凡纳滨对虾白便综合征的组织病理学观察

戚瑞荣，崔龙波，唐绍林，高珺珊，马家好

（1.广州利洋水产科技股份有限公司，广东 广州 510515；2.广州金水动物保健品有限公司，广东 广州 510515；3.烟台大学生命科学学院，山东 烟台 264005）

凡纳滨对虾白便综合征的组织病理学观察

戚瑞荣1,2，崔龙波3，唐绍林1,2，高珺珊1,2，马家好1,2

（1.广州利洋水产科技股份有限公司，广东 广州 510515；2.广州金水动物保健品有限公司，广东 广州 510515；3.烟台大学生命科学学院，山东 烟台 264005）

本文比较观察了不同规格的健康和患白便综合征凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei肝胰腺、中肠、后肠、后盲囊等的组织结构。组织病理显示：白便综合征凡纳滨对虾肠道严重病变，肠腔空，环肌两侧增生大量成纤维细胞，这些增生细胞取代了肠上皮，而不见正常柱状上皮细胞；肝胰腺有不同程度和性质的病变，如腺管萎缩、崩解、坏死等。凡纳滨对虾患白便综合征的组织病变演变过程为：最初肠上皮基膜下出现一圈增生细胞，肠上皮柱状细胞脱离基膜；增生细胞持续增生增多，肠上皮崩解脱落至肠腔，增生细胞完全取代肠上皮；增生细胞不断增生，增生细胞层逐渐变厚，随着时间的推移，增生细胞层近腔端的一圈增生细胞坏死，出现一圈棕黄色物质，最终坏死细胞连同棕黄色物质脱落至肠腔。脱落至肠腔的腺管细胞、上皮细胞、增生细胞排出体外即为肉眼可见的白便。

白便综合征；凡纳滨对虾；组织病理

凡纳滨对虾Litopenaeusvannamei（南美白对虾）生长速度快、养殖周期短、产量和经济收益高，是世界对虾养殖的主要经济品种，目前已在我国广东、福建、海南、广西、山东、京津唐等地区大规模养殖，并取得了显著的经济效益[1,2]。但是，2010年广东、广西养殖的凡纳滨对虾频发白便综合征，之后逐年加强。发病初期病虾症状不明显，随着病情发展，池塘下风口水面可见漂浮的白色线状黏性粪便，病虾肠道“断肠”、空肠，严重时整个肠道变成乳白色，呈“白肠”，肝胰腺萎缩、模糊。白便综合征发病率高、传染性强，严重困扰凡纳滨对虾养殖业。我国对凡纳滨对虾白便综合征的研究较少，仅有防治、流行特点等零星报道[3-10]。目前对白便综合征的病因众说纷纭，如细菌感染、藻毒素、水质恶化、霉菌毒素、滥用药物等[4]。曹海鹏等[1]研究确定霍乱弧菌Vibriocholerae是其病原菌。唐绍林等[3]、彭小云[6]、张水波[7,8]认为白便综合征是一种细菌病。Ha NTH等[11]认为越南的白便综合征是由虾肝肠胞虫Enterocytozoonhepatopenaei引起，但Tangprasittipap A等[12]推翻了这一观点。国内对患白便综合征凡纳滨对虾的组织病理未见有报道。Sriurairatana S等[13]通过电镜观察认为，白便综合征是腺管上皮微绒毛脱落后在管腔中形成的聚集体，其数量多、严重时就使对虾形成白色粪便，但是微绒毛聚集体的成因不明。

本研究利用组织病理切片直观地展示了患白便综合征凡纳滨对虾的组织病变情况，特别是肠组织病变的演变，以期为疾病的准确诊断提供理论参考，为病原的致病机理分析提供直观的依据。

1 材料与方法

1.1 对虾样品采集

患白便综合征对虾用旋网采自广东省凡纳滨对虾养殖池塘，对不同规格（400～500尾/500g～40尾/500g）、不同程度患白便综合征的凡纳滨对虾分别取样，用波恩氏液固定病虾肝胰腺、中肠、后肠、后盲囊等，将中肠切成前、中、后三段进行固定，同时采集、固定健康凡纳滨对虾组织，以作对照。

1.2 方法

将波恩氏液固定的凡纳滨对虾组织于24h内用70%酒精换液，之后每隔4h换液一次，直至溶液无黄色。石蜡包埋时，用70%、80%、90%、95%、100%梯度酒精脱水，再用二甲苯透明，石蜡浸蜡、包埋成块、切片，切片厚度为5μm；H·E染色后，中性树胶封片，于MOTIC光学显微镜下观察、拍照。

