非小细胞肺癌组织EGFR、TTF-1、CK7表达及其意义

吴琳，张苏宁

(中国医科大学附属盛京医院，沈阳 110004)

非小细胞肺癌组织EGFR、TTF-1、CK7表达及其意义

吴琳，张苏宁

(中国医科大学附属盛京医院，沈阳 110004)

目的 探讨表皮生长因子(EGFR)、甲状腺转录因子1(TTF-1)、细胞角蛋白7(CK7)在非小细胞肺癌(NSCLC)发生、发展中的作用。方法 选择89例NSCLC患者手术切除肿瘤组织标本为观察组，60例肺良性肿瘤患者的肺组织标本为对照组。采用免疫组化SABC法检测两组EGFR、TTF-1、CK7表达。分析观察组EGFR、TTF-1、CK7表达与NSCLC患者临床病理参数的关系。结果 观察组EGFR、TTF-1、CK7阳性表达率均高于对照组，P均<0.05；观察组EGFR、TTF-1、CK7表达与肿瘤类型、分化程度、临床分期及淋巴结转移有关(P均<0.05)。与患者性别、年龄、肿瘤体积无关(P均>0.05)。Spearman秩相关分析显示，观察组EGFR表达与TTF-1、CK7表达呈正相关(rs分别为0.339、0.627，P均<0.05)，TTF-1表达与CK7表达呈正相关(rs=0.591，P<0.05)。结论 EGFR、TTF-1、CK7可能参与了NSCLC的发生、发展过程，检测EGFR、TTF-1、CK7表达有助于NSCLC的早期诊断和病情评估。

非小细胞肺癌；表皮生长因子；甲状腺转录因子1；细胞角蛋白7

肺癌是临床常见的呼吸系统恶性肿瘤，具有发病率和病死率高的特点，非小细胞肺癌(NSCLC)约占原发性肺癌的85%[1]。随着环境污染的加剧和人口老龄化的到来，肺癌发病率呈明显上升趋势。NSCLC是肺癌最常见的病理类型之一。早发现、早诊断、早期评估NSCLC患者的病情对制定科学合理的治疗方案，改善预后，提高患者生命质量有重要价值。随着分子生物学研究的快速发展，肿瘤标志物用于辅助诊断恶性肿瘤成为研究热点。研究表明[2]，表皮生长因子受体(EGFR)异常表达与肿瘤细胞的血管生成、侵袭转移等密切相关。甲状腺转录因子1(TTF-1)是肺腺癌的一个特异性较高的血清学标志物，TTF-1表达升高参与了肺腺癌的发生、发展过程，亦与肺腺癌的病情严重程度、预后有关[3]。细胞角蛋白7(CK-7)在乳腺癌、肺腺癌组织中阳性表达率升高，且参与了二者的发生、发展过程[4]。但是目前尚未见有关NSCLC组织中EGFR、TTF-1、CK7表达变化及其临床意义的相关研究。2015年1月～2016年12月，我们观察了NSCLC患者肿瘤组织中EGFR、TTF-1、CK-7表达变化，现分析结果，探讨EGFR、TTF-1、CK-7在NSCLC发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取同期收治的89例NSCLC患者为观察组，其中男62例，女27例；年龄33～78(58.7±6.5)岁。按照2010年美国癌症联合会(AJCC)第8版[5]和国际抗癌联盟(UICC)第7版[6]肺癌诊断、病理分型和临床分期标准，本组腺癌57例，鳞癌32例；肿瘤直径<3 cm者27例，≥3 cm者62例；分化程度为中低分化51例，高分化38例；临床分期Ⅰ～Ⅱ期44例，Ⅲ～Ⅳ期45例；有淋巴结转移33例，无淋巴结转移56例。纳入标准：①均经纤维支气管镜检查以及病理组织学检查确诊为NSCLC；②术前未接受过放化疗；③术后生存3个月以上。排除标准：①妊娠期以及哺乳期妇女；②心脏功能不全者；③肝、肾功能障碍者；④合并其他系统恶性肿瘤以及可能影响本研究结果的疾病患者。另选取同期收治的60例肺良性肿瘤患者为对照组，其中男39例，女21例；年龄30～81(56.2±7.6)岁。两组年龄、性别分布具有可比性。本研究获得医院伦理委员会批准，患者或家属均签署知情同意书。

