围产期山羊肝脏穿刺采样对血常规和肝功能的影响

姚 立，彭 涛，李 姣，刘立志，邢文华，贾杏林，袁安文，刘 磊

(湖南农业大学 动物医学院，湖南长沙 410128)



围产期山羊肝脏穿刺采样对血常规和肝功能的影响

姚 立，彭 涛，李 姣，刘立志，邢文华，贾杏林，袁安文，刘 磊*

(湖南农业大学 动物医学院，湖南长沙 410128)

围产期是反刍动物普通病及传染病高发时期，其最显著的病理特征是能量负平衡。肝脏是能量代谢最重要的器官，肝脏样品的采集在围产期疾病诊断及发病机制研究方面尤为重要。用围产期山羊作为试验动物，采用穿刺活检技术进行肝脏样本采集。标准穿刺活检操作对9头围产期山羊进行70次穿刺取样，结果显示，肝脏采出率为100%，死亡率为0，流产率为0；血常规检查及肝功能检测显示血液学指标及转氨酶无明显异常。说明此法安全可靠，可用于山羊肝脏的活检取样。

穿刺；活检；围产期；山羊；肝脏

围产期一般指产前21 d至产后21 d这段时间[1-2]。围产期母畜由于分娩和启动泌乳对能量需求增加,但干物质采食量反而下降，由此导致了能量负平衡[1,3]。能量负平衡被证实是许多围产期疾病的共同病理学基础。在此情况下，脂肪组织发生剧烈脂肪动员，血液非酯化脂肪酸(NEFA)含量升高。肝脏是能量代谢的主要器官，大量脂肪酸流涌入肝脏，极易引发脂肪肝和酮病等能量代谢紊乱疾病。围产期疾病发病率居高不下，据统计，约30%～50%奶牛受围产期疾病侵扰[4]；围产期疾病还会导致巨大经济损失，不但会引起患病动物生产性能下降甚至死亡，而且会增加饲养成本及治疗费用，据估算，仅一头奶牛因患酮病造成损失即达151～312美元[1,5]。正因为围产期疾病发病率高、危害大，围产期疾病的防控成为世界各国研究的热点。

活检穿刺是在兽医临床有着广泛的应用的样本采集方法，常见的穿刺部位包括胸腔、腹腔、心包、瘤胃及瓣胃以及肝脏等。通过穿刺，可以取得动物体腔内液、病理产物及活组织，对这些病料进行检测可达到诊断目的。肝脏是动物机体物质代谢最重要的器官，肝活检穿刺是弥漫性肝病变组织学诊断中极为重要的一环[6]。穿刺采样获得的肝组织样本可为诊断和治疗肝脏疾病，评价疾病严重性及判断预后提供关键信息。有研究评估了106例犬腹腔镜引导的肝活检穿刺的并发症以及病例康复的情况，结果显示，该法样品采出率以及合格率均为100%，101例术后存活，5例由于肝脏疾病恶化以及预后不良而施行安乐死，表明肝活检是一种有效的低并发症的微创技术，能安全运用于犬凝血障碍性疾病以及晚期肝病的检查[7]。尽管肝活检穿刺在伴侣动物临床得到了广泛应用，但反刍动物，特别是围产期反刍动物的穿刺活检，报道较少，本文对围产期山羊进行肝脏穿刺采样，就穿刺对动物血常规和肝功能的影响进行观察。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验用动物 湖南宁乡县覃英养殖场9只围产期黑山羊，整体状态观察及一般检查无异常。

1.1.2 材料 Mindray DP30便携性兽用B超仪；一次性使用16G半自动活检枪，江苏华星医疗器械有限公司；科德士CP6800电推剪；头孢噻呋钠，湖南农大动物药业公司；酚磺乙胺，中农康畜动物药业公司；Mindray BC-2800血球分析仪；Mindray BS-180全自动生化分析仪；碱性磷酸酶(ALKP)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)检测试剂盒，南京建成生物工程研究所。

1.2 方法

1.2.1 术前检查 穿刺活检前对山羊进行超声检查，观察肝区大小以及胎儿发育情况，根据超声检查结果确定肝脏解剖学位置及形态。采取血液以备血常规及酶活性测定，并记录山羊体温、呼吸和脉搏数。

