酒精性肝损伤模型大鼠肝功能动态变化及乌药的干预作用

谭明明 王军伟 丁慧珍 季梦漂 楼招欢

酒精性肝损伤模型大鼠肝功能动态变化及乌药的干预作用

谭明明1王军伟1丁慧珍1季梦漂1楼招欢2

目的观察酒精性肝损伤模型大鼠肝功能动态变化规律及乌药对酒精性肝损伤的干预作用。方法将33只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组和乌药干预组，各11只，各组大鼠分别于实验第14、21、33天眼眶静脉丛取血，测定血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平。结果模型组大鼠14、21、33天的ALT水平分别为（70.8±8.5）U/L、（74.8±10.0）U/L、（86.5±19.3）U/L；AST水平变化不显著，分别为（185.9±24.5）U/L、（175.1±15.5）U/L和（177.9±42.7）U/ L。模型组21、33天的ALT、AST与空白对照组[ALT：（58.4±13.0）U/L、（50.1±6.1）U/L；AST：（175.1± 15.5）U/L、（137.7±20.7）U/L]比较，差异有统计学意义（P＜0.01，P＜0.05）；与模型组比较，乌药干预组第21、33天ALT分别为（62.6±9.6）U/L和（65.8±12.6）U/L，AST分别为（142.6±25.0）U/L和（138.7± 18.2）U/L，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。结论酒精性肝损伤模型大鼠肝损伤严重程度随着造模时间延长逐渐加重；乌药对酒精引起的模型大鼠肝损伤有保护作用。

大鼠；酒精性；肝损伤；乌药

酒精是导致肝损伤的主要原因之一，建立理想的动物模型来研究酒精性肝病的发病机制及药物防治方法很有必要。目前国内外应用大鼠建立急、慢性酒精性肝损伤模型来观察各类药物的疗效，但由于使用实验大鼠的年龄、体质量、给予的酒精剂量、频率不同，以及采血的部位和时点不一致，导致不同研究发表的结果差异较大。为探索酒精性肝损伤大鼠肝功能变化规律，指导今后更好地研究保肝药物疗效，本文对实验中不同时点肝酶进行动态观察，同时观察乌药对不同时点酒精性肝损伤的干预作用，现报道如下。

1 实验材料

1.1 动物健康雄性SD大鼠，7周龄，体质量（180～220）g，33只，购自浙江省实验动物中心，动物质量合格证号：0016074，实验动物许可证号SCXK（浙）2014-0001。

1.2 药物及仪器乌药由浙江红石梁集团天台山乌药生物工程有限公司提供，参考文献[1]方法得醇提取物。红星二锅头酒（酒精度52%），2.0L/瓶，北京红星股份有限公司。与双蒸水按一定体积比例稀释，酒精体积分数为50%。TBA-40FR全自动生化仪，日本东芝医疗系统株式会社。ALT试剂盒（批号20140611），AST试剂盒（批号20140709），宁波美康生物科技股份有限公司提供。

2 实验方法

2.1 分组将SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、乌药干预组，每组11只。环境温度18～20℃，湿度70%左右。所有大鼠均给予基础饲料，自由采食饮水。

2.2 造模给药参考文献[2]进行造模。空白对照组大鼠以等体积的蒸馏水灌胃，其余两组大鼠均给予浓度为50%（V/V）的白酒灌胃，每天1次，灌胃容积1.2mL/100g，连续33天；自造模第l天起，乌药干预组灌胃给予乌药醇提物4g/kg，每天1次，灌胃容积为1mL/100g体质量，连续33天。

2.3 检测指标各组大鼠在第14、21天及末次给药并禁食12h后眼眶静脉丛取血，测定血清血清丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬门氨酸氨基转移酶（aspartatea minotransferase，AST）水平。

2.4 统计学方法应用SPSS16软件进行统计，计量资料数据以均值±标准差（x±s） 表示，采用单因素方差分析，两组间比较方差齐性用LSD方法检验，方差不齐用Dunnett检验。

3 实验结果

3.1 各组大鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）水平比较空白对照组大鼠在14、21及33天ALT水平呈逐渐下降趋势；模型组大鼠14、21及33天ALT水平呈逐渐上升趋势；与空白对照组比较，造模21、33天后，模型组大鼠ALT活性显著升高（P＜0.01）。与模型组比较，给药第21、33天，乌药干预组大鼠血清ALT水平明显降低（P＜0.05）。见表1。

表1 各组酒精性肝损伤大鼠血清ALT水平比较（U/L，x±s）

3.2 各组大鼠天冬门氨酸氨基转移酶（AST）水平比较与空白对照组大鼠比较，造模21、33天后，模型组大鼠AST水平显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，给药第21、33天，乌药干预组大鼠血清ALT水平明显降低（P＜0.05，P＜0.01）。见表2。

