秘制烧伤膏对大鼠浅Ⅱ度烧烫伤的保护作用及机制研究

赵璐，邹鹏，方振伟，姜川，李丹妮*

（1.沈阳医学院基础医学院生物化学教研室，辽宁沈阳110034；2.辽宁中医药大学附属医院中医内科）

秘制烧伤膏对大鼠浅Ⅱ度烧烫伤的保护作用及机制研究

赵璐1，邹鹏1，方振伟2，姜川1，李丹妮1*

（1.沈阳医学院基础医学院生物化学教研室，辽宁沈阳110034；2.辽宁中医药大学附属医院中医内科）

目的：观察秘制烧伤膏对大鼠浅Ⅱ度烧烫伤的疗效并探讨其作用机制。方法：建立经典大鼠浅Ⅱ度烧烫伤模型，将72只大鼠随机分成秘制烧伤膏组、京万红组和空白对照组，并分别于烧烫伤后1、2、3、7、14、21 d 6个时间点做描记称重法，以烧烫伤后2 d的创面面积作为烫伤面积计算各时间点创面愈合率；取烧烫伤后3 d大鼠背部创面全层皮肤，采用Western blot法测定白介素6（IL-6）、核因子κB（NF-κB）和Caspase-3的蛋白表达水平。结果：烧烫伤后3 d开始，秘制烧伤膏组、京万红组与空白对照组创面愈合率差异均有统计学意义（P＜0.01或0.05），秘制烧伤膏组创面愈合率与京万红组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。与京万红组、空白对照组比较，秘制烧伤膏组在烧烫伤后3 d时IL-6、NF-κB和Caspase-3蛋白表达水平均有较明显的降低（P＜0.05）。结论：大鼠浅Ⅱ度烧烫伤后，秘制烧伤膏通过抑制炎症与凋亡水平来保护创面，促进创面愈合，且治疗效果优于京万红。

Ⅱ度烧烫伤；秘制烧伤膏；炎症因子；凋亡

烧烫伤是日常生活中比较常见的一种皮肤意外损伤。本研究以SD大鼠背部皮肤浅Ⅱ度烧烫伤为模型，与传统治疗药京万红比较，观察秘制烧伤膏在皮肤浅Ⅱ度烧烫伤中愈合效果，拟揭示秘制烧伤膏抑制炎症反应和细胞凋亡的具体机制。

1 材料与方法

1.1 药品和试剂秘制烧伤膏由辽宁中医药大学附属医院药剂室提供，京万红软膏（天津达仁堂京万红药业有限公司，批号Z12020440）；核因子κB（NF-κB）抗体（1163）、白介素6（IL-6）抗体（9324）；Caspase-3抗体（9662S）（英国Abcam公司）。

1.2 仪器倒置显微镜XSZ-DZ（重庆光学仪器厂）；电热恒温水箱（中国恒科公司）；超净工作台（北京半导体设备厂）；Western blot及转膜设备（美国BioRad公司）；显影剂（日本柯达公司）。

1.3 实验动物及分组健康成年SD大鼠72只，体重200～240 g，雌雄各半，由沈阳医学院动物实验中心提供（许可证号：SCXK（辽）2015-0001）。按照随机数字表法分为秘制烧伤膏组、京万红组、空白对照组，每组24只。

1.4 动物模型制备将大鼠适应性饲养7 d。腹腔注射10%水合氯醛（350mg/kg）进行麻醉，然后于大鼠背部用10%硫化钡脱毛处理，将直径4 cm铁棒于90℃热水中静置15min，取出后用无菌滤纸迅速吸干表面残留水分，一端紧贴在大鼠背部处理过的皮肤上10 s，建立浅Ⅱ度烧烫伤模型［1］。1.5给药方法空白对照组不给药，京万红组和秘制烧伤膏组分别涂有相同面积的秘制烧伤膏和京万红软膏2 g，每天消毒后换药1次，连续给药21 d，每组置于室温下分开饲养，自由饮食、饮水、排便。造模完成后为了防止休克的产生，立即对大鼠腹腔注射乳酸林格氏液5m l。

1.6 观察指标分别在烧烫伤后1、2、3、7、14、21 d 6个时间点，每组随机抽取烧3只大鼠，采用描记称重法测定［2］，即以烧烫伤后2 d的创面面积作为烫伤面积，用透明的方格纸铺在烫伤处，描出对应时间的创面面积，按描下的笔迹剪下后称重，以质量代替面积，因而创面愈合率（%）=（烫伤面积-各时相点面积）/烫伤面积×100%。

1.7 Western blot法检测IL-6、NF-κB和Caspase-3的表达水平在烧烫伤后3 d，随机挑选每组1只大鼠，在10%水合氯醛（350mg/kg）腹腔注射麻醉后，去除表面痂皮，取创面全层皮肤组织150mg左右，用RIPA裂解液处理，提取蛋白，使用酶标仪测定浓度，然后制成相应的蛋白样品（全程冰浴）。以上方式重复3次，采用Western blot法检测IL-6、NF-κB、Caspase-3蛋白的表达水平。

1.8 统计学方法采用SPSS 17.0软件进行统计学分析，计量资料采用均数±标准差表示，采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）进行统计学分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 创面愈合率比较烧烫伤后1 d，3组创面愈合率差异无统计学意义。烧烫伤后3、7、14、21 d时间点，秘制烧伤膏组、京万红组与空白对照组创面愈合率比较差异均有统计学意义（P＜0.01或＜0.05）；秘制烧伤膏组创面愈合率与京万红组比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 各组大鼠不同时间点创面愈合率比较（x±s）