1.2 肿瘤组织EGFR、TTF-1、CK-7表达检测 分别取两组手术切除的肿瘤组组织标本，石蜡包埋并切片。采用免疫组化链霉亲和素生物素过氧化物酶复合物(SABC)法检测EGFR、TTF-1、CK-7表达。具体步骤：组织切片行乙醇水化，以浓度为0.1 mol/L PBS浸洗5 min，重复3次；将1份30%的过氧化氢与10份蒸馏水混合后，室温下将组织切片静置10 min，灭活内源性酶，然后PBS浸洗3次；热修复组织切片，每间隔10 min重复1次，共2次，冷却后采用浓度为0.1 mmo/L PBS浸洗3次。将5%的牛血清白蛋白封闭液(A液)滴加在切片上，在室温下保存20 min；滴加工作浓度为1∶100的一抗(EGFR单克隆抗体、TTF-1单克隆抗体、CK7单克隆抗体)，4 ℃下过夜。以0.1 mmol/L PBS浸洗3次，于切片上滴加工作浓度为1∶100的二抗(生物素化山羊抗小鼠IgG，B液)，37 ℃放置20 min。以0.1 mmol/L PBS浸洗3次，滴加试剂SABC(C液)后在37 ℃环境下放置20 min。以0.1 mmol/L PBS浸洗5 min，重复4次，最后取1 mL蒸馏水并在其中滴加显色剂DAB中A、B、C试剂1滴，充分混匀后将切片加入其中并在室温下进行显色反应，光镜下观察染色结果。主要试剂EGFR单克隆抗体、TTF-1单克隆抗体、CK7单克隆抗体均购自于福州迈新公司，即用型免疫组化SABC法检测试剂盒购于武汉博士德公司(生产批号：SA1021)。 结果判定： EGFR阳性染色主要存在于细胞质或细胞膜中，呈棕黄色或棕褐色颗粒；TTF-1阳性染色主要存在于细胞核中，呈黄色或棕黄色颗粒；CK7阳性染色主要存在于细胞质中，呈黄色或棕黄色颗粒。由2位经验丰富的病理医师进行双盲阅片。采用半定量方法判断两组标本EGFR、TTF-1、CK-7染色结果。分别对镜下阳性染色细胞百分比和染色强度给予评分。阳性染色细胞百分比：每张切片上观察5个高倍视野(×400)，每个视野计数200个细胞，计算阳性染色细胞百分比(阳性染色细胞/1 000×100%)，阳性染色细胞数<5%为0分，5%～<25%为1分，25%～<50%为2分，50%～<75%为3分，75%～100%为4分。阳性染色强度：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。两者计分相乘，0分者为阴性，≥1分为阳性。

1.3 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件。计数资料比较采用χ2检验和Fisher确切概率法，相关性分析采用Spearman秩相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组EGFR、TTF-1、CK7阳性表达率比较 观察组及对照组EGFR阳性表达率分别为59.55%(53/89)、18.33%(11/60)，TTF-1表达阳性率分别为53.93%(48/89)、11.67%(7/60)，CK7阳性表达率分别为57.30%(51/89)、16.67%(10/60)；两组比较P均<0.05。

2.2 观察组EGFR、TTF-1、CK7表达的相关性 经Spearman秩相关分析，观察组EGFR表达与TTF-1、CK7表达呈正相关(r分别为0.339、0.627，P均<0.05)，TTF-1表达与CK7表达呈正相关(rs=0.591，P<0.05)。

2.3 NSCLC组织EGFR、TTF-1、CK7表达与NSCLC患者临床病理参数的关系 EGFR、TTF-1、CK7阳性表达与肿瘤类型分化程度、临床分期、淋巴结转移均有关(P均<0.05)，与患者性别、年龄、肿瘤直径均无关(P均>0.05)。见表1。

