GC法测定柴胡挥发油中3种成分的含量

裴晓丽，王 瑞，周 晓

（山西中医学院，山西太原030024）

GC法测定柴胡挥发油中3种成分的含量

裴晓丽，王 瑞，周 晓

（山西中医学院，山西太原030024）

●中医药学在世界上首先发现了中药并首创了方剂，医方是“除疾 保性命之术”，而剂则有“调百药齐，和之所宜”之功。采用现代药物制剂技术重新研究并升华古典方剂之术，开创未来药物制剂技术和新剂型药物研究的全新思维和方向。

目的：建立柴胡挥发油中α-蒎烯、对伞花烃和萜品油烯含量的测定方法。方法：采用水蒸气蒸馏法与盐析法提取柴胡中的挥发油，毛细管气相色谱法测定柴胡中的挥发油。色谱条件：HP-5毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μ m）；采用程序升温：初始温度70℃，以1.5℃/min升至130℃；进样器温度：250℃，检测器（FID）温度：250℃；分流比15∶1。结果：在本色谱条件下，柴胡挥发油中α-蒎烯、对伞花烃和萜品油烯与其他组分能得到良好分离；α-蒎烯、对伞花烃和萜品油烯分别在1.32×10-2～10.56×10-2mg/mL（r=0.991 0）、1.74×10-2～13.92×10-2mg/mL（r=0.993 5）和1.37×10-2～11.04×10-2mg/ mL（r=0.995 0）范围呈良好线性，加样回收率分别为97.50%、98.81%、98.17%。结论：该法简便、准确，可用于柴胡中挥发油的含量测定。

柴胡；挥发油；气相色谱

柴胡为伞形科植物柴胡Bupleurum Chinense DC.或狭叶柴胡Bupleurum scorzonerifolium Willd.的干燥根，辛、苦，微寒，归肝、胆、肺经，有疏散退热、疏肝解郁和升举阳气之功效。用于感冒发热，寒热往来，胸胁胀痛，月经不调，子宫脱垂，脱肛等的治疗［1］。挥发油作为柴胡主要的化学成分和活性成分，具有较高的研究价值。本实验采用气相色谱法对柴胡挥发油中的α-蒎烯、对伞花烃和萜品油烯进行含量测定。

1 仪器与试药

1.1 实验药材

柴胡药材购自河北安国药材市场，由山西中医学院王兵老师鉴定为正品。

1.2 仪器与试剂

岛津气相色谱仪（GC-2010 E）、挥发油提取器、十万分之一天平（梅特勒-托利多，AB135-S）；正己烷、氯化钠（天津科密欧试剂有限公司）、α-蒎烯对照品（批号7785-26-4，Aladdin Chemistry Co.Ltd）、对伞花烃对照品（批号CAS99-87-4，东京化成工业株式会社）、萜品油烯对照品（批号T0817，梯希爱上海化成工业发展有限公司）、莰烯（批号CAS79-92-5，东京化成工业株式会社）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

HP-5毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；程序升温：初温70℃，以1.5℃/min升至130℃；流速1.0 mL/min，进样量1.0 μL，分流比15∶1。气化室温度250℃，检测器（FID）温度250℃。采用内标法定量，内标物为莰烯。在此色谱条件下，柴胡挥发油中几种待测组分的色谱峰与其他成分色谱峰达到基线分离。供试品溶液与对照品溶液的色谱图见图1和图2。

图2 对照品、内标物混合液GC色谱图

2.2 挥发油的提取

取柴胡粉末50 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加入10%的氯化钠水溶液［2］400 mL，浸泡16 h，用挥发油提取器回流20 h，得挥发油，将所得的挥发油加正己烷定容至0.4 mL，即得挥发油的供试品溶液。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取α-蒎烯、对伞花烃和萜品油烯对照品适量，分别用正己烷溶解并制成浓度为1.32 mg/mL、1.74 mg/mL和1.38 mg/mL的对照品溶液。

2.4 内标物的制备

精密称取莰烯适量，用正己烷溶解并制成浓度为2.4 mg/mL的内标溶液。

2.5 方法学考察

2.5.1 线性范围 精密吸取上述各对照品溶液0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL和0.8 mL，分别置5个10 mL的量瓶中，同时分别加入上述内标物溶液0.4 mL，用正己烷定容至刻度，制成5个不同浓度的对照品混合溶液与内标物的混合溶液。按2.1所述色谱条件测定，以进样浓度（X）为横坐标，A对照/A内标峰面积之比（Y）为纵坐标进行线性回归，得到各组分回归方程。α-蒎烯线性回归方程为Y=1.068 1X-0.509 4，相关系数为0.991 0，线性范围为1.32×10-2～10.56×10-2mg/mL。对伞花烃回归方程为Y=1.074 4X-0.348 3，相关系数为0.993 5，线性范围为1.74×10-2～13.92×10-2mg/mL。萜品油烯回归方程为Y=1.051 8X-0.556 3，相关系数为0.995 0，线性范围为1.37×10-2～11.04×10-2mg/mL。