表2 各组酒精性肝损伤大鼠血清AST水平比较（U/L，x±s）

4 讨论

ALT主要存在于肝细胞浆中，AST存在于肝细胞浆和线粒体内。正常时ALT和AST主要存在于细胞内，而血清ALT、AST水平很低。当肝细胞受到损伤后，细胞变性、坏死，细胞膜的通透性增加或细胞膜破碎，肝细胞ALT和AST就会被释放到血液中，使血清ALT、AST水平增加。任何原因引起的肝细胞损害均可引起血清ALT、AST水平升高，ALT、AST水平是反映肝细胞损伤最敏感指标之一[3]。

本研究通过灌胃给予浓度为50%（v/v）的白酒，每日1次，灌胃容积1.2mL/100g，连续33天，与空白对照组比较，模型组大鼠ALT、AST水平逐渐升高，提示饮酒时间越久，肝损伤越严重。由于本课题组曾在既往预实验中发现，按照同样的剂量造模，延长观察时间将有不少大鼠发生死亡，存活大鼠虽然肝脏病理损害仍在加重，但血清转氨酶水平反而下降，故将本研究的终点定在33天，33天为肝损伤及药物保护作用观察最为理想的时点。

乌药化学成分复杂，含丰富的呋喃倍半萜及其内酯、黄酮、挥发油、异喹啉生物碱等成分，具有抗病毒、抑菌、抗肿瘤、调节消化、兴奋心肌、改善中枢神经系统功能、抗炎镇痛、防治糖尿病肾病、调节凝血功能等药理作用。文献[4]报道，该药有降低转氨酶的作用。本研究结果显示，经乌药醇提物干预后，造模21天及33天模型大鼠的ALT及AST水平均有显著下降，提示乌药对模型大鼠因酒精引起的肝损伤，有一定的保护作用。

［1］Wang JW，Chen XY，Hu PY，et al.Effects of linderae radix extracts on a rat model of alcoholic liver injury［J］.Experimental and Therapeutic Medicine，2016，11（6）：2185-2192.

［2］赵初环，卢中秋，李惠萍，等.大鼠酒精性肝病模型的建立［J］.浙江临床医学，2007，9（4）：435-436.

［3］黄俊杰，王彩冰，黄丽娟，等.bFGF对慢性酒精中毒大鼠血清GPT、GOT活性的影响［J］.中国当代医药，2010，17（27）：7-8.

［4］谭明明，张泓，王军伟.乌药对急性酒精性肝损伤的保护作用及机制初探［J］.安徽医科大学学报，2015，50（12）：1773-1780.

（收稿：2016-11-19修回：2016-12-10）

Dynamic Changes of Liver Function in Rat Alcoholic Liver Disease and the Intervention of Combined Spicebush Root in the Changes

TAN Mingming1,WANG Junwei1,DING Huizhen1,JI Mengpiao1,LOU Zhaohuan2.
1 Department of Emergency Medicine,Tiantai People's Hospital,Tiantai(317200),China;2 Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou(310053),China

ObjectiveTo observe the changes of liver function of rats with alcoholic liver disease and the intervention effect of combined spicebush root on the changes.MethodsThirty-three SD rats were randomly divided into three groups（n=11）:control group,model group,and treatment group.Except for control group,the rat model of alcoholic liver disease was established.On experimental day 14,21,and 33 the blood samples were drawn from rats＇orbital vein to detect alanine aminotransferase（ALT）and aspartate transaminase（AST）for evaluation of liver function.ResultsIn model group,ALT on day 14,21,and 33 were 70.8±8.5U/L,74.8±10.0U/L,86.5±19.3U/L, respectively,and AST on day 14,21,and 33 remained fast stable:185.9±24.5U/L,175.1±15.5U/L,and 177.9± 42.7U/L.The ALT and AST on day 21 and 33 in model group were significantly higher than those in control group（ALT:58.4±13.0U/L and 50.1±6.1U/L;AST:175.1±15.5U/L and 137.7±20.7U/L;P＜0.01 or P＜0.05）.The ALT and AST on day 21 and 33 in treatment group（ALT:62.6±9.6U/L and 65.8±12.6U/L;AST:142.6±25.0U/L and 138.7±18.2U/L）were significantly decreased compared with model group（P＜0.01 or P＜0.05）.ConclusionThe severity of live dysfunction increases with the days of molding and combined spicebush root can reverse the dysfunction in certain degree.

rats;alcoholic;liver injury;combined spicebush root

浙江省医药卫生平台计划（No.2015DTA021）；国家自然科学基金青年项目（No.81503328）；浙江省科技厅公益性技术应用研究计划（No.2016C33184）；浙江省台州市科技计划项目（No.2014A33339）。

1浙江省天台县人民医院急诊医学科（天台317200）；2浙江中医药大学（杭州310053）

楼招欢，Tel：0571-86613602，E-mail：lou_jasmine@163.com