和解安神汤对肝郁脾虚证候失眠大鼠模型的影响

2017-07-18成光宇丁云录赵德喜李晓兵李驰坤陈声武张永和

中国老年学杂志 2017年13期

关键词：匀浆下丘脑安神

成光宇丁云录赵德喜李晓兵李驰坤陈声武张永和

(长春中医药大学附属医院，吉林长春 130103)

和解安神汤对肝郁脾虚证候失眠大鼠模型的影响

成光宇丁云录赵德喜李晓兵李驰坤陈声武张永和

(长春中医药大学附属医院，吉林长春 130103)

目的探讨和解安神汤对复合因素所致肝郁脾虚症候失眠大鼠行为学、血液流变学和脑内神经递质含量的影响。方法采用慢性夹尾刺激和腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)复合因子造模法建立失眠症符合中医肝郁脾虚证候的大鼠模型，用和解安神汤进行干预，对各组大鼠进行宏观体征观察、行为学评价、血液流变学分析以及下丘脑组织匀浆中5羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)和去甲肾上腺素(NE)检测，明确和解安神汤对其动物模型的药效学作用，进一步探讨和解安神汤改善肝郁脾虚型失眠症的机制。结果在给予和解安神汤药物治疗后，显著改善睡眠剥夺大鼠的精神状态，改善失眠大鼠异常行为，可以明显降低肝郁脾虚症候失眠大鼠下丘脑中NE、DA含量、提高5-HT含量(P<0.01或P<0.05)。结论和解安神汤对治疗失眠有一定疗效，且呈一定量效关系，其改善动物睡眠、治疗失眠的作用机制可能与影响脑内单胺类神经递质含量有关。

和解安神汤；失眠；肝郁脾虚

和解安神汤是赵德喜教授拟定的处方。本文通过采用慢性夹尾刺激和腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)复合因子造模法建立符合中医肝郁脾虚证候的失眠大鼠模型，用和解安神汤进行干预，明确和解安神汤对该动物模型的药效学作用，进一步探讨和解安神汤改善肝郁脾虚型失眠症的机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料清洁级雄性Wistar大白鼠，体重180～220 g。购于长春市亿斯实验动物技术有限责任公司，动物合格证号：SCXK-(吉)2011-0004。药品试剂：和解安神汤，由长春中医药大学实验研究中心制备。地西泮，规格：2.5 mg/片，批号：1412018，天津力生制药股份有限公司产品。PCPA，规格：25 g/瓶，批号：65628MJ，五羟色胺(5-HT)试剂盒，规格：96T/盒，批号：20150501A；多巴胺(DA)试剂盒，规格：96T/盒，批号：20150601A；去甲肾上腺素(NE)试剂盒，规格：96T/盒，批号：20150401A，均购自美国RD公司。仪器 Morris水迷宫视频跟踪分析系统，成都泰盟科技有限公司产品。BIO680酶标仪，Japan BIO RAD公司产品。LBY-N6B型全自动自清洗旋转式血黏度仪，北京普利生公司产品。FSH-2可调高速匀浆器，江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司产品。BiofugeStratos台式高速冷冻离心机，德国贺利氏公司产品。

1.2 方法

1.2.1 分组复制模型〔1～3〕动物购入后，适应饲养7 d，随机分为正常组、模型组、地西泮(0.9 mg/kg)组、和解安神汤高、中、低(1.8 g生药/kg、0.9 g生药/kg和0.45 g生药/kg)剂量组，每组10只。建立失眠模型，采用大鼠慢性夹尾刺激和PCPA腹腔注射复合因素造模法，器械刺激，分别用止血钳轻夹大鼠尾部，致使大鼠激惹相互打斗，45 min/d，打斗以不破皮流血为宜，持续20 d，于造模第16天起，对模型组及各给药组的大鼠予PCPA，PCPA 按300 mg/kg溶于弱碱性生理盐水中，配置成混悬液，以10 ml/kg腹腔注射，连续2 d，大鼠昼夜活动不停，睡眠减少直至消失，进食及饮水增多，表示造模成功。

1.2.2 实验给药和解安神汤高、中、低剂量组大鼠于夹尾刺激第7天起，给予和解安神汤混悬液灌胃，1次/d，连续14 d。每周称量体重1次。

1.2.3 指标检测 (1)状态观察：每周观察大鼠实验前后皮毛、睡眠、体重、饮食、排泄情况及精神状态。实验结束前，将大鼠置于饲养盒中，适应3 min后，记录大鼠的自发活动，记录2 min内的自由活动时间(走动时间)及前肢离地举立次数。(2)行为学评价：Morris水迷宫试验，实验水深30 cm，水温(25±1)℃，将大鼠面向池壁逐一放入水池中，放入位置为第二象限标记处，仪器录像系统自动记录大鼠逃避潜伏期(从鼠入水到四肢爬上平台所需的时间)。如大鼠在3 min内未找到池中平台，实验人将其引导至平台。造模第16天开始，1次/d，连续训练5 d。第6天撤除平台正式测试，以大鼠第1次穿台所用时间和3 min内穿越原来平台位置次数作为评价大鼠学习成绩的指标。(3)血液流变学分析：造模第21天，大鼠进行全部行为学测试后，禁食12 h，10%水合氯醛腹腔麻醉后，腹主动脉取血，抗凝，部分离心，测定全血、血浆黏度。(4)下丘脑中DA、NE和5-HT含量的测定：取血后，在低温下快速取出全脑，分离下丘脑，冰浴下匀浆器破碎制成10%匀浆，3 000 r/min离心10 min，取上清液，采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定大鼠下丘脑中DA、NE和5-HT的含量。