表1 NSCLC组织EGFR、TTF-1、CK7表达与患者临床病理参数的关系[例(%)]

3 讨论

肺癌早期筛查技术的应用以及个体化的治疗方案降低了肺癌的死亡率，但其5年生存率仍低于15%，高复发率是目前临床攻克肺癌的难点[8,9]。NSCLC发病隐匿，早期缺乏特异性的临床症状和体征，大部分患者确诊时已处于中晚期，或已发生转移，延误了手术治疗的最佳时机[10]。随着对肺癌分子生物学的深入研究，肿瘤分子标志物用于辅助诊断恶性肿瘤成为研究热点。目前常用到的肿瘤标志物包括糖类抗原、胚胎抗原、肿瘤相关的酶、细胞角蛋白以及癌基因等[11]。寻找特异性和敏感性高的肿瘤标志物有助于早期诊断并评估NSCLC患者的病情，从而为制定患者的针对性、个体化治疗方案提供指导[12]。

EGFR是ErbB家族成员中的跨膜糖蛋白，是一种酪氨酸激酶型受体。研究发现，50%～80%的NSCLC患者肿瘤组织中存在不同程度的EGFR高表达[13]；EGFR基因突变率高达49.1%[14]。病理生理学研究发现，EGFR的过度表达与肿瘤细胞的血管生成、增殖、侵袭、转移等密切相关。TTF-1分子量为38 kD，是由14q13染色体上的NKX2-1基因所编码，用于调节组织特异性表面活性载脂蛋白A、B、C、Clara细胞抗原以及T1α表达的蛋白质。TTF-1在人类胚肺以及成年肺中可持续表达，是维持肺正常发育和功能的重要蛋白质。研究发现，TTF-1异常表达与肺部多种疾病密切相关，而在肺腺癌组织中TTF-1呈特异性高表达，可作为鉴别诊断原发性和转移性肺腺癌的重要标志物[15]。CK7主要表达于大多数的正常组织腺上皮以及移行上皮细胞中，其在乳腺、卵巢以及肺等腺癌组织中呈阳性表达，是鉴别诊断恶性肿瘤的重要免疫标志物；CK7对肺腺癌诊断的敏感性和特异性较高，分别为98.36%和86.42%[16]。

本研究观察组EGFR、TTF-1、CK7阳性表达率均高于对照组，提示NSCLC组织中EGFR、TTF-1、CK7呈不同程度的高表达，三者可用于NSCLC的辅助诊断。研究发现，TTF-1、CK7表达与肿瘤病理类型有关，肺腺癌组织中TTF-1、CK7阳性表达率高于肺鳞癌[11]，本研究得到相似结果。本研究发现，NSCLC组织分化程度低、临床分期晚以及有淋巴结转移者上述标志物的阳性表达率分别高于分化程度高、临床分期早以及无淋巴结转移者。提示EGFR、TTF-1、CK7可能介导并参与了NSCLC的发生、发展过程，检测EGFR、TTF-1、CK7表达可能有助于NSCLC的早期诊断和病情评估。有报道，TTF-1、CK7阳性表达与患者性别和肿瘤大小有关[11]，本研究结果与之不符，可能与本研究选取的样本量相对较小有关。本研究相关分析结果显示，观察组癌组织EGFR与TTF-1、CK7表达呈正相关，TTF-1与CK7呈正相关，提示三者联合检测有助于NSCLC的早期诊断及病情评估。

综上所述，NSCLC组织中EGFR、TTF-1、CK7表达上调。EGFR、TTF-1、CK7可能参与了NSCLC的发生、发展过程。EGFR、TTF-1、CK7表达情况可为NSCLC的早期诊断和病情评估提供依据。

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张苏宁(E-mail: zhangsn@sj-hospital.org)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.20.015

R730.51

B

1002-266X(2017)20-0049-03

2017-01-28)