RP-HPLC法测定穿心莲片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量

马纪伟

（南阳医学高等专科学校，河南 南阳 473058）

RP-HPLC法测定穿心莲片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量

马纪伟

（南阳医学高等专科学校，河南 南阳 473058）

目的 测定穿心莲片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。方法利用RP-HPLC法，采用Diamonsil（钻石）C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，流动相为甲醇-水（55∶45），流速：1.0 mL/min，检测波长：225 nm（穿心莲内酯）、254 nm（脱水穿心莲内酯）。结果 穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯分别在0.31～2.38 μg和0.29～2.51 μg范围内线性关系良好，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的平均回收率分别为100.53%和99.98%，RSD分别为2.06%和2.45%。结论 RP-HPLC法测定穿心莲片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，方法简便，样品处理简便易行，可作为穿心莲片的质量控制方法。

穿心莲片；穿心莲内酯；脱水穿心莲内酯；RP-HPLC法

穿心莲片是由穿心莲干浸膏加适量辅料压制而成的中药片剂，具有清热解毒、凉血消肿的功效，临床上用于感冒发热、咽喉肿痛、口舌生疮[1]。穿心莲的主要有效成分为穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯等[2]，为了有效控制产品质量，保证临床用药安全，笔者用RP-HPLC法测定穿心莲片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，结果证明该方法简便易行，现介绍如下。

1 仪器与药品

1.1 仪器

日本岛津LC－10AD高效液相色谱仪；岛津SPD－10A紫外检测器；浙江大学智能信息研究所N2000双通道色谱工作站。

1.2 药品

穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品（中国药品生物制品检定所提供）；穿心莲片（广西济民制药厂，批号为160301、160302、160401）；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil（钻石）C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（55：45）；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；检测波长：225 nm（穿心莲内酯）、254 nm（脱水穿心莲内酯）。

2.2 样品溶液制备

取穿心莲片样品20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取0.2 g，置于50 mL量瓶中，加入甲醇50 mL，冷浸1小时，超声处理30分钟，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液即得。

2.3 对照品溶液制备

精密称取穿心莲内酯对照品11.35 mg、脱水穿心莲内酯对照品12.32 mg，分别置于100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，浓度分别为113.5 μg/mL、123.2 μg/mL。

2.4 阴性对照实验

取辅料适量，按2.3的方法制备阴性样品。精密吸取阴性溶液10 μL并测定，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯分离良好，阴性样品在穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品于相同保留时间未见有吸收峰，说明无干扰。见图1。

图1 穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯RP-HPLC色谱图

2.5 线性关系

取上述两种对照品溶液，分别精密吸取4 μL、6 μL、8 μL、10 μL、12 μL、14 μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积。以对照品进样量（μg）为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的进样量与其色谱峰面积均呈良好的线性关系。回归方程：穿心莲内酯：Y= 6 702.0X+15.08，R=0.999 9，线性范围：0.31～2.38 μg；脱水穿心莲内酯：Y=4 941.29X－14.97，R=0.999 7，线性范围：0.29～2.51 μg。

2.6 精密度实验

精密吸取对照品溶液10 μL，连续进样5次，记录峰面积。结果穿心莲内酯平均峰面积为1 722 548，RSD=0.52%；脱水穿心莲内酯平均峰面积为1 202 541，RSD=0.56%。

2.7 重复性实验

取同一批号样品5份，按样品测定方法测定，结果样品中穿心莲内酯的平均含量为22.48 mg/片，RSD为0.48%；脱水穿心莲内酯为20.09 mg/片，RSD为0.51%。

2.8 稳定性实验

取同一样品溶液10 μL，分别放置2小时、4小时、6小时、8小时、14小时、24小时测定色谱峰面积。结果穿心莲内酯平均峰面积为2 022 152，RSD=0.36%；脱水穿心莲内酯平均峰面积为1 748 511，RSD=0.41%。可知样品溶液在24小时内稳定。

2.9 加样回收实验

精密量取已知含量样品5份，精密加入对照品适量，按样品溶液制备方法制备，取样品溶液和对照品溶液10 μL，分别进样，测定峰面积，计算回收率。结果平均回收率穿心莲内酯为100.53%，RSD=2.06%；脱水穿心莲内酯为99.98%，RSD=2.45%，具体见表1。

2.10 样品测定

按2.2样品溶液的制备方法，测定3批样品的含量，结果见表2。

3 讨论

表1 穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯回收率实验

表2 穿心莲片成分含量测定

3.1 流动相的选择

本实验比较了甲醇-水（60∶40）、甲醇-水（55∶45）、甲醇-水（50∶50）等流动相，经实验摸索，最终确定流动相组成为甲醇-水（55∶45）分离效果最好。

3.2 柱温的选择

曾考察25℃、28℃、30℃、35℃等不同柱温对测定结果的影响，结果表明，30℃时各色谱峰之间分离度好、峰形锐、出峰时间适宜，故选择30℃为测定柱温。

[1]国家药典委员会.中国药典[M].北京：化学工业出版社，2015.

[2]唐芳，向大雄，李焕德.RP-HPLC法测定穿心莲及其制剂中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量[J].药物分析杂志，2000，20（6）：421.

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1671-1246（2017）12-0150-02