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶，采用0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗标本2次，常温下应用正常羊血清工作液封闭样本10 min，依次加入EGFR鼠抗人单克隆抗体及IGF-1R鼠抗人单克隆抗体，采用PBS冲洗标本2次，加入辣根过氧化物酶标记的链霉素工作液，于37℃恒温培养箱中(型号：DNP-9022；上海精宏实验设备有限公司)孵育25min，经PBS冲洗后，经二氨基联苯胺(DAB)染色，苏木素复染，采用中性树胶封固。

1.3 结果判定 由病理科2名高年资医生在双盲情况下阅片，EGFR、IGF-1R阳性表达均以细胞质或细胞核内出现棕黄色颗粒为标准，采用半定量评分法对染色效果进行评价，以高倍视野下500个细胞着色情况进行积分，根据着色强度(深浅)分别计为0分(无色)～3分(棕褐色)；根据阳性细胞所占百分比计分：阳性细胞阴性为0分，≤10%为1分，11%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。染色强度积分=着色强度计分×阳性细胞数，0～2分为阴性(-)，3～5分为弱阳性(+)，6～9分为阳性()，10～12分为强阳性()。阳性率=(弱阳性+阳性+强阳性)/总例数×100%。

1.4 统计学方法 应用SPSS19.0软件进行χ2检验、Kaplan-Meier曲线分析。

2 结 果

2.1 EGFR、IGF-1R阳性表达 胸腺瘤患者组织中EGFR、IGF-1R阳性表达率〔54例(90.00%)，50例(83.33%)〕明显高于胸腺滤泡性增生患者〔2例(3.33%)，3例(5.00%)；χ2=90.536，74.649，均P=0.000〕，见图1。

2.2 EGFR、IGF-1R阳性表达及其与临床特征的关系 EGFR阳性表达与Masaoka分期、淋巴结转移有关(P<0.05)，IGF-1R阳性表达与Masaoka分期有关(P<0.05)。见表1。

2.3 EGFR、IGF-1R阳性表达与胸腺瘤预后的关系 2011年1月至2016年1月对患者进行随访，随访时间12～60个月，平均35个月，共56例患者获得随访，其中4例失访，共32例(57.14%)患者生存。采用单因素Kaplan-Meier曲线分析数据显示，EGFR阳性表达者5年生存率为52.00%(26/50)，低于EGFR阴性表达者100.00%(6/6)(χ2=5.040,P=0.025)。IGF-1R阳性表达者5年生存率为50.00%(23/46)，低于IGF-1R阴性表达者90.00%(9/10)(χ2=5.367,P=0.020)。

图1 半定量评分法评价EGFR、IGF-1R表达(×400)

表1 EGFR、IGF-1R阳性表达及其与临床特征的关系〔n(%)〕

3 讨 论

EGFR是具有酪氨酸激酶活性的细胞膜表面糖蛋白受体，广泛存在于哺乳动物上皮细胞膜表面，并在上皮恶性肿瘤中阳性表达〔6〕。EGFR与相关配体在胞内发生磷酸化作用而激活细胞内一系列信号传导通路，从而启动机体多种生命活动〔7〕。EGFR自身突变会导致配体表达增多，非配体持续活动，从而导致细胞生长失去调控性，使得细胞无限增生〔8〕。研究指出〔9〕，EGFR过表达与恶性肿瘤发生、增殖、浸润性、活动性、黏连性、新生血管形成及细胞凋亡抑制有密切的关系。在脑胶质细胞癌、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、结肠癌等多种癌症组织中均发生EGFR过表达的情况〔10〕。本研究结果提示在胸腺瘤患者中存在EGFR高表达的情况，且EGFR在胸腺瘤的发展中起到重要的作用，可促进胸腺瘤从包膜完整性进展到浸润周围组织器官。Kaplan-Meier曲线分析提示EGFR阳性表达与胸腺瘤患者不良预后有密切关系。EGFR在胸腺瘤中的作用机制可能与其异常激活PI3K-AKT信号通路及RAS-RAD-MAPK信号通路、诱导细胞增生、抑制细胞凋亡有关。