1.2.2 肝脏穿刺采样 母羊左侧卧保定，用电推剪将右侧壁肝区毛发推净，酒精络合碘酒精依次消毒。向后回拉活检枪顶端发射钮至针基弹簧处于紧绷上膛状态，从倒数第4至第5肋间(第9至第10肋间)与肩关节水平线相交处垂直腹壁皮肤用力刺入(图1)。刺破皮肤后针体与腹壁呈45度角向尾端进针约6 cm(图2)。若针尖插入肝脏会有破空感，应立即停止继续进针。此时轻缓往前推动发射钮至针基弹簧前端，再用力按下发射钮。弹射会使外套针自动前进，迅速包裹内切割针，将肝脏组织切割至内切割针针内凹槽中。完成后将活检枪从山羊体内退出，按压穿刺部位止血，并再次消毒。将采样枪发射钮向后回拉，待针基弹簧再次紧绷上膛，往前轻轻推出切割针，此时可以看到切割下来的肝脏组织暴露在切割针凹槽内(图3)。用无菌镊子将采集的肝脏组织放入细胞冻存管，闪冻于液氮。

图1 活检枪垂直腹壁皮肤插入

1.2.3 术后护理 肌肉注射头孢噻呋钠(5 mg/kg)及酚磺乙胺(2 mL～4 mL)。密切观察活检山羊体态、行为、采食、反刍、粪便和阴道分泌物等是否正常。给山羊正常喂食，尽量避免驱赶、大声呵斥动物，减少应激，限制活动，避免其他损伤。保证栏舍整洁通风，定期消毒。术后1周再次测量山羊生理参数，采取血液进行血常规及酶活性测定。

1.2.4 血液样本的实验室检查 按照Mindray BC-2800血球分析仪说明书进行血常规检查；ALT，AST及ALKP酶活性检测按照试剂盒说明书进行。

1.2.5 数据处理 数据均按平均数±标准差表示，选用Excel 2016对数据进行统计分析。

2 结果

按照所处围产期阶段，对9只山羊共进行70次肝脏穿刺取样，每只山羊穿刺7～9次。肝脏采出率为100%，流产率为0，死亡率为0。其中1、3、6、9号羊山羊产仔1头，2号和5号产仔2头，8号羊产仔数为3头。4号羊产仔有弱胎现象，8号羊产仔有一只呈软蹄表现，经鉴定，为饲料配比异常，排除采样因素。

图2 刺破皮肤后呈45°插入肝脏组织，进针约6 cm

图3 穿刺后留在切割槽内的肝脏组织

山羊体温、呼吸和脉搏数监测结果见表1。结果显示，山羊穿刺后体温高于术前(P<0.05)，呼吸和脉搏数术前术后差异不显著。所有生理参数均在正常参考值范围内，表示肝活检采样未明显影响山羊的生理功能。

表1 山羊的体温呼吸脉搏监测

注：* 表示与穿刺前相比差异显著(P<0.05)。

Note:* indicates a significant difference compared with before puncture(P<0.05).

山羊血常规检测结果如表2所示。穿刺后山羊白细胞相关参数(WBC、LYPM、MID和GRAM等)和红细胞相关参数(RBC、MCV、HCT和HGB等)与产前相比差异均不显著，提示肝活检穿刺采样未影响血液的组成和功能。

表2 山羊血常规测定结果

山羊血清酶活性检查结果见图4。结果显示，山羊血清ALT和AST等指标术前术后差异不显著，且都在正常参考值范围内，提示肝脏并未受到实质性损伤。

图4 山羊术前和术后血清ALT和AST活性

3 讨论

本研究对9头围产期山羊进行共70次肝脏穿刺采样，肝脏组织采出率为100%，且未发生死亡流产等情况；术前术后山羊的生理参数未见明显变化；血常规和血清酶学检测显示穿刺前后无明显差异。这些结果充分表明，山羊围产期肝脏穿刺采样是一种安全可靠的肝活检组织样本获得方法。

