针刺 内关穴对慢性心衰小鼠心功能及炎性因子的影响

郭 颖，孙兴华，武文鹏，孙远征，祝鹏宇，赵广然

（黑龙江中医药大学附属第二医院，哈尔滨 150001）

针刺 内关穴对慢性心衰小鼠心功能及炎性因子的影响

郭 颖，孙兴华，武文鹏，孙远征*，祝鹏宇，赵广然

（黑龙江中医药大学附属第二医院，哈尔滨 150001）

目的 研究针刺内关穴对慢性心力衰竭小鼠心功能及炎性因子的影响。方法 动物分为正常组、模型组、针刺组，每组各15只，腹腔注射盐酸异丙肾上腺素注射液制备慢性心力衰竭模型。针刺组每日上午行针刺干预，针刺干预结束后，间隔30 min予以腹腔注射盐酸异丙肾上腺素注射液，连续针刺干预4周。正常组和模型组只予捆绑固定，不进行任何治疗。采用多普勒超声检测心功能；采用酶联免疫吸附法（ELISA）进行测定血清细胞因子IL-1β、IL-10、TNF-α含量。结果 与模型组比较，针刺组在LVEDD、LVESD呈降低趋势，差异具有统计学意义（P ＜0.01）；与模型组比较，针刺组在LVEF、LVFS呈升高趋势，差异具有统计学意义（P ＜0.01）。与模型组比较，针刺组小鼠血清IL-1β、TNF-α含量均明显降低，差异具有统计学意义（P ＜0.01）。与模型组比较，针刺组小鼠血清IL-10含量呈升高趋势，差异具有统计学意义（P ＜0.01）。结论 针刺内关穴能够增加慢性心衰小鼠LVEDD和LVESD，从而改善心室重塑；降低LVEF和LVFS，改善心功能；还能提高血清中IL-10含量，抑制炎性因子的表达；降低促炎因子IL-1β、TNF-α含量，减缓炎性反应进程。

慢性心力衰竭；心功能；炎性因子；针灸疗法；穴，内关

心力衰竭，又称充血性心力衰竭，是心脏疾病发展的终末期阶段，是各种心脏疾病导致心功能不全的一种综合征。分为急性心力衰竭（AHF）和慢性心力衰竭（CHF）。慢性心力衰竭以外周血流分布异常和神经内分泌激活为特征，临床上以左心衰较为常见，多见于冠状动脉粥样硬化性心脏病、高血压性心脏病、二尖瓣及主动脉瓣关闭不全等。以往研究[1-3]表明，中医药可以通过多层次、多水平的作用机制改善慢性心力衰竭，在改善心室重构、逆转心衰进程等方面有良好的作用。本研究旨在观察针刺内关穴对慢性心衰小鼠心功能及其炎性因子的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物 清洁级雄性小鼠45只，4周龄，体质量（22.56±1.83）g，由黑龙江中医药大学药物安全性评价中心提供，合格证编号为：SCXK（黑）2013004。清洁级动物实验室，正常光照和温控，相对湿度45%～65%。自由进食、饮水。

1.2 试剂与仪器 盐酸异丙肾上腺素注射液（上海禾丰制药有限公司产品）、IL-1β酶联免疫试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）、IL-10酶联免疫试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）、TNF-α酶联免疫试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）、“华佗牌”一次性Φ0.25 mm×13 mm针灸针（苏州医疗用品厂有限公司产品）、电子秤（湖南仪器仪表总厂天平厂产品）、低温高速离心机（美国Biorad公司产品）、VEvo2100彩色多普勒超声仪（Visual Sonics Inc公司产品）。

