HPLC法测定复方苯巴比妥溴化钠片中丹酚酸B的含量

2017-07-07刘震凌王佳楠

中国现代药物应用 2017年6期

刘震凌王佳楠

刘震凌王佳楠

目的采用高效液相色谱法(HPLC)测定复方苯巴比妥溴化钠片中丹酚酸B的含量。方法采用CAPCELLPAK-C18色谱柱；以乙腈-0.05%磷酸溶液(20∶80)为流动相；检测波长为286 nm。结果 HPLC法测定丹酚酸B进样量在0.1742～2.0904 μg范围内与峰面积呈良好线性关系,平均加样回收率为99.00%,相对标准偏差(RSD)=0.6%(n=9)。结论 HPLC测定方法简便、准确,专属性强,重现性好,可用于该制剂的质量控制。

复方苯巴比妥溴化钠片；高效液相色谱法；丹酚酸B

复方苯巴比妥溴化钠片原标准收载于国家药品监督管理局《国家药品标准》(化学药品地方标准上升国家标准第十二册),由溴化钠、苯巴比妥两种化药成分,及丹参干膏等五种中药组成的中、西药复方制剂［1-4］。《中国药典2010年版一部》“丹参”药材中丹酚酸B为含量测定主要控制指标之一,《中国药典2010年版一部》中丹参的含量测定方法,建立高效液相色谱法测定本品中丹参干膏中丹酚酸B的含量［1］。

1 仪器与试药

岛津LC -2010C高效液相色谱仪,丹酚酸B(中国食品药品检定研究院提供,批号：111562-201110),乙腈、甲醇均为色谱纯(Fisher Chemical公司),磷酸为色谱纯(天津市科密欧化学试剂有限公司)。复方苯巴比妥溴化钠片(吉林省中研药业有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱：CAPCELLPAKC18(5.0 μm,4.6 mm×250 mm)；流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液(20∶80)；流速：0.8 ml/min；柱温：35℃；检测波长：286 nm；进样量：10 μl。

2.2 丹酚酸B对照品溶液精密称取丹酚酸B对照品10 mg,置于50 ml量瓶中,加50%甲醇适量使溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取10 ml,置25 ml量瓶中,用50%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得(80 μg/ml)。

2.3 供试品溶液精密称取重量差异项下供试品,研细,称取细粉适量(约相当于1片量),置10 ml量瓶中,加入50%甲醇溶液约8 ml,超声处理(功率：250 W,频率：33 kHz)30 min,放冷,用50%甲醇溶液稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

2.4 丹酚酸B阴性对照溶液提供缺丹参干膏的空白样品,按供试品溶液项下方法操作制备丹酚酸B的阴性对照溶液,精密量取10 μl,注入液相色谱仪,结果在阴性对照溶液色谱图中未检出与丹酚酸B对照品保留时间一致的色谱峰。

2.5 标准曲线精密称取丹酚酸B对照品10.89 mg,置25 ml量瓶中,加50%甲醇溶液适量使溶解,并稀释至刻度,摇匀,精密量取10 ml,置25 ml量瓶中,摇匀(0.174 mg/ml)。精密吸取对照品溶液1、2、4、6、8、10 μl,分别注入液相色谱仪。以进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程为Y=1236991.20X-21592.75,结果表明,丹酚酸B进样量在0.1742～2.0904 μg范围内,与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验精密量取供试品溶液10 μl,注入液相色谱仪,重复进样6次,记录峰面积,均值为826773,RSD为0.3%(n=6),表明精密度良好。

2.7 稳定性试验取供试品溶液(批号：20120302),分别于0、5、9、11、14、17、19 h时进样10 μl,丹酚酸B峰面积在17 h后有下降趋势,结果表明供试品溶液在17 h内基本稳定。

2.8 重复性试验取供试品(批号：20120302),制备6份供试品溶液,进行测定,其平均含量为0.6959 mg/片,RSD= 0.5%(n=6),表明重复性良好。

2.9 回收率试验取相当于0.5片量的已知含量的供试品(批号：20120302),共9份,置10 ml量瓶中,分别精密加入每1毫升含丹酚酸B 0.1742 mg的对照品溶液1.6、2.0、2.4 ml,各3份,分别加入50%甲醇溶液约6 ml,超声处理(功率：250 W,频率：33 kHz)30 min,放冷,用50%甲醇溶液稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,注入液相色谱仪,记录峰面积,按外标法计算［5-7］丹酚酸B的平均回收率为99.00%,RSD=0.6%(n=9),表明具有良好的回收率。见表1。

2.10 样品测定结果按上述方法测定三批样品中的丹酚酸B含量。见表2。