胃癌组织中Mina53和Survivin基因的表达及临床意义

阮 佼

(三峡大学仁和医院重症医学科，湖北 宜昌 443001)

胃癌组织中Mina53和Survivin基因的表达及临床意义

阮 佼

(三峡大学仁和医院重症医学科，湖北 宜昌 443001)

目的 探讨胃癌组织Mina53和Survivin的表达及临床意义。方法 应用RT-PCR技术检测38例胃癌组织和对应的癌旁组织中Mina53和Survivin mRNA表达水平，并统计其与胃癌临床分期之间的关系。结果 胃癌组织中Mina53、Survivin mRNA阳性检出率明显高于癌旁组织，随着胃癌临床分期的上升，Mina53、Survivin mRNA表达水平也明显升高。结论 Mina53和Survivin参与胃癌的发生发展，联合检测Mina53和Survivin可能有助于胃癌的早期临床诊断、早期治疗、病情评估及预后判定。

胃癌；Mina53；Survivin

胃癌的发生发展是一个涉及癌基因、抑癌基因、凋亡相关基因、转移相关基因不同形式改变的复杂过程。大多数早期患者无典型的临床症状，少数患者会出现恶心、呕吐或是类似消化性溃疡的上消化道不适症状，而待其出现较明显的临床表现如腹部持续性疼痛多提示肿瘤扩展已经超出胃壁。如经积极的手术治疗、结合化疗或其他辅助治疗措施，早期胃癌的预后情况较好。在缺乏特异性肿瘤标志物的情况下，X线钡餐、胃镜以及腹部CT在胃癌的诊断方面起到了非常重要的作用，但钡餐和CT检查需在有明显形态改变的情况下方可有阳性发现，胃镜可较前者更早期发现黏膜的形态改变并可直视下取组织活检，但其终归为一种有创检查，过程较痛苦，而且多数健康查体人员对无痛胃镜的接受率还不高。Mina53是新近发现在消化道肿瘤如结肠癌、食管癌组织中明显高表达的一种有原癌基因c-Myc诱导的核抗原，已有研究表明其表达水平在胃癌组织中显著高于正常胃黏膜组织，且同胃癌的临床分期呈正相关〔1〕。Survivin是一种强有力的凋亡抑制因子，参与胃癌等〔2，3〕众多肿瘤的发生发展进程，胡华等〔4〕通过对胃癌患者血清中Survivin抗体的检测发现胃癌组血清Survivin抗体水平明显高于正常对照组，其与肿瘤的淋巴结转移、分化程度、临床病理分期显著相关。本研究拟对胃癌组织中原癌基因c-Myc诱导的核抗原Mina53和凋亡抑制因子Survivin的表达情况及其临床意义进行探讨。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2011年3月至2013年9月就诊于三峡大学仁和医院行手术治疗且术前未行放化疗的胃癌患者，并排除其他系统明显疾患，手术切除胃癌组织标本38例和距肿瘤边缘>5 cm癌旁组织38例，男24例，女14例；年龄36～76〔平均(56.18±10.21)〕岁。组织标本均经病理科确诊为胃癌，并根据国际抗癌联盟TNM分级标准进行严格的临床分期，其中Ⅰ期6例，Ⅱ期10例，Ⅲ期18例，Ⅳ期4例。所有标本收集后均存放于-80℃冰箱冻存供后续实验使用。

1.2 仪器和试剂 PCR仪(EppendofAG)，电泳槽(美国伯乐)，Trizol RNA提取试剂盒(Invitrogen)，RT-PCR试剂盒(大连宝生物工程有限公司)，低温离心机(Eraeus instruments公司)，电子称量仪(德国METTLER TOLEDO公司)。

1.3 PCR引物设计与合成 本实验涉及Survivin、Mina53及内参β-actin三条引物均由上海生工设计合成，Mina53上游：5′cccattatgatgatgtcga3′，下游：5′tgttctggtaggtgctgat3′；Survivin上游：5′caccgcatctctacattcaaga3′，下游：5′caagtctggctcgttctcagt3′；β-actin上游：5′ctgggacgacatggagaaaa3′，下游：5′aaggaaggctggaagagtgc3′。

1.4 RT-PCR检测 将所有组织标本逐一剪碎后置入匀浆器中，加入Trizol试剂按一步法提取各组织中总RNA，并按试剂盒中说明书测定各样品中RNA的纯度和浓度，以确保各OD260/OD280比值在1.8～2.0之间。取适量提取RNA反应物严格按照试剂盒说明书进行逆转录反应生成cDNA(反转录条件为30℃反应10 min；42℃～60℃反应15～30 min，95℃ 反应5 min，5℃ 反应5 min)，然后按试剂盒说明书反应条件扩增：94℃预变性5 min，40个循环(94℃变性30 s，54℃退火45 s，72℃延伸10 s，共40个循环)，72℃再延伸10 min。取扩增产物5 μl和缓冲液 2 μl混合均匀后于1.5%琼脂糖凝胶上点样电泳并将结果扫描成像统计分析，每一组织标本重复扩增3次，产物量取平均值进行统计分析。

1.5 结果判读 将所有组织标本PCR电泳结果摄像分析，应用凝胶分析系统处理，产物量以条带光密度/面积表示，将不同标本中Mina53和Survivin mRNA产物量同内参β-actin mRNA产物量比值分别进行统计分析，计算各临床分期胃癌组织及所有癌旁组织标本中Mina53和Survivin mRNA阳性检出率和平均表达水平。

