电针不同神经节段腧穴对2型糖尿病大鼠的影响*

2017-06-27胡晓刚田环环马艳佳王跃颖曹昺焱

针灸临床杂志 2017年6期

关键词：俞穴胰岛电针

胡晓刚,李瑞△,贾宁,田环环,马艳佳,王跃颖,曹昺焱

(1.北京中医药大学，北京 100029;2.中国中医科学院西苑医院，北京 100091)

电针不同神经节段腧穴对2型糖尿病大鼠的影响*

胡晓刚1,李瑞1△,贾宁1,田环环1,马艳佳1,王跃颖1,曹昺焱2

(1.北京中医药大学，北京 100029;2.中国中医科学院西苑医院，北京 100091)

目的：通过观察电针不同腧穴对2型糖尿病大鼠影响，为临床针灸治疗T2DM选穴提供依据。方法：以高糖高脂饮食结合链脲佐菌素注射制备T2DM模型大鼠，随机分为模型组、心俞组、胰俞组和肾俞组，分别以电针刺激心俞穴、胰俞穴、肾俞穴，连续干预4周，观察各组动物空腹血糖、OGTT曲线下面积、空腹胰岛素、胰岛素抵抗水平和胰岛形态的变化。结果：①胰俞组空腹血糖和OGTT曲线下面积下降显著(P<0.05)，心俞组和肾俞组变化不明显(P>0.05);②电针对大鼠空腹胰岛素水平无影响，胰俞组HOMA-IR较模型组极显著降低(P<0.01)，心俞组和肾俞组变化不明显(P>0.05);③HE染色：模型组胰岛严重萎缩，胰岛内细胞减少，细胞形态异常;胰俞组胰岛形态、胰岛内细胞的形态和数目基本接近空白组。结论：电针胰俞穴可以降低T2DM大鼠血糖，改善糖耐量和胰岛素抵抗，保护胰岛形态，且胰俞穴的这些作用符合神经节段支配理论。

电针;胰俞;T2DM；大鼠;神经节段

糖尿病(Diabetes)已经成为影响人类健康的主要慢性病之一，其影响除引起全身代谢紊乱外，还造成心血管系统、神经、肾脏、眼等重要器官的多种并发症。近年来，糖尿病的发病率总体呈上升态势，以我国为例，20～79岁之间的成年人患糖尿病总人数接近1.1亿人，居世界最高，用于糖尿病防治的卫生支出达到511亿美元[1]。占糖尿病总发病人数90%的2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus，T2DM)是预防和治疗糖尿病的重中之重。目前的糖尿病治疗主要以口服药物和胰岛素注射为主，需要长期甚至终身用药。

针灸是治疗T2DM的有效方法之一，在我国针灸治疗糖尿病有着悠久的历史，有研究者[2]用《黄帝内经》中“水俞五十七处”之针灸处方治疗T2DM并取得良好的效果。周平南等[3]进行了大量的临床研究，证明针灸疗法治疗新发T2DM有较高的有效率。WHO在2003年将针灸疗法认定为治疗糖尿病的方法之一。本研究通过动物实验优化临床中针灸治疗T2DM穴位选择，并探讨针灸作用的机理。

1 材料与方法

1.1 实验动物

清洁级雄性SD大鼠[斯贝福(北京)实验动物科技有限公司，许可证号：SCXK(京)2011-004]，体质量150～160 g。饲养条件：温度18 ℃～25 ℃，相对湿度50%～60%，空气流通，每笼5只，自由饮水进食，12 h明/暗循环光照。饲料由北京华阜康生物科技股份有限公司提供[许可证号：SCXK(京)2014-0008]。

1.2 模型制备

适应性喂养1周后，随机抽取10只作为空白组，以普通饲料喂养。其余动物以高糖高脂饲料(含70%普通饲料、10%猪油、10%蔗糖、10%蛋黄粉)喂养4周后，按35 mg/kg质量比腹腔注射2%链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)溶液(溶剂为浓度0.1 mol/L的柠檬酸、柠檬酸钠混合液,pH值4.2-4.5)，注射72 h后测随机血糖，注射2周后行口服葡萄糖耐量实验(oralglucose tolerance，OGTT)。以随机血糖>16.7 mmol/L且OGTT实验2 h血糖>11.1 mol/L为成模标准。