2 结果与分析

比较观察发现，患白便综合征凡纳滨对虾中肠、肝胰腺组织有明显的病变，中肠前、中、后段病变差异不明显，不同程度白便综合征的凡纳滨对虾组织病变不同。

2.1 中肠

健康凡纳滨对虾中肠上皮细胞呈柱状，排列紧密，细胞间隙清楚，游离端满布微绒毛，组织结构由内向外依次为：肠上皮、基膜、结缔组织、肌层、外膜（图1）。

图1 健康凡纳滨对虾肠的组织结构Fig.1 Histological sections of intestine of healthy Pacific white leg shrimp Litopenaeus vannamei

患白便综合征凡纳滨对虾中肠组织最明显的病变是：环肌两侧增生大量的成纤维细胞，取代了肠上皮，肠上皮崩解脱落至肠腔。白便综合征程度较轻的凡纳滨对虾肠组织基膜下可见一圈增生细胞，肠上皮完整或局部脱落（图2）。病变较重的白便综合征凡纳滨对虾肠上皮整个脱落，肠腔内可见脱落的肠上皮。肠上皮被大量增生细胞取代，增生细胞层有一定的厚度（图3-A、B、C）。再严重些的白便综合征凡纳滨对虾无肠上皮，被大量增生细胞取代，增生细胞层近腔端一圈增生细胞坏死并有色素沉积，肠腔内可见坏死脱落的增生细胞（图3-D、E、F、H）。增生的细胞一圈圈地脱落坏死，直至呈空肠腔（图3-G）。

图2 患白便综合征凡纳滨对虾肠初期病变的组织结构Fig.2 Initial pathological changes in intestine of Pacific white leg shrim p Litopenaeus vannamei w ith white feces syndrome

图3 白便综合征凡纳滨对虾肠严重病变Fig.3 Severe pathological changes in intestine of Pacific white leg shrimp Litopenaeus vannamei w ith white feces syndrome

2.2 肝胰腺及其他组织

健康凡纳滨对虾肝胰腺组织由多个腺管组成，腺管紧密邻接，腺管上皮中可见三种类型的细胞：（1）吸收细胞，细胞胞质内有大量的小泡；（2）分泌细胞，细胞质内仅有一个大泡，细胞核被挤到一侧；（3）纤维细胞，细胞质致密，呈深蓝色，核、核仁明显（图4-a）。还有一种细胞位于组织周围、腺管盲端，可以分化产生其他类型的上皮细胞，称为胚细胞。

患白便综合征凡纳滨对虾肠出现病变，肝胰腺或正常或出现不同程度的病变，如萎缩、水肿、腺管崩解、坏死、增生、肉芽肿等；有些腺管组织中可见大量菌体（图4-b、c）。

患白便综合征凡纳滨对虾后肠、后盲囊与健康凡纳滨对虾比较，未见明显病变。

图4 凡纳滨对虾肝胰腺的组织结构Fig.4 Histological structure of hepatopancreas of Pacific white leg shrimp Litopenaeus vannamei

3 讨论

白便综合征不是单纯的粪便呈白色，而是肝胰腺、肠道病变，是一种慢性病，比较难治疗。肝胰腺腺管崩解、坏死，腺管上皮细胞脱落，肠道细胞增生、上皮脱落，脱落的细胞最终到达肠腔排出体外，形成肉眼可见的白便。

对患白便综合征凡纳滨对虾样品的组织观察发现，有些样品肝胰腺中有大量菌体，而在治疗实践中也发现抗菌药物对白便综合征有较好的治疗效果[9]，所以认为细菌是凡纳滨对虾白便综合征的原因。但是，对白便综合征病原菌的研究较少。唐绍林等[3]、彭小云[6]、张水波[7,8]都认为白便综合征是细菌病，而天气突变、“倒藻”、底质败坏、饵料霉变、蓝藻暴发、消化机能受损等是重要的诱发因素。曹海鹏等[1]的研究表明，霍乱弧菌是白便综合征病原菌，此病与养殖水质和底质恶化、投喂变质饲料或不正常投饲也有较大的关系。

白便综合征已经成为近年来凡纳滨对虾养殖生产中的又一重大疾病。组织切片显示，该病形成的机制可能是：虾体受某种因素的刺激影响，认为可能是细菌的某种毒素刺激，引发凡纳滨对虾上皮细胞的炎症反应。起初腺管上皮、肠上皮开始崩解，在肠上皮基膜下出现增生细胞，此时的肠上皮尚完整或已崩解脱落。随着时间的推移，增生细胞越来越多，增生细胞层越来越厚，肠上皮被逐步取代、完全脱落；肠完全丧失吸收营养物质的功能，增生细胞没有了物质代谢的基础，开始在增生细胞层游离端坏死，之后一圈圈坏死、脱落，最终肠上皮所在部位的结构也不存在。坏死脱落的细胞，无论是上皮细胞还是增生细胞，均落入肠腔，排出体外，即肉眼所见的白便。曹海鹏等[1]认为，发病机理可能是由于霍乱弧菌在凡纳滨对虾肠组织中大量生长增殖、黏附肠黏膜、表面产生毒力因子而引起肠壁、黏膜损伤，进一步通过血淋巴循环至肝胰腺组织并在其中繁殖和产生毒素后导致肝胰腺肿大、糜烂等病变，最终导致肝胰腺和肠功能失常，引发凡纳滨对虾发病、死亡。

［1］ 曹海鹏,温乐夫,周桂娴,等.南美白对虾白便综合征病原霍乱弧菌的分离与药敏试验［J］.动物医学进展,2016（2）: 128-132.