1.3 统计学方法应用SPSS19.0软件进行t检验。

2 结果

2.1 一般行为正常组大鼠在全部实验过程中，皮毛光滑润泽，精神活泼，稳定，活动如常。模型组大鼠在给予PCPA后，大鼠昼夜节律消失，白天夜晚活动不停，睡眠减少，出现反应性降低，精神疲惫，萎靡，警觉力下降等现象。在给予和解安神汤药物干预后，3个剂量组一般行为状态均好于模型组。

2.2 和解安神汤对大鼠自主活动的影响和解安神汤高、中、低剂量组在2 min内走动时间明显低于模型组(P<0.01或P<0.05)；和解安神汤高、中剂量组在2 min内前肢举立次数明显低于模型组(P<0.01和P<0.05)。见表1。

2.3 各组穿台时间及次数比较正常组、和解安神汤高、中剂

量组第1次穿台时间与模型组比较显著缩短(P<0.01,P<0.05)；穿台次数显著增加(P<0.01)。见表2。

2.4 血液流变学分析和解安神汤对失眠大鼠血液流变学指标无明显影响。见表3。

表1 和解安神汤对失眠大鼠自主活动的影响±s，n=10)

与模型组比较：1)P<0.05；2)P<0.01，下表同

表2 各组大鼠第1次穿台时间及穿台次数的比较±s，n=10)

表3 和解安神对失眠大鼠血液流变学的影响±s,n=10)

2.5 各组下丘脑5-HT、NE、DA含量比较模型组下丘脑组织匀浆中5-HT含量显著低于正常组(P<0.01)，表明模型复制成功。和解安神汤高、中、低剂量组均可显著提高5-HT含量(P<0.01或P<0.05)；模型组NE含量显著高于正常组(P<0.01)，和解安神汤高、中剂量组均可显著降低NE含量(P<0.01，P<0.05)；模型组DA含量显著高于正常组(P<0.01)，和解安神汤高、中、低剂量组均可显著降低DA含量(P<0.01，P<0.05)。见表4。

表4 各组下丘脑组织匀浆中5-HT、NE及DA含量比较

3 讨论

失眠症又称不眠证，属于中医学不寐的范畴，现在诊断学定义为患者对睡眠时间和(或)质量不满足并影响白天社会功能的一种主观体验〔4〕。行为反应是机体的重要功能表现之一，对行为学评估是神经疾病的重要指标。在本实验中，给予和解安神汤药物治疗后，可以明显改善失眠模型大鼠的自主活动异常状况。建立大鼠失眠动物模型可致大鼠学习记忆障碍〔5〕，通过Morris水迷宫法，针对大鼠学习记忆行为进行检测。在给予和解安神汤药物干预后，可以明显改善失眠模型大鼠的空间学习记忆能力。丘脑是参与睡眠-觉醒节律调节的重要结构之一〔6〕。药物干预治疗可通过降低NE抑制其维持觉醒的作用，减少了对5-HT的抑制，从而使睡眠增加和改善，DA神经元胞体主要集中于中脑，起着维持觉醒和行为兴奋的作用〔7〕。本研究结果提示和解安神汤可以通过降低大鼠下丘脑匀浆中NE、DA含量、升高下丘脑匀浆中5-HT含量，从而改善大鼠睡眠。

《景岳全书·郁证》曰：实邪在肝，多见气满腹胀，所当平也。从而形成肝郁脾虚之虚实夹杂证，气血亏虚，脑失所养致失眠〔8〕。和解安神汤就是对失眠症病机进行深入研究所取得的成果，该汤以汤剂形式应用多年，用于肝郁脾虚之不寐，能够更全面地改善睡眠情况。本实验的失眠大鼠模型能体现肝郁脾虚症候，和解安神汤治疗失眠有一定疗效，且呈一定量效关系，其改善动物睡眠，治疗失眠的作用机制可能与影响脑内单胺类神经递质含量有关。

1 朱洁，申国明，汪远金，等.肝郁证失眠大鼠模型的建立与评价〔J〕.中医杂志，2011;52(8)：689-92.

2 肖成荣，马增春，李海静，等.PCPA失眠大鼠模型的制作及其机制〔J〕.毒理学杂志,2007;21(4)：326-7.

3 胡金凤，王朝辉，齐燕英，等.“针刺五脏俞穴调五脏神”针法对失眠大鼠脑内细胞因子调节作用及其机制的研究〔J〕.吉林中医药，2008;28(9)：688-9.

4 失眠定义、诊断及药物治持共识专家组.失眠定义、诊断及药物治疗专家共识(草案)〔J〕.中华神经科杂志，2006;39(2)：141.

5 范新六.基于突触可塑性的加味四逆散对睡眠剥夺大鼠学习记忆障碍的调控机制研究〔D〕.北京：北京中医药大学，2011.

6 张业，赵欣纪，杨新年.眠安汤对失眠大鼠行为学及下丘脑单胺类神经递质的影响〔J〕.现代中医药，2015;35(5)：169-71.

7 靳照宇，库宝善，姚海燕，等.5-HT1A和5-HT2受体功能与觉醒、睡眠成份关系的研究〔J〕.中国药理学通报，2000;16(2)：208-11.

8 蔡昕宏.针药结合治疗肝郁脾虚型失眠的临床研究〔D〕.广州：广州中医药大学，2013.

〔2017-02-19修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)

吉林省中医药科技重点实验室项目(No.2014-ZDR)

赵德喜(1967-)，男，博士生导师，主任医师，主要从事中医脑病的临床治疗研究。