1.3 模型建立、分组与干预方法 动物随机分为3组，即：正常组、模型组、针刺组，每组各15只。模型组和针刺组参照文献[4]，制备小鼠慢性心衰模型。连续腹腔注射盐酸异丙肾上腺素注射液，每次注射3 mg/kg，注射2次/d，连续4周。正常组，每日腹腔注射等剂量的生理盐水。针刺组每日上午行针刺干预。内关穴参照中国针灸学会实验针灸分会制定的《实验动物穴位图谱》取小鼠内关穴，采用一次性Φ0.25 mm×13 mm针灸针直刺小鼠双侧内关穴，进针约3 mm，留针30 min，期间每间隔10 min行小幅度捻转行针。针刺干预结束后，间隔30 min予以腹腔注射盐酸异丙肾上腺素注射液。连续针刺干预4周。正常组和模型组只予捆绑固定，不进行任何治疗。

1.4 检测指标 心功能检测：戊巴比妥钠50 mg/kg腹腔注射麻醉小鼠，小鼠仰卧固定于鼠板，于左前胸锁骨下至肋骨下缘备皮。多普勒超声经胸前壁测定小鼠左心结构及功能，在左室长轴像引导下，测量左心室舒张末径（LVEDD）、左心室收缩膜径（LVESD）、左心室射血分数（LVEF%）、左室内径缩短率（LVFS%）进行心功能分析。血清炎性因子含量测定：小鼠腹主动脉取血5 mL，注入试管中，摇匀，3 000 r/min离心20 min，分离血清，均分3份。采用酶联免疫吸附法（ELISA）进行测定血清细胞因子IL-1β、IL-10、TNF-α含量，具体操作严格按照试剂盒说明书进行。

1.5 统计学分析 用SPSS 18.0软件包进行统计分析，计量资料以均数±标准差(x±s)表示。多个样本均数比较采用单因素方差分析，方差齐时用LSD法；方差不齐时用Tamhane’s T2检验。

2 结果

2.1 各组小鼠心功能比较 见表1。

2.2 各组小鼠血清IL-1β、IL-10、TNF-α含量比较 见表2。

表1 各组小鼠心功能比较(x±s, n=15)

表2 各组小鼠IL-1β、IL-10、TNF-α比较(x±s, n=15) pg/mL

3 讨论

内关穴是治疗心胸疾病的经典穴和首选穴[5]。内关穴位手厥阴经治络穴，还是八脉交会穴，通于阴维脉。“内关”首载于《灵枢·经脉》“手心主之别，名曰内关。”《难经·二十九难》载：“阴维为病苦心痛。”内关穴的主治病症为“心系实则痛，虚则为烦心。”心包经与三焦经相表里，针刺内关穴能够通三焦、调诸脏，为内关穴治疗心胸疾病提供了理论依据。以往研究[6]表明，电针内关穴能显著改善心肌缺血大鼠心肌缺血状态，改善心肌细胞的损伤和细胞凋亡，升高血清中PGF1α含量，降低血清中TXB2含量，抑制酸敏感离子通道开放。电针内关穴能通过抑制心肌细胞β1-AR的过度激活延缓高血压-心肌肥厚的进程[7]。研究[8]显示，针刺内关穴能够通过“内关-心脏神经投射的同源细胞”调节心脏的功能活动，通过调节心脏局部神经递质作用改善心肌肥厚。本实验通过腹腔注射盐酸异丙肾上腺素注射液建立了慢性心衰模型，目前是比较公认的建模方法。本组研究结果显示，通过腹腔注射盐酸异丙肾上腺素注射液制备慢性心衰小鼠模型，模型组造模后小鼠LVEDD和LVESD增大，LVEF和LVFS降低，说明小鼠心功能受损；针刺内关穴干预能够缩短慢性心衰小鼠的LVEDD和LVESD，逆转心肌重构，进而改善心功能。