［2］ 马良骁,冯宪斌,韦新兰,等.湖北地区南美白对虾养殖现状分析及展望［J］.渔业致富指南,2014（5）:45-47.

［3］ 唐绍林,雷燕,戚瑞荣.南美白对虾产生白便综合征的原因及防治［J］.科学养鱼,2012（11）:58-58.

［4］ 黄兴宇.关于南美白对虾白便综合征的分析［J］.当代水产,2014（9）:66-67.

［5］ 曹海鹏.南美白对虾白便综合征的诊治实例［J］.水产养殖,2013,34（11）:56-56.

［6］ 彭小云.南美白对虾白便产生原因及防治方法［J］.科学养鱼,2014（7）:92-92.

［7］ 张水波.南美白对虾白便肠炎的防治［J］.海洋与渔业, 2013（3）:52-52.

［8］ 张水波.南美白对虾空肠白便的防治［J］.水产养殖,2013（3）:73-74.

［9］ 唐绍林,章明凤.南美白对虾白便症的流行特点和防治措施［J］.海洋与渔业,2015（8）:66-67.

［10］ 贾宏升.天津地区对虾白便的防治方案分析［J］.当代水产,2015（7）:84-84.

［11］ Ha NTH,Ha DT,Thuy NT,et al.Enterocytozoon hepatopenaei has been detected parasitizing tiger shrimp（Penaeus monodon）cultured in Vietnam and showing white feces syndrome［J］.Agriculture and Rural Development:Science and Technology,2010（12）:45-50.（Google translation from Vietnamese）

［12］ Tangprasittipap A,Srisala J,Chouwdee S,etal.Themicrosporidian Enterocytozoon hepatopenaei is not the cause of white feces syndrome in white leg shrimp Penaeus（Litopenaeus）vannamei［J］.BMCVeterinary Research,2013,9（1）:1-10.

［13］ Sriurairatana S,Boonyawiwat V,Gangnonngiw W,et al. White feces syndrome of shrimp arises from transformation,sloughing and aggregation of hepatopancreatic microvilli into vermiform bodies superficially resembling gregarines［J］.PlosOne,2014,9（6）:99170-99170.

Histopathological Observation of Tissues in Pacific White Leg Shrimp Litopenaeus vannamei with W hite Feces Syndrome

QIRui-rong1,2,CUILong-bo3,TANG Shao-lin1,2,GAO Jun-shan1,2,MA Jia-hao1,2
（1.Guangzhou Liyang Aqua-Technology Co.Ltd,Guangzhou 510515,China; 2.Guangzhou JinshuiAnimalHealth Products Co.Ltd,Guangzhou 510515,China; 3.Collegeof Life Sciences,YantaiUniversity,Yantai264005,China）

Comparative histopathological observation of hepatopancreas,intestine and posterior caecus was conducted between healthy and sick Pacific white leg shrimpLitopenaeusvannameiw ith white feces syndrome and differentsizes.Itwas found thatgreat damagewasobserved in the diseased shrimp including heavy proliferation of fibroblasts in both sidesof circularmuscle,and intestinal epithelia replaced by the fibroblasts,and devoid of intestinal cavity,w ithout columnar epithelial cells in the intestine of Pacific white leg shrimp w ith white feces syndrome.Therewere also differentpathological changes in hepatopancreas,such as atrophy,disintegration and necrosis.Comparative observation at different developmental stages of white feces syndrome revealed that the white feces syndromewas developed as follows:firstproliferative cellsappeared under the basementmembrane of intestinalepithelium separated from the basementmembrane;proliferative cells continued to be increased in quantity,and intestinal epithelium collapsed and completely replaced by the proliferative cells and shed into the intestinal lumen;proliferative cells continued to be increased and then cell layer became thicker,necrosis and brownish yellow substances near the lumen appeared,eventually necrotic cells together w ith the brownish yellow substances shed into the intestinal lumen,until no proliferative cellswere found.The white feces observed by the naked eyeswere shown to be composed of pancreatic epithelial cells,intestinalepithelial cells and proliferative cells,which were discharged into the intestinal lumen.

white fecessyndrome;Litopenaeusvannamei;histopathology

S945.4+9

A

1005-3832（2017）03-0045-05

2016-12-08

戚瑞荣（1986-），女，硕士研究生，从事水产动物疾病研究.E-mail:qrr1177@163.com