CDH17和LRP1B基因多态性与一氧化碳中毒后迟发性脑病的相关性

于建华 王运良 潘晓琳

解放军第一四八中心医院 1)检验科 2)神经内科 3)介入科，山东 淄博 255300

CDH17和LRP1B基因多态性与一氧化碳中毒后迟发性脑病的相关性

于建华1)王运良2)潘晓琳3)△

解放军第一四八中心医院 1)检验科 2)神经内科 3)介入科，山东 淄博 255300

目的 探讨CDH17(Cadherin-17，钙粘蛋白17)和LRP1B(低密度脂蛋白受体相关蛋白1B，low-density lipoprotein receptor-related protein 1B)基因多态性与一氧化碳(CO)中毒后迟发性脑病(delayed encephalopathy，DEACMP)的相关性。方法 选取2008-06—2016-06收入我院神经内科的CO中毒患者，分为DEACMP组和急性一氧化碳中毒(acute carbon monoxide poisoning，ACMP)组，分别检测2组CDH17基因位点(rs2513796)、LRP1B基因位点(rs1541976，rs10183908)SNP分型。结果 2组LRP1B基因位点(rs1541976)分布及等位基因频率比较有显著性差异(P<0.05)。2组女性间位点基因型分布及等位基因频率比较无明显差异(P>0.05)，而男性患者间位点基因型分布及等位基因频率比较差异有统计学意义(P<0.05)。DEACMP组男、女患者间基因型分布比较有显著性差异(P<0.05)，而等位基因频率比较无明显差异(P>0.05)。ACMP组男、女患者间基因型分布及等位基因频率比较无明显差异(P>0.05)。2组男或女之间LRP1B基因位点(rs10183908)的基因型分布及等位基因频率均比较无明显差异(P>0.05)。2组间CDH17基因位点(rs2513796)的基因型分布及等位基因频率比较无明显差异(P>0.05)。结论 LRP1B基因位点(rs1541976)的基因多态性与DEACMP具有相关性，其中男性ACMP患者发生DEACMP的危险性增加，A/C基因型增加患病风险，C等位基因型男性ACMP患者易发生DEACMP。LRP1B基因位点(rs10183908)基因多态性与DEACMP无相关性。LRP1B基因多态性可能在DEACMP发病中具有性别发病的遗传易感性。

钙粘蛋白17；低密度脂蛋白受体相关蛋白1B；基因多态性；一氧化碳中毒；迟发型脑病

一氧化碳(CO)进入血液时，与血液中血红蛋白结合生成碳氧血红蛋白，导致组织缺氧[1]。急性CO中毒(acute carbon monoxide poisoning，ACMP)是我国农村地区急性中毒死亡事件最常见的原因[2]。急性CO中毒患者经抢救症状恢复，而后经过数天或数周表现正常或接近正常的“假愈期”后再次出现以急性痴呆为主的一组神经精神症状，称为急性CO中毒后迟发性脑病(delayed encephalopathy after acute carbon monoxide poisoning，DEACMP)[3]。目前对DEACMP的发病机制尚未完全明确，有学者认为其与个体遗传易感性差异有关[4-6]。近年来研究发现，钙粘蛋白17(Cadherin-17，CDHl7)在胃癌、结肠癌等多种上皮来源肿瘤组织中表达异常[7]。研究[8]报道，低密度脂蛋白受体相关蛋白参与神经细胞修复过程中的信号传导、免疫调节、氧化应激等作用。本文对CDH17基因位点(rs2513796)、LRP1B基因位点(rs1541976，rs10183908)多态性与DEACMP的相关性进行研究，旨在探讨CO中毒后DEACMP的遗传易感性。