2.5.2 精密度试验 取柴胡（2016安国地产）粉末50 g，精密称定，按照“2.2”项下方法制备挥发油供试品溶液，精密加入内标物溶液莰烯16 μL，混合均匀，进样1.0 μL，重复进样6次，分别得各组分峰面积与内标物峰面积比值，α-蒎烯、对伞花烃和萜品油烯的RSD分别为2.45%、2.03%和1.68%（n=6）。表明仪器精密度良好。

2.5.3 稳定性试验 取柴胡（2016安国地产）粉末50 g，精密称定，按照“2.2”项下方法制备挥发油供试品溶液，精密加入内标物溶液莰烯16 μL，混合均匀，分别于0 h，2 h，4 h，6 h，8 h，10 h进样1.0 μL，计算各组分峰面积与内标物峰面积之比，结果RSD分别为2.09%、1.85%和1.64%（n=6）。表明供试品溶液在10 h内稳定。

2.5.4 重复性试验 取柴胡（2016安国地产）粉末50 g，精密称定，按照“2.2”项下方法平行制备挥发油供试品溶液6份，各精密加入内标物溶液莰烯16 μL，混合均匀，分别进样1.0 μL，在上述色谱条件下测得α-蒎烯、对伞花烃和萜品油烯的含量平均值分别为3.82×10-3mg/g（RSD值为2.56%）、4.39×10-3mg/g（RSD值为2.11%）和11.04× 10-3mg/g（RSD值为1.85%）。结果表明，该方法的重复性良好。

2.5.5 回收率试验 取9份已知含量的内蒙野生柴胡粉末50 g，精密称定，按照“2.2”项下方法制备挥发油供试品溶液，精密加入内标物溶液莰烯16 μL，再分别精密加入高、中、低3种浓度的各自对照品溶液，摇匀。按2.1所述色谱条件进样测定，并计算回收率，结果见表1。

表1 回收率测定表 （n=9）

3 样品测定

分别取不同产地柴胡粉末50 g，精密称定，按照“2.2”项下方法制备挥发油供试品溶液，精密加入内标物溶液莰烯16 μL，混合均匀，按2.1所述色谱条件进样测定。不同产地柴胡中3种组分含量见表2。

表2 不同产地柴胡中3种挥发油成分的含量（×10-3mg/g）

4 讨 论

从实验结果可以看出，柴胡挥发油中α-蒎烯、对伞花烃和萜品油烯的含量均不高，新样品与旧样品挥发油量差异明显。由于柴胡中挥发油的含量较少，约占0.15%［3］，且提取过程中受温度的影响较大，极易挥发，对挥发油的提取造成了一定的困难。本次实验通过采用水蒸气蒸馏法与盐析法结合的方式提取挥发油，增强了挥发油的析出程度。在柴胡浸提时间的选择上主要通过观察挥发油提取器中挥发油的颜色判断，当提取时间为20 h时，挥发油颜色呈橙黄色，提取时间过长时，挥发油颜色加深，变为深褐色，甚至产生沉淀，发生变质［4］。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典一部［S］.北京：中国中医药科技出版社，2015：198.

［2］林烨，张军，席晓荣.正交法优化柴胡挥发油测定方法［J］.中国实用医药，2009，4（6）：54-55.

［3］李秀琴，孙秀燕，何仲贵，等.柴胡挥发油提取方法的研究［J］.中国药学杂志，2004，39（2）：103-105.

［4］韩毅丽，张海波，元倩倩，等.不同产地柴胡挥发油中有效成分的气相色谱研究［J］.山西中医学院学报，2014，15（5）：39.

（编辑：梁葆朱）

Determination of component contents of volatile oil from bupleurum by GC

Pei Xiaoli，Wang Rui，Zhou Xiao
（Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

Objective：To establish a method for the determination of α-pinene，p-cymene and terpinolene in bupleurum volatile oil.Methods：Volatile oil in bupleurum was extracted by steam-distilation and salting and their contents were determined by GC.GC was conducted on HP-5 capillary column（30 m×0.25 mm，0.25 μm）.Temperature program：the initial temperature was set at 70℃，then increased to 130℃at 1.5℃/min.The temperature of inject and FID detector was 250℃and the split ratio was 15∶1.Results：α-pinene，p-cymene and terpinolene in bupleurum volatile oil were separated from other constituents under the chromatographic conditions.The linear range of α-pinene，p-cymene and terpinolene were respectively 1.32×10-2～10.56×10-2mg/mL（r=0.991 0）、1.74×10-2～13.92×10-2mg/mL（r=0.993 5）and 1.37×10-2～11.04×10-2mg/mL（r=0.995 0）.Their recovery rates were respectively 97.50%，98.81%and 98.17%.Conclusion：This method is simple，accurate and suitable for the determination of component contents of volatile oil in bupleurum.

bupleurum；volatile oil；GC

R284.2

A

1671-0258（2017）02-0022-03

山西省教育厅科技研究开发项目（20111113）；山西中医学院博士基金项目

裴晓丽，高级实验师，E-mail：peixl@sina.com

王瑞，博士，副教授，硕士生导师，E-mail：wrgreentea@163.com