细胞因子是特异性免疫和非特异性免疫反应的蛋白质介质，在抗原刺激的免疫应答及炎症反应过程中由多种细胞产生，并同相应靶细胞的高亲和力受体结合后在局部或全身发挥复杂的生物学功能。心肌缺血和再灌注导致心肌组织细胞产生损伤级联反应，可能是启动或触发心肌细胞死亡的主要机制。炎性反应是动脉粥样硬化形成的关键因素，从启动期白细胞的募集到不稳定斑块的碎裂，均有炎症反应的参与。炎症细胞产生的细胞因子是造成心肌细胞死亡的主要原因。心肌缺血后，许多免疫细胞及细胞因子参与了免疫应答和调节，许多细胞因子作为启动因素诱导心肌缺血后的炎性反应，这些细胞因子形成网络，影响着心肌缺血损伤的发展及预后。其中包括白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等。IL-1β是一个在免疫和炎性反应中起着多种生物活性的细胞因子，心肌缺血后IL-1βmRNA和蛋白在心肌缺血后表达增加，表明IL-1β参与了心肌缺血损伤同修复过程。研究[9]提示，TNF-α水平的高低与心室泵血功能下降和心肌重构有密切关系。本组研究结果显示，针刺内关穴能够有效提高血清IL-10含量，说明针刺内关穴能够起到抑制炎性因子的作用；针刺内关穴能够有效降低血清中IL-1β、TNF-α含量，说明针刺内关穴能够降低心肌组织及血浆促炎因子IL-1β、TNF-α含量，减缓炎性反应进程。

综上，针刺内关穴能够增加慢性心衰小鼠LVEDD和LVESD，从而改善心室重塑；降低LVEF和LVFS，改善心功能。同时，针刺内关穴还能提高血清中IL-10含量，抑制炎性因子的表达；降低促炎因子IL-1β、TNF-α含量，减缓炎性反应进程。

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[5]王悦, 陈波. 针刺内关穴治疗冠心病心绞痛的研究概况[J].中医药临床杂志, 2016, 28(6): 889-891.

[6]王树东, 董宝强, 陈文娜, 等. 电针“内关”穴对心肌缺血大鼠TXB2,PGF1α和心肌形态影响的实验研究[J]. 辽宁中医杂志, 2015, 42(2): 413-415.

[7]辛娟娟, 高俊虹, 刘军, 等. 电针“内关穴”对原发性高血压大鼠心肌肥厚的影响及其作用机制[J]. 中医杂志, 2016, 57(16): 1406-1409.

[8]朱广为, 吴松, 李佳. 电针内关穴对心肌肥厚大鼠儿茶酚胺类神经递质的保护作用[J]. 上海针灸杂志, 2016, 35(7): 881-885.

[9]徐菲拉, 颜梅, 何忠平，等. 附子与人参配伍对心衰大鼠IL-10,TNF-α表达水平的影响[J]. 中华中医药学刊, 2016, 34(5): 1233-1236.

Effect of acupuncture atN eiguan(PC 6) on cardiac function and infl ammatory factor of chronic heart failure mice

GUO Ying, SUN Xinghua, WU Wenpeng, SUN Yuanzheng*, ZHU Pengyu, ZHAO Guangran
(The Second Affi liated Hospital of Heilongjiang University of Chinese Medicine, Harbin 150001, China)

Objective To study the effect of acupuncture at Neiguan (PC 6) on cardiac function and infl ammatory factor of chronic heart failure m ice. Methods Rats were random ly divided into regular group, model group and acupuncture group, 15 m ice in each group. To make chronic heart failure model by intraperitoneal injection of isopropyl adrenaline hydrochloride. Acupuncture group was treated w ith acupuncture at the end of each day. After the end of acupuncture intervention, 30m in was injected intraperitoneally w ith isoprenaline hydrochloride injection for 4 weeks. The normal group and model group were treated only by binding and w ithout any treatment. Cardiac function were determined by Doppler ultrasound. Content of IL-1β, IL-10, TNF-α w ithin serum cytokine were determ ined by ELISA. Results Compared w ith model group, LVEDD and LVESD has a decreasing tendency in acupuncture group and the difference was statistically signifi cant (P<0.01); Compared w ith model group, LVEF and LVFS