1 资料与方法

1．1 一般资料 选取2008-06—2016-06收入我院神经内科的CO中毒患者，其中DEACMP组313例，分别检测rs1541976、rs10183908和rs2513796基因位点。检测rs1541976位点者男188例，女125例，年龄41～87(57.85±2.63)岁。检测rs10183908位点者男186例，女127例，年龄40～88(56.92±2.68)岁。268例检测rs2513796基因位点，其中男169例，女117例，年龄40～89(56.57±2.75)岁。DEACMP组患者均有昏迷病史，昏迷持续时间4～72(18.54±11.68)h。间歇期(急性CO中毒清醒后到出现迟发性脑病症状之间的时间间隔) 10～60(22.53±15.49) d。ACMP组316例，其中检测rs1541976基因位点，男189例，女127例，年龄40～89(58.13±2.75)岁。311例检测 rs10183908基因位点，男187例，女124例，年龄40～89(57.69±2.70)岁。283例检测rs2513796位点，男168例，女115例，年龄40～90(57.78±2.73)岁。 ACMP时患者昏迷持续时间1～50(11.67±7.56)h，随访期间均未出现DEACMP。DEACMP组患者符合DEACMP诊断标准[9]。ACMP组患者符合《职业性急性一氧化碳中毒诊断标准》(GBZ23-2002)。排除标准：(1)严重心肝肾等功能障碍、脑血管疾病、恶性肿瘤、免疫系统疾病、内分泌系统疾病；(2)接受免疫抑制剂或激素治疗；(3)有过敏史、感染史。本研究获得医院伦理委员会批准，所有患者自愿签署知情同意书。

1．2 方法 DEACMP患者均于入院第2天清晨空腹采集肘静脉3 mL EDTA抗凝血，ACMP患者于抢救成功清醒后1 d内进行采血。提取患者血液样本基因组DNA，进行目的基因PCR-RFLP扩增及测序。见表1。

表1 LRP1B、LRP1B、CDH17基因引物序列

2 结果

2．1 rs1541976基因型分布及等位基因频率比较 DEACM组和ACMP患者rs1541976基因型分布及等位基因频率比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。2组按照性别进行分层分析后，发现女性DEACMP组患者基因型分布A/C低于ACMP组，C/C明显高于ACMP组；等位基因A低于ACMP组，而C高于ACMP组，但未发现明显差异(P>0.05)。见表3。2组男性患者rs1541976基因型分布及等位基因频率检测显示，DEACMP组与ACMP组在基因型分布和等位基因频率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。见表4。同组间比较发现，DEACMP组间男、女患者rs1541976基因型分布比较差异有统计学意义(P<0.05)；而等位基因频率比较则差异无统计学意义(P>0.05)。见表5。ACMP组间男、女患者rs1541976基因型分布及等位基因频率比较均无明显差异(P>0.05)。见表6。

2．2 rs10183908基因型分布及等位基因频率比较 DEACMP组患者rs10183908基因型分布及等位基因频率与ACMP组比较无显著差异(P>0.05)。见表7。根据性别分层后分析发现，男性患者rs10183908基因型分布及等位基因频率2组间无明显差异(P>0.05)。见表8。而女性患者的基因型分布及等位基因频率分布有显著差异(P>0.05)。见表9。同组间基因型分布及等位基因频率比较显示，DEACMP组间男、女患者rs10183908基因型分布无显著差异(P>0.05)，而等位基因频率比较则差异显著(P<0.05)。见表10。ACMP组间男、女患者rs10183908基因型分布及等位基因频率比较均无明显差异(P>0.05)。见表11。

表2 2组rs1541976基因型分布及等位基因频率比较 [n(%)]

表3 2组女性患者rs1541976基因型分布及等位基因频率比较 [n(%)]

表4 2组男性患者rs1541976基因型分布及等位基因频率比较 [n(%)]

表5 DEACMP组男、女rs1541976基因型分布及等位基因频率的比较 [n(%)]

表6 ACMP组间男、女患者rs1541976基因型分布及等位基因频率比较 [n(%)]

表7 2组rs10183908基因型分布及等位基因频率比较 [n(%)]

表8 2组男性患者rs10183908基因型分布及等位基因频率比较 [n(%)]

表9 2组女性患者rs10183908基因型分布及等位基因频率比较 [n(%)]

表10 DEACMP组男、女rs10183908基因型分布及等位基因频率比较 [n(%)]

表11 ACMP组间男、女rs10183908基因型分布及等位基因频率比较 [n(%)]

表12 2组rs2513796基因型分布及等位基因频率比较 [n(%)]

表13 2组女性患者rs2513796基因型分布及等位基因频率比较 [n(%)]

表14 2组男性患者rs2513796基因型分布及等位基因频率比较 [n(%)]

2．3 rs2513796基因型分布及等位基因频率比较 DEACMP和ACMP患者rs2513796基因型分布及等位基因频率相比无明显差异(P>0.05)。见表12。按照性别分层后分析发现，2组女性和男性患者rs2513796基因型分布及等位基因频率比较无统计学差异(P>0.05)。见表13、14。同组间rs2513796基因型分布及等位基因频率比较，DEACMP和ACMP患者男、女之间基因型分布及等位基因频率分布无明显差异(P>0.05)。见表15、16。