1.3 干预方法

成模动物依空腹血糖随机分为模型组、胰俞组、心俞组和肾俞组，每组10只，自分组之日起食普通饲料。空白组不予任何干预,其余各组于每天下午17:00～20:00干预，各组在干预时间上保持同步，每日1次，每周连续6日，共4周。针刺穴位参考《实验针灸学》，心俞：第5胸椎棘突下，后正中线旁开7 mm；胰俞：第8胸椎棘突下，后正中线旁开7 mm；肾俞：第2腰椎棘突下，后正中线旁开7 mm[4]。

模型组：将大鼠固定在鼠套中20 min，不予其他干预。胰俞组：将大鼠固定在鼠套中，以0.16 mm×7 mm中研太和牌无菌毫针斜刺双侧胰俞穴，进针深度4 mm。接通英迪KWD-808电针(电针正极接位于腧穴的毫针，在同侧后足缚以用生理盐水浸湿的棉条并连接电针负极)，频率2 Hz，电流2 mA，连续波，留针20 min。心俞组：以同法固定大鼠，斜刺双侧心俞穴，进针4 mm，电针连接方法及参数同上。肾俞组：以同法固定大鼠，直刺双侧肾俞穴，进针4 mm，电针连接方法及参数同上。

1.4 取材

干预4周后，用0.3%戊巴比妥钠按1 ml/100 g比例行腹腔注射麻醉[5]，腹主动脉取血5 ml，静置30 min后离心(3000 rmp,4 ℃,15 min)(离心机:Legend micr017r,Thermo公司生产)，将上清液转移至1.5 ml离心管并保存于-20 ℃冰箱。取近脾脏胰腺组织保存于波恩氏液中以固定组织。

1.5 指标检测

①空腹血糖检测：于初次前和末次干预后，采尾尖取血以罗氏血糖仪测空腹血糖(Fasting blood glucose，FBG)。②糖耐量检测：于初次干预前及末次干预后进行OGTT：动物禁食过夜，次日上午8:00按1 ml/100 g灌胃20%葡萄糖溶液，检测灌胃前空腹血糖及灌胃后30、60、120 min后血糖。③血清胰岛素水平检测由北京华英生物技术研究所完成。用公式计算大鼠的胰岛素抵抗指数，计算公式[6]：HOMA-IR=血清胰岛素(μU/ml)×空腹血糖(mmol/L)/22.5。④胰腺E染色：胰腺组织固定72 h后，修成5 mm3块状，梯度酒精脱水，再以二甲苯脱酒精2次，石蜡浸润脱二甲苯3次，石蜡包埋，切成5 μm切片，常规HE染色。用奥林巴斯BX53显微镜观察切片并拍照。

1.6 统计学方法

2 结果

2.1 大鼠空腹血糖(FBG)变化

干预前空白组FBG极显著低于各干预组(P<0.01)，模型组和各治疗组之间无差异。干预后，各电针干预组与模型组相比，胰俞组FBG显著降低(P<0.05)，心俞组和肾俞组与模型组相比有降低的趋势，但是无统计学意义。各组治疗前后对比：模型组FBG较干预前极显著升高(P<0.01),胰俞组出现显著下降(P<0.05)，空白组、心俞组和肾俞组变化不明显。说明电针胰俞穴可以降低T2DM大鼠FBG，其作用优于电针心俞穴和肾俞穴。见表1。

表1 干预前后大鼠空腹血糖(FBG)变化

注：与空白组比较，**P<0.01；与模型组比较，△P<0.05;与干预前比较，##P<0.01,#P<0.05

2.2 大鼠糖耐量变化

干预前空白组OGTT曲线下面积极显著低于各干预组(P<0.01)，模型组和各治疗组之间无差异。干预后各电针组和模型组比较，胰俞组OGTT曲线下面积极显著降低(P<0.01)，心俞组和肾俞组有降低趋势，但差异不明显。各组干预前后对比，模型组OGTT曲线下面积呈现显著上升趋势(P<0.05)，胰俞组较干预前显著降低(P<0.05)，其余各组治疗前后无明显变化。说明电针干预可以提高T2DM大鼠糖耐量，其中以电针胰俞穴效果最佳。见表2。

