结核感染T细胞斑点试验在结核病诊断中的应用效果

瞿炜+赵敏

摘要：目的 探讨结核病诊断中结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）的临床应用价值。方法 选取我中心接诊疑为结核病的84例患者，根据诊断标准将其分为结核组56例，非结核组28例，同时行T-SPOT.TB和结核抗体（TB）检测。结果 结核组T-SPOT.TB阳性率为78.57%，TB阳性率为37.50%（P<0.05）；非结核组T-SPOT.TB阳性率为10.71%，TB阳性率为17.86%（P<0.05）；结核组与非结核组A、B孔斑点计数对比结果均无显著差异（P>0.05）。结论 相较于TB检测，T-SPOT.TB的诊断准确性更高，但建议与TB联合应用，以此实现对诊断准确性的进一步提升。

关键词：结核病；结核感染T细胞斑点试验；结核抗体检测；诊断

中图分类号：R52 文献标识码：A 文章编号：1006-1959（2017）14-0179-0

根据2014年WHO对全球结核病发病情况统计显示[1]，结核病年平均发病率达到了126/10万，且根据发病总数排名情况来看，中国发病数达到了全球第二，仅次于印度。在结核病严峻的发病形势下，加强结核病的早期诊断成为关键。目前，在结核病诊断中，细菌学诊断是最主要的诊断手法，但这种检测方法不仅耗时较长、过程较长，且极易受到各方面因素的干扰，导致检测准确性受到影响。结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）是近几年来发展起来的一种结核病诊断技术，其具有较高特异性和敏感性，受到学界的共同认可。本研究拟对结核病诊断中，T-SPOT.TB的应用效果进行探讨，旨在进一步了解其实用价值。

1 资料与方法

1.1一般资料

本研究病例均来自我中心2015年1月～2016年5月接诊的疑为结核病的患者84例，根据《肺结核诊断和治疗指南》（中华医学会结核病学分会）[2]制定的相关标准对患者进行确诊，其中28例为非结核病组，女16例，男12例，年龄21～71岁，平均年龄（37.81±6.61）岁；另56例为结核病组，女32例，男24例，年龄22～70岁，平均年龄（38.24±5.27）岁。

1.2方法

1.2.1 T-SPOT.TB检测方法 ①样品采集与制备：取两组患者8 ml外周血，在室温条件下将其与BPMI1640不完全培养液进行充分混合，将成功分离之后获得的单个细胞层，放置在洁净的离心管内，并向其中加入0.4%细胞稀释液40 μl与细胞悬液10 μl，取混合液置于计数板内并行活细胞计数。②培养板设置：取抗原A、AIM-V无血清培养液以及抗原B各50 μl加入培养板内，设置50 μl空白对照组，将其放置在37 ℃环境下，以5%二氧化碳对其进行20 h孵育。③斑点计数：在清洁干净的条件下，自培养板内吸取舍弃的孔内液体，并向其中加入新鲜酶标抗体溶液50 μl，静置于2～8 ℃的环境下进行1 h孵育，再向其中加入底物溶液50 μl，室温下持续反应7 min，采用蒸馏水对其进行洗涤，行干燥处理。采用全自动细胞计数分析仪（美国nexcelom）完成斑点计数。④结果判定：阴性对照组斑点数量超过6，抗原A、B斑点数均比阴性对照组斑点数高出2倍即表示为阳性；或者阴性对照组斑点数低于6，抗原A、B斑点数与阴性对照组斑点数之差仍然超过6也表示为阳性。

1.2.2结核抗体检测 ①方法：自上海容创生物技术有限公司购入结核分期杆菌（TB）抗体诊断试剂盒，对患者進行TB抗体检测。操作方法均严格按照试剂盒说明书要求实施。②结果判定：阴性：测定结果未观察到红色斑点；阳性：观察发现存在红色斑点。

1.3统计学方法

研究数据均以统计学软件SPSS20.0进行分析处理，各指标以t值或χ2检验，α=0.05为检验水准。

2 结果

2.1 T-SPOT.TB与TB检测结果对比

56例结核组对象中，44例T-SPOT.TB阳性，阳性率为78.57%（44/56），21例TB阳性，阳性率为37.50%（21/56）；28例非结核组对象中，3例T-SPOT.TB阳性，阳性率为10.71%（3/28），5例TB阳性，阳性率为17.86%（5/28）。各组对比差异均有统计学意义（P<0.05）。

2.2 T-SPOT.TB检测斑点计数比较

T-SPOT.TB检测斑点计数结果显示，结核组与非结核组A、B孔斑点计数对比结果均无显著差异（P>0.05），见表1。

3 讨论

结核病主要是指经由细胞实现传播的一种慢性传染性疾病，多出现在肺部。为提高该病的预后效果，对其进行早期诊断和治疗是非常关键的环节，同时也我国结核病防治工作的要点。结核菌素试验可以说是当前临床中一种应用非常广泛并且非常实用的结合筛查方法，其具有检测速度快，操作方法简单等各项优点，经常被用于经验性抗结核诊断和治疗的判断标准。但因我国人群卡介苗接种率非常高，这使得TST假阳性率也因此偏高，并且非常容易受到机体自身免疫状态的影响，为此，导致其临床应用受到了限制。结核病原学作为结核病诊断的金标准，其诊断价值已经得到了学界的公认，但常规细菌培养所花费的时间往往较长，并且非常容易应细菌数量而导致结果受到影响，从而造成诊断假阴性，痰涂片检出阳性率相对较低。为此，寻找新的，并且准确性快的诊断方法，成为了结核病预防和控制的重要方法。

T-SPOT.TB试验是一种基于ELISA技术发展起来的一种细胞免疫学检测技术，其可实现单细胞水平的检测，其综合敏感性可达到90%左右，诊断敏感性则可达到83%～97%，这表明T-SPOT.TB试验具有非常高的敏感性[3]。TB试验同样作为结核病诊断的重要手段，其主要通过对血清中的IgG抗体进行测定，了解B细胞在刺激下所产生的抗体[4]。

根据本研究测定结果，结核组T-SPOT.TB阳性率为78.57%，TB阳性率为37.50%（P<0.05），该结果与国内其他文献研究一致。因结核病患者处在不同的阶段，故其细胞免疫和自身体液免疫也存在一定的差异，从不同角度对结核病的诊断效果做出反应，从而实现诊断准确率的提升。此外，本研究对T-SPOT.TB两孔检测斑点计数情况进行对比，结果发现，两组两孔均无显著差异（P>0.05），即表明结核病患者尽管体内会产生一定的 致使阴性出现一定的升高，但对T-SPOT.TB测定结果并无显著影响。

综上所述，相较于TB试验，T-SPOT.TB试验在结核病诊断中具有更高的应用价值，但在实际操作中，建议将两项检测技术联合运用，从而实现对诊断准确性的进一步提升。

参考文献：

[1]崔鲂，杨玲，孟江萍，等.结核感染T细胞斑点试验及结核抗体在肺外结核病诊断中的临床意义[J].西部医学，2014，11（1）：103-104，107.

[2]中华医学会结核病学分会.肺结核诊断和治疗指南[J].中华结核和呼吸杂志，2001，24（2）：70-74.

[3]高万芹.结核感染T细胞斑点实验在结核病快速诊断中的临床应用价值[J].国际检验医学杂志，2014，35（24）：3450-3452.

[4]邹丹凤，肖和平，尹洪云.结核感染T细胞斑点试验在HIV/AIDS合并结核病诊断中的应用[J].同济大学学报（医学版），2015，59（5）：74-78.编辑/张建婷