表15 DEACMP组男、女rs2513796基因型分布及等位基因频率比较 [n(%)]

表16 ACMP组间男、女rs2513796基因型分布及等位基因频率比较 [n(%)]

3 讨论

ACMP及DEACMP造成患者的生活自理能力及工作能力丧失，严重影响患者的生活质量。目前研究发现DEACMP的主要病理变化为大脑白质广泛的髓鞘脱失[10]。而髓鞘是包裹在神经细胞轴突外面的一层膜，具有保护神经元及神经电冲动，髓鞘脱失将影响神经冲动的传递。

LRP1B在中枢神经系统中表达较高，其参与神经细胞修复过程中的信号传导、免疫调节、氧化应激等作用[11-13]。因此，推测LRP1B基因可能与DEACMP的发病有关。本研究结果显示，LRP1B基因位点(rs1541976)的基因多态性与DEACMP具有相关性，其中男性ACMP患者发生DEACMP的危险性增加，A/C基因型增加患病风险，C等位基因型男性ACMP患者易发生DEACMP。而LRP1B基因位点(rs10183908)的基因多态性与DEACMP发生无明显关系。该研究结果也可能与研究的样本数较少，使LRP1B基因位点(rs10183908)出现阴性有关。推测LRP1B基因可能是一种易感基因，LRP1B作为低密度脂蛋白受体家族的一员，与LRP1在蛋白结构方面具有较高同源性。因此，LRP1B可能是APP等配体的受体，存在于神经元和神经胶质细胞中，影响血脑屏障通透性和脑微血管结构等，进而造成患者的认知功能障碍。

钙粘蛋白又称细胞粘连媒介，是一种依赖于钙离子与细胞外蛋白成分的相互作用，发挥亲同种抗原细胞黏附活性的跨膜糖蛋白[14]。中枢神经系统的正常运行需要细胞间的各种相互作用来维持，而钙粘蛋白都具有细胞黏附、细胞识别等生物学功能[15]。CDHl7作为钙粘蛋白超家族的一员，其与经典钙粘蛋白相似性较高。本研究结果显示，CDH17基因位点(rs2513796)基因多态性与DEACMP无相关性。由于目前对CDHl7与神经系统相关性的研究报道较少，但随着研究的深入，以及患病易感基因筛选技术的提高，对CDHl7在神经系统中的作用将会进一步阐明。

综上所述，LRP1B基因位点(rs1541976)的基因多态性与DEACMP具有相关性，而LRP1B基因位点(rs10183908)的基因多态性与DEACMP无明显相关性。LRP1B基因多态性可能在DEACMP发病中具有性别发病的遗传易感性。CDH17基因位点(rs2513796)的基因多态性与DEACMP无相关性，不能作为DEACMP的遗传易感基因。

[1] 马娜．急性一氧化碳中毒后迟发性脑病临床分析[J]．医药前沿，2015，5(27)：53-54．

[2] 许淑娥．一氧化碳中毒并发迟发型脑病临床分析[J]．世界最新医学信息文摘，2014，14(28)：147-147．

[3] Johnson MP，Brennecke SP，Etal CE，et al．Genetic dissection of the pre-eclampsia susceptibility locus on chromosome 2q22 reveals shared novel risk factors for cardiovascular disease[J]．Mol Hum Reprod，2013，19(7)：423-437．

[4] 郑瑞娟．急性一氧化碳后迟发型脑病危险因素及基因多态性分析[J]．中西医结合心脑血管病杂志，2016，14(10)：1 183-1 184．

[5] 林泽辉，李彦军，杜永明，等．急性一氧化碳中毒迟发型脑病IL-10、MDA及IFNγ水平变化的意义[J]．中西医结合心脑血管病杂志，2016，14(17)：2 063-2 065．

[6] Pang L，Wang HL，Wang ZH，et al．Plasma copeptin as a predictor of intoxication severity and delayed neurologi-cal sequelae in acute carbon monoxide poisoning[J]．Peptides，2014，59：89-93．

[7] 康锶鹏，余英豪．钙黏蛋白17是后肾腺瘤的敏感和特异标志物[J]．临床与实验病理学杂志，2015，31(8)：931-931．

[8] 杨卉．低密度脂蛋白受体相关蛋白1在阿尔茨海默病中的研究进展[J]．国际神经病学神经外科学杂志，2014，41(6)：533-536．

[9] 叶任高．内科学[M]．5版．北京：人民卫生出版社，2001：964．

[10] Nikitina IG，Sabirova EY，Solopova ON，et al．A New Immuno-PCR Format for Serological Diagnosis of Colon Cancer[J]．Mol Biol(Mosk)，2014，48(1)：99-104．