2.2 IL-6、NF-κB、Caspase-3表达水平比较秘制烧伤膏组大鼠IL-6、NF-κB和Caspase-3表达水平与京万红组、空白对照组比较均明显下降（P＜0.05），见图1。

图1 Westernblot法检测NF-κB、IL-6和Caspase-3的表达水平

3 讨论

在日常生活中，浅Ⅱ度烧烫伤是比较常见的，此种创伤是一种真皮损伤，创面局部红肿明显，伴有大小不一的水疱形成，水疱破裂后，创面潮红，创面温度较高，且疼痛剧烈，易并发感染。不同的创面，其处理方式也不同，但目的均是为了减少炎症和预防感染，降低对创面的负面影响，促进创面早日愈合。秘制烧伤膏在保护和修复创面方面可能存在以下机制：覆盖创面，形成保护膜，保持创面湿润，同时防止感染；秘制烧伤膏在分子层面可抗炎、促凋亡，在一定程度上可以减轻炎症，促进创面愈合［3］。本研究结果表明在大鼠烧烫伤后分别使用秘制烧伤膏、京万红，3、7、14、21 d后与京万红组比较，秘制烧伤膏组创面愈合率更好。

研究表明，烧烫伤后炎症介质，如IL-6体液浓度在1～3 d内达到或接近高峰［4］。创面处大量的炎症因子会增加局部血管的通透性，进而加重局部水肿，会延缓创面的愈合；此外大量渗出的体液会产生休克，因而减少炎症因子的浓度能减轻症状，促进创面愈合。同时研究表明，创伤后炎症反应一般与细胞凋亡同步改变，减轻炎症反应可以有效降低细胞凋亡水平［5］。NF-κB是核转录因子的一种，最常见于P50/P65组成的二聚体［6］，在机体中常处于静止状态，当机体组织受损导致细胞损伤时，NF-κB激活并转移到细胞核，参与并调控白介素等炎症因子的表达水平［7-8］。NF-κB的异常活化可以促进炎症因子等相关基因的转录，而炎症因子作为一种外部刺激信号又可以激活NF-κB的表达，从而放大炎症反应。部分炎症因子可以作为一种外源性因素诱导凋亡的产生［9］，而组织细胞大量凋亡后，会延长创面愈合的时间，降低愈合率，增加创面感染的机会。Caspase家族的重要作用是介导细胞凋亡，其中Caspase-3是细胞凋亡的执行者，可直接导致细胞凋亡［10］。本研究采用Western blot法检测烧烫伤后3 d大鼠创面处皮肤的IL-6、NF-κB和Caspase-3表达水平，可以发现秘制烧伤膏明显降低了IL-6与Caspase-3的表达水平，同时NF-κB蛋白表达水平也被明显抑制，提示秘制烧伤膏可能通过NF-κB信号通路调控创面炎症因子表达水平，降低凋亡所导致的残余细胞的死亡，促进创面早期愈合，且治疗效果优于京万红。

本研究仅从炎症和凋亡角度探讨了秘制烧伤膏治疗烧烫伤的可能机制，但是却未更深一步的进行论证；同时表皮生长因子作为烧烫伤后创面愈合的另一个指标，有待进一步研究。

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Protective Effectof Burn OintmentonⅡ-degree Shallow Burn in Ratsand ItsM echanisms

ZHAO Lu1，ZOUPeng1，FANGZhenwei2，JIANGChuan1，LIDanni1*
（1.Department of Biochemistry and Molecular Biology，Shenyang Medical College，Shenyang 110034，China；2.Internal Medicine of Traditional ChineseMedicine，The Affiliated Hospitalof Liaoning University of TCM）

Objective：To observe the effectof burn ointmentonⅡ-degree shallow burn in rats and itsmechanisms.Methods：ThemodelofⅡ-degree shallow burn in ratswasestablished.The ratswere divided into burn ointmentgroup，Jingwanhong group and the control group，20 rats in each group.At 1，2，3，7，14，21 d after burn，the back whole skin from the wound of ratswere weighed，and the burn area at2 d after burn was used to calculate thewound healins rate atdifferent time points.The full-thickness skin wound at3 d afterburn were taken.The protein levelof IL-6，NF-κB and Caspase-3 weremeasured byWestern blot.Results：Compared with the controlgroup，thewound healing rate significantly increased in burn ointmentgroup and Jingwanhong group（P＜0.01 or0.05）.Thewound healing rate in burn ointmentgroup was better than that in Jingwanhong group（P＜0.05）.Compared with Jingwanhong group and control group，the protein expression level of IL-6，NF-κB and Caspase-3 significantly decreased in burn ointmentgroup（P＜0.05）.Conclusions：The burn ointmentpromoteswound healing by inhibiting inflammation and apoptosis after burn.And theeffectofwound healingofburn ointmentisbetter than Jingwanhong.

Ⅱ-degree shallow burn；burn ointment；inflammatory factor；apoptosis

R285.5

A

1008-2344（2017）03-0232-03

10.16753/j.cnki.1008-2344.2017.03.015

2017-01-03

（文敏编辑）

沈阳医学院科技基金项目（No.20132032）

赵璐（1989—），女（汉），实验员，研究方向：干细胞治疗.［通讯作者］李丹妮（1980—），女（汉），讲师，研究方向：干细胞治疗.E-mail：aqualdn@163.com