1.6 统计学方法 应用SPSS13.0统计软件包进行χ2检验、单因素方差分析。

2 结 果

2.1 胃癌标本组织和癌旁组织中Mina53、Survivin mRNA 检出情况 癌旁组织中Mina53 mRNA、Survivin mRNA阳性检测率分别为10.53%(4例)、18.42%(7例)，明显低于癌组织中Mina53 mRNA〔26.11%(30例)〕、Survivin mRNA〔76.32%(29例)〕的阳性检测率(χ2=35.98，25.54，P<0.01)。随胃癌组织临床分期的增高，Mina53、Survivin mRNA的检出率并不呈逐渐增高趋势(χ2=3.62，P>0.05)，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期胃癌组织中Mina53和Survivin mRNA检出率分别为50%(3例)、80%(8例)、83.33%(15例)、100%(4例)和66.67%(4例)、70%(7例)、77.78%(14例)、100%(4例)。

2.2 胃癌组织标本和癌旁组织中Mina53和Survivin mRNA表达水平 不同临床分期胃癌组织中Mina53 mRNA含量随分期不断增加(F=9.952，P<0.01)，Ⅲ期、Ⅳ期胃癌组织中Mina53 mRNA含量明显高于癌旁组织(P=0.007和P<0.001)。不同临床分期胃癌组织中Survivin mRNA含量也随胃癌临床分期的升高而不断上升(F=9.101，P<0.01)，Ⅲ期、Ⅳ期胃癌组织中Survivin mRNA含量明显高于癌旁组织(P=0.038和P=0.001)。见表1，图1。

表1 不同分期胃癌组织和癌旁组织中Mina53和Survivin mRNA表达情况

与其他临床分期胃癌组织比较：1)P<0.01；与癌旁组织比较：2)P<0.05

图1 Mina53和Survivin mRNA在不同临床分期胃癌组织中表达

3 讨 论

Mina53为原癌基因myc诱导的核抗原并作为myc基因部分功能的具体行使者参与细胞增殖或分化的调节。它位于3号染色体(3q12.1)上，人类Mina53基因有12个外显子，11个内含子，编码一种465个氨基酸的蛋白质Mina53，分子量估计为52 800.28 D。其中第128～271号氨基酸序列中有一个JmjC结构域，与DNA或染色质结合，可能介导Mina53对染色质重塑的调节作用，从而影响着基因的表达模式。研究表明Mina53的过度表达与多种肿瘤患者的预后呈负相关性，且在以结肠癌为代表的肿瘤组织中Mina53的过度表达更多地出现于疾病的早期阶段〔5〕。王珂等〔1〕研究表明Mina53可能参与了胃癌的发生和发展，有望作为胃癌预后判断的标记物。而Survivin为凋亡抑制蛋白家族(IAP)中的一个新成员，结构独特。它只含有一个杆状病毒IAP重复序列(BIR)结构，羟基末端缺乏锌指结构，代以交织螺旋结构(Coiled-Coil)，编码分子量约16.5 kD的胞质蛋白，mRNA编码区包含426个碱基的开放阅读框。Survivin能抑制FAS、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、某些化疗药物、白细胞介素(IL)-3、肿瘤坏死因子(TNF)-α、X-射线诱导的凋亡，选择性表达于胃癌、结直肠癌、非小细胞肺癌、膀胱癌、皮肤癌等常见恶性肿瘤，而在癌旁正常组织和成人分化组织并不表达，推测恶性肿瘤细胞Survivin的重新表达可能与获得的某种异常抗凋亡能力有关〔6〕。研究表明检测组织中Surivin的表达情况可以协助临床早期诊断胃癌和判定胃癌患者的预后〔2，7〕；胡华等〔4〕通过对胃癌患者血清中Survivin抗体的检测得出血清中Survivin抗体水平有助于胃癌病情及预后的判断。

本研究结果表明核抗原Mina53和凋亡抑制因子Survivin可能为介导胃癌发生和进展相关信号通路中的重要角色，其表达水平同胃癌的临床分期明显正相关，临床上对其核酸或蛋白水平的检测可能使得胃癌的早期诊断、靶向治疗或预后判断更加方便。本实验结果有待后续大样本量和蛋白水平、细胞水平、组织水平等多水平的多中心随机对照实验的进一步证实。后续研究可探索胃癌患者和健康志愿者体液标本中Mina53和Survivin的表达情况及其与胃癌临床分期和预后之间的关系，以期能够进一步易化检验流程、提高胃癌早期诊断率，从而更早进行干预，提高胃癌患者的生活质量，延长胃癌患者的生存时间。

1 王 珂，刑 敬，彭延申.胃癌组织Mina53的表达及其临床病理意义〔J〕.胃肠病学，2010；15(2)：76-80.

2 苗兰英，刘满华，李 舒.胃癌组织中Survivin和DcR3基因的表达及临床意义〔J〕.中国老年学杂志，2013；33(17)：4126-8.

3 黄国福，冷晓玲，陆 红.结肠癌组织中Survivin、Caspase-3、Ki-67表达水平〔J〕.中国老年学杂志，2012；32(18)：4083.

4 胡 华，金建军.胃癌患者血清Survivin抗体和胃泌素水平变化及意义〔J〕.山东医药，2013；53(8)：45-6.

5 Tsuneoka M，Fujita H，Arima N，etal.Mina53 as a potential prognosticfactor for esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Clin Cancer Res，2004；10(21)：7347-56.

6 Tamm I，Wang Y，Sausville E，etal.IAP-family protein Survivin inhibits caspase activity and apoptosis induced by Fas(CD95)，Bax，caspases and anticancer drugs〔J〕.Cancer Res，1998；58(23)：5315.

7 王 彬，谭逸然.Surivin表达在胃癌诊断中的作用研究〔J〕.陕西医学杂志，2013；42(12)：1579-80.

〔2016-02-10修回〕

(编辑 苑云杰/曹梦园)

阮 佼(1980-)，男，主治医师，主要从事重症医学研究。

R604

A

1005-9202(2017)13-3179-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.13.024