[11] Pang L，Wu Y．，Dong N，et al．Elevated serum ubiqui-tin C-terminal hydrolase-L1 levels in patients with carbon monoxide poisoning[J]．Clin Biochem，2014，47(1/2)：72-76．

[12] 王韶屏，廖玮，王健，等．冠心病患者可溶性低密度脂蛋白受体相关蛋白1的表达变化及临床意义[J]．实用医院临床杂志，2015，12(4)：30-32．

[13] Houde AA，Ruchat SM，Allard C，et al．LRP1B and BRD2：new candidate genes in fetal metabolic programming of the newborn exposed to maternal hyperglyce-mia[J]．Epigenomics，2015，7(7)：1 111-1 122．

[14] 潘地铃，张声，王行富，等．CDH17表达及其SNPs在胃癌发生发展中的意义[J]．中国肿瘤临床，2015，42(19)：957-962．

[15] Bartolomé RA，Barderas R，Torres S，et al．Cadherin-17 interacts with α2β1 integrin to regulate cell proliferation and adhesion in colorectal cancer cells causing liver metastasis[J]．Oncogene，2014，33(13)：1 658-1 669．

(收稿2016-12-08)

Association of CDH17 and LRP1B gene polymorphisms with delayed encephalopathy after carbon monoxide poisoning

YuJianhua﹡，WangYunliang，PanXiaolin

﹡DepartmentofClinicalLaboratory，the148thCentralHospitalofPLA，Zibo255300，China

Objective To investigate the association of CDH17 (cadherin-17) and LRP1B (low density lipoprotein receptor-related protein 1B) gene polymorphism with delayed encephalopathy after carbon monoxide poisoning．Methods The DEACMP patients were collected from June 2014 to June 2016．The patients were divided into DEACMP group and ACMP group．The CDH17 gene locus (rs2513796) and LRP1B locus (rs1541976，rs10183908) SNP typing were detected in two groups．Results LRP1B gene locus (rs1541976)：the genotype distribution and allele frequency of the two groups were statistically significant (P<0.05)．There was no significant difference in genotype distribution and allele frequency between the two groups (P>0.05)．The genotype distribution and allele frequency of the two groups were statistically significant (P<0.05)．The genotype distribution of male and female patients in DEACMP group was statistically significant (P<0.05)，but there was no significant difference in allele frequency between the two groups (P>0.05)．There was no significant difference in genotype distribution and allele frequency between male and female patients in ACMP group (P>0.05)．LRP1B gene locus (rs10183908)：there was no significant difference in genotype distribution and allele frequency between the two groups (P>0.05)．There was no significant difference in genotype distribution and allele frequency between the two groups (P>0.05)．There was no significant difference in genotype distribution and allele frequency between the two groups (P>0.05)．There was no significant difference in the genotype distribution between male and female patients in DEACMP group (P>0.05)．The difference was statistically significant (P<0.05)．There was no significant difference in the genotype distribution and gene frequency between male and female patients in ACMP group (P>0.05)．CDH17 gene locus (rs2513796)：there was no significant difference in genotype distribution and allele frequency between the two groups (P>0.05)．There was no significant difference in genotype distribution and allele frequency between the two groups (P>0.05)．There was no significant difference in genotype distribution and allele frequency between the two groups (P>0.05)．There was no significant difference in genotype distribution and allele frequency between male and female patients in DEACMP group (P>0.05)．There was no significant difference in genotype distribution and allele frequency between male and female patients (P>0.05)．Conclusion LRP1B gene locus (rs1541976) gene polymorphism is associated with DEACMP．The risk of DEACMP in male ACMP patients is increased，and the risk of A/C genotype is increased，and CAC genotype is prone to DEACMP．LRP1B gene locus (rs10183908) gene polymorphism was not associated with DEACMP．LRP1B gene polymorphism may have genetic susceptibility to sex in the pathogenesis of DEACMP．

CDH17；LRP1B；Gene polymorphism；Carbon monoxide poisoning；Delayed encephalopathy

R749.6+3

A

1673-5110(2017)12-0018-05

△通讯作者：潘晓琳，女，硕士学士，副主任护师，研究方向：介入护理。

E-mail：panxiaolin148@163.com