表2 干预前后大鼠OGTT曲线下面积变化

注：与空白组比较，**P<0.01；与模型组比较，△P<0.01;与干预前比较，#P<0.05

2.3 大鼠空腹血清胰岛素水平(FINS)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)变化

所有组间FINS无显著差异。模型组和各治疗组HOMA-IR均极显著高于空白组(P<0.01)；胰俞组与模型组相比极显著降低(P<0.01)，肾俞组和心俞组与模型组相比虽有下降的趋势，但无统计学意义。说明电针干预可以改善T2DM大鼠胰岛素抵抗，而以胰俞穴效果最佳。见表3。

表3 干预对大鼠FINS(μU/ml)和HOMA-IR的影响

注：与空白组比较，**P<0.01;与模型组比较，##P<0.01

2.4 各组动物胰岛形态

由封三彩图1～5可见，空白组胰岛面积较大，呈椭圆形，与周围组织分界清楚，胰岛内细胞数量较多，胞质丰富，细胞核呈圆形，大小均匀，居于细胞中央；周围腺泡细胞形态正常,见封三彩图1。模型组胰岛面积缩小，形态不规则，胰岛内细胞数量减少，胞质减少，部分细胞核淡染，个别细胞细胞核异常增大；胰岛周围腺泡细胞体积异常增大，染色浅,见封三彩图2。胰俞组胰岛面积接近空白组，外形近似椭圆，边界不规则，胰岛内细胞数目较多，细胞质减少，细胞核大小均匀且居中，部分细胞核染色浅；胰岛周围腺泡细胞体积增大，染色变浅,见封三彩图3。心俞组胰岛面积大于模型组，但形态欠规则，胰岛细胞数减少，细胞质减少，细胞核大小一致，但染色较浅；胰岛周围腺泡细胞体积增大，染色变浅,见封三彩图4。肾俞组胰岛面积减小，形状近似椭圆，胰岛细胞分布密集，胞质较少，细胞核大小不均；胰岛周围腺泡细胞形态基本正常,见封三彩图5。

3 讨论

糖尿病属于中医学消渴病的范畴，中医很早就对本病有了基本认识，《素问·奇病论》曰:“肥者令人内热，甘者令人中满，故其气上溢转为消渴”,认为过食肥甘厚味是造成消渴病的基本病因。本研究中用高糖高脂饲料喂养动物4周，使其产生糖尿病的发病基础，这与《内经》中消渴的发病机理相类似。

早在唐朝孙思邈《千金翼方》就有“消渴咽喉干,灸胃管下俞三穴各百壮”的记载。孙思邈所谓“胃脘下俞”穴即“胰俞”穴，亦名胃下俞、胃脘下俞、胃管下输三穴聂俞、膵俞(脺俞、下俞、八俞)、内胰俞等[7]。胰俞穴属于经外奇穴，是临床中治疗糖尿病的常用穴。《经穴穴名标准化方案》指出该穴功能和胃化痰、理气止痛,主治胃痛、腹痛、胸胁痛、消渴、咳嗽、咽干和胰腺炎。另据临床报道，胰腺疾病患者通常在胰俞穴处出现压痛、结节、条索等其他阳性反映[8]。胰俞穴与胰腺的生理和病理联系为密切，故而有学者提出将胰俞穴定为胰腺之背俞穴，认为胰俞穴是胰之真气输注之所[9]。

胰俞穴位于第8胸椎棘突下，后正中线旁开1.5寸，解剖层次的浅层分布有T8后支的皮支，深层有T8后支的肌支。人和脊椎动物脊神经呈节段性分布特征，支配内脏的神经节段也按照相应内脏在人体的上下位置对应排列。支配胰腺的传入神经为T8，而胰腺的传出神经分为交感神经和副交感神经，交感神经是由以T8为中心的T5～T11节段神经发出的纤维组成，副交感神经主要是由右迷走神经和少部分左迷走神经组成。胰俞穴对糖尿病的治疗作用与其神经分布特征高度吻合。

本研究选择不同神经节段的胰俞穴、心俞穴和肾俞穴做对比，结果显示心俞组和肾俞组在降低血糖、改善糖耐量、降低胰岛素抵抗和保护胰岛形态方面虽有一定的作用，但效果远逊于胰俞组。其机理有可能是针刺胰俞穴能够更加有效地刺激T8，进而加强胰腺的神经传导通路的兴奋性，并最终对胰腺产生影响。

[1] Intemational Diabetes Federation.IDF Diabetes Atlas-7th Edition[EB/OL].[2015-12-01].http://www.diabetesatlas.org/across-the-globe.html

[2] 于新捷,李雪青.从“水俞五十七处”论治胰岛素抵抗[J].针灸临床杂志,2014,30(11):71-73

[3] 周平南,彭鹏鸣,王蓉娣.针灸治疗新发肥胖2型糖尿病疗效观察[J].针灸临床杂志,2013,29(1):21-23

[4] 张露芬.实验针灸学[M].北京:化学工业出版社,2010:219-220

[5] 梅福荣.0.3%戊巴比妥钠用于大鼠麻醉的方法[J].实验动物科学与管理,2003,20(3):44-45

[6] 洪洁,宁光,王笑微,等.减少样本数的Bergman最小模型技术在胰岛素抵抗综合征中的应用[J].中华内分泌代谢杂志,2000,16(6):358-362

[7] 高珊,李瑞,田环环.胃脘下俞穴的古今研究[J].上海针灸杂志,2014,33(12):1163-1166

[8] 谌剑飞,魏稼.针刺治疗糖尿病的初步研究[J].中国针灸,1983,3(1):1-4

[9] 石锦萍,陈晓莉,钟柏松.胃脘下俞穴与胰腺相关性的探讨[J].中国针灸,1998,18(1):45-46

Electro-acupuncture on T2DM Rats with Points at Different Nerve Segment

HU Xiao-gang1, LI Rui1△, JIA Ning1, TIAN Huan-huan1, MA Yan-jia1, WANG Yue-ying1, CAO Bing-yan2

(1.BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China; 2.XiyuanHospitalAttachedtoChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100091,China)

Objective：To observe the effect of electro-acupuncture on type 2 diabetes mellitus(T2DM) rats with different acupoints, and to provide evidence for clinical acupoint selection for T2DM in acupuncture treatment. Methods:T2DM models were established in rats by high fat and high sugar diet combined with Streptozotocin(STZ) injection, then the rats were randomly divided into the model group, the Xinshu group, the Yishu group, and the Shenshu group. The points of Xinshu, Yishu and Shenshu were stimulated respectively with electro-acupuncture. The fasting blood glucose(FBG), the area under curve(AUC) of OGTT, fasting insulin(FINS), insulin resistance(IR) level, and the morphology of the islets were observed in all groups. Results：①The levels of FBG and AUC decreased significantly in the Yishu group(P<0.05), the changes in the Xinshu group and the Shenshu group were not so obvious(P>0.05).②There is no effect on the level of FINS with electro-acupuncture intervention in rats, and HOMA-IR was remarkably lower in the Yishu group than that in the model group(P<0.01), but there were no obvious changes both in the Xinshu group and in the Shenshu group(P>0.05). ③HE staining: In the model group, the atrophy of pancreatic islets was severe, the islet cells decreased with abnormal morphology; whereas in the Yishu group, the shape of the islets, the cellular morphology and the numbers of the cells were all close to those in the blank group. Conclusion：Point of Yishu with electro-acupuncture can reduce blood glucose, improve glucose tolerance and insulin resistance, and it can protect the shape of the islets in T2DM rats; these effects of Yishu point fit in with the nerve segment theory.

Electro-acupuncture; Yishu point; T2DM;Rats; Nerve segment