采样前用B超对山羊肝区扫查十分必要，有助于明确肝区范围、胆囊解剖学位置及肝内大血管分布，以避开门静脉，为采样操作划定合理的穿刺区域。由于妊娠山羊膨大的子宫会压迫腹部器官，选择穿刺部位时宜靠近头端，不宜靠后。多次实践表明，在第9肋与第10肋间与肩关节水平线交点处进针，对肝损伤较少，不会伤及肝区大血管引起大量内出血。采样后山羊红细胞数及血红蛋白含量较之采样前有所降低但差异不显著，体温略升高，加之白细胞总数处于高位，提示穿刺已对肝脏造成一定量出血损伤及炎症。事实上，出血是肝穿刺活检最常见的并发症之一[8]。因此，术前1 h～2 h可以选用100 g/L CaCl2等提高血液凝固性的药物预防出血，或在术后肌注促凝血的药物如止血敏和维生素K1等治疗出血，此外术后的抗菌消炎也十分必要。但活检穿刺后未见血清ALT和AST活性升高，提示采样并未造成肝实质的损伤，未累及肝脏功能。

同为反刍动物，山羊和奶牛在围产期有着相似的生理特征性改变。首先，围产期山羊和奶牛有类似的能量代谢特点：两者产后都存在脂肪动员[1,3]，血液NEFA浓度均高于产前，特别地，产后血液β-羟丁酸含量显著高于产前[9]。再次，与奶牛类似，围产期山羊也存在氧化应激，随着妊娠进行，MDA浓度逐渐升高，而血液总抗氧化能力逐渐降低[10]。特别地，MDA含量在山羊产后初期达到峰值[11]。此外，如本研究所示，围产期山羊体内也存在炎性反应，但引起炎症反应的机制暂不明确。根据围产期奶牛的研究[12]可以推断，炎症产生可能与围产期免疫功能障碍、能量代谢紊乱和氧化应激有关。这些围产期共同的生理特征性改变提示，用山羊替代奶牛作为实验动物来研究围产期疾病发病机制具有一定科学依据。围产期奶牛疾病的研究瓶颈之一在于样本难以收集，特别是肝脏组织样本。因此，本研究建立的山羊肝组织穿刺采样方法对围产期反刍动物能量代谢性疾病的研究可能具有重要意义。

通过对9头围产期山羊进行70次肝脏活检穿刺，结果显示，肝脏样本采出率为100%，动物死亡率为0，流产率为0；血液实验室检测显示采样前后各指标均无明显异常。这些结果表明此法安全可靠，适用于山羊围产期样本采集，也可为围产期奶牛肝脏活检样本采集提供参考。

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Effect of Liver Biopsy on Blood Routine and Liver Function in Peripartum Goats

YAO Li,PENG Tao,LI Jiao,LIU Li-zhi,XING Wen-hua,JIA Xing-lin,YUAN An-wen,LIU Lei
(CollegeofVeterinaryMedicine,HunanAgriculturalUniversity,Changsha,Hunan，410128，China)

Peripartum period is a time when common diseases and contagious diseases of ruminants often take place,and its most prominent pathological feature is the negative energy balance (NEB).The liver is the major organ for energy metabolism,and thus the collection of liver samples is of particularly importance for the diagnosis and study of pathogenesis of perinatal diseases.In the present study,needle biopsy was employed for liver tissue sampling in peripartum goats.Standard operation of needle puncture was applied to 9 peripartum goats,and 70 times of biopsy were accomplished in total.Results showed that liver samples were taken successfully during each puncture with mortality rate and abortion rate both at 0%.Blood routine test and liver function test suggested no significant difference before and after biopsy.Those data indicated that needle biopsy was a reliable and safe method for collection of liver samples in peripartum goats,and would facilitate the research of perinatal diseases in ruminants.

needle puncture; biopsy; perinatal period; goat; liver

2016-11-14

国家自然科学基金青年基金项目(31502135)；湖南省教育厅科研项目(16B124)；湖南农业大学引进人才基金(15YJ05)；湖南农业大学2016年大学生科技创新基金项目(2016ZK17)

姚 立(1993-)，男，江西上饶人，硕士研究生，主要从事动物营养代谢病与小动物疾病研究。*通讯作者

S852.2

B

1007-5038(2017)06-0128-04