IGF-1R属于糖蛋白跨膜受体，广泛存在于人胞质区、跨膜区及胞外区。研究显示〔11〕，IGF-1R在多种恶性肿瘤中均存在过表达，如前列腺癌、胃肠道恶性肿瘤、卵巢癌、乳腺癌、肺癌等。Zucali等〔12〕研究指出，IGF-1R可促进肿瘤细胞增殖、分化及抑制细胞凋亡，与肿瘤增殖、浸润、转移有密切关系。Girard等〔13〕对56例胸腺恶性肿瘤及7例胸腺良性病变患者应用免疫组化法测定IGF-1R，结果表明恶性病变组IGF-1R阳性表达率为86%，而良性病变组为43%，且IGF-1R表达水平与胸腺组织恶性病变患者临床病理特征有关。本研究结果提示在胸腺瘤患者中存在IGF-1R过表达的情况，且IGF-1R可能参与胸腺瘤病理浸润、分化过程。另外IGR-1R过表达可影响胸腺瘤患者生存率，通过测定胸腺瘤组织IGF-1R表达情况可预测胸腺瘤患者远期预后情况。IGF-1R在胸腺瘤中的作用机制可能由于IGF-1R异常表达可促使血管内皮生长因子表达上调，促使肿瘤血管形成及生长。此外，IGR-1R信号转导可改变肿瘤细胞黏附性，诱导肿瘤细胞向恶性方向发展，促进肿瘤细胞生长、浸润及转移。

1 袁晓龙,束余声.胸腺瘤相关疾病发病机制研究进展〔J〕.国际免疫学杂志,2014;37(5):415-8.

2 张云峰,于 磊,景 筠,等.合并重症肌无力的胸腺瘤治疗与预后特点分析〔J〕.中华外科杂志,2015;53(8):612-6.

3 马遇庆,师 艺,崔文丽,等.EGFR异常表达与胸腺上皮性肿瘤组织学分型关系研究〔J〕.新疆医科大学学报,2014;37(9):1144-7.

4 李文姗,余 琦,李 宁,等.胸腺瘤中EGFR和IGF-1R的表达及其意义〔J〕.临床与实验病理学杂志,2016;32(3):297-300.

5 李文姗,梁玉梅,余 琦,等.C-KIT、EGFR 及 IGF-1R 在胸腺瘤及其他肿瘤中的研究进展〔J〕.现代肿瘤医学,2016;24(7):1154-7.

6 Serizawa M,Murakami H,Watanabe M,etal.Peroxisome proliferator-activated receptor γ agonist efatutazone impairs transforming growth factor β2-induced motility of epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor-resistant lung cancer cells〔J〕.Cancer Sci,2014;105(6):683-9.

7 Amaro A,Mirisola V,Angelini G,etal.Evidence of epidermal growth factor receptor expression in uveal melanoma:inhibition of epidermal growth factor-mediated signalling by Gefitinib and Cetuximab triggered antibody-dependent cellular cytotoxicity〔J〕.Eur J Cancer,2013;49(15):3353-65.

8 Sukawa Y,Yamamoto H,Nosho K,etal.Alterations in the human epidermal growth factor receptor 2-phosphatidylinositol 3-kinase-v-Akt pathway in gastric cancer〔J〕.World J Gastroenterol,2012;18(45):6577-86.

9 张连民,郝李刚,张 华,等.血清癌胚抗原与非小细胞肺癌患者EGFR突变的关系及其对预后的影响〔J〕.中国肿瘤临床,2014;41(17):1075-9.

10 刘慧慧,王孟昭,胡 克,等.EGFR-TKI在非小细胞肺癌中耐药机制的研究进展〔J〕.中国肺癌杂志,2013;16(10):535-40.

11 夏秋媛.胸腺上皮性肿瘤的分子病理研究进展〔J〕.医学研究生学报,2013;26(3):314-8.

12 Zucali PA,Petrini I,Lorenzi E,etal.Insulin-like growth factor-1 receptor and phosphorylated AKT-serine 473 expression in 132 resected thymomas and thymic carcinomas〔J〕.Cancer,2010;116(20):4686-95.

13 Girard N,Teruya Feldstein J,Payabyab EC,etal.Insulin-like growth factor-1 receptor expression in thymic malignancies〔J〕.Thorac Oncol,2010;5(9):1439-46.

〔2017-04-07修回〕

(编辑 袁左鸣/滕欣航)

泉州市科技计划项目(No.2012Z6)

许荣誉(1964-)，男，硕士，主任医师，主要从事胸部肿瘤外科研究。

李新宇(1979-)，男，主治医师，主要从事胸部肿瘤外科研究。

R73

A

1005-9202(2017)13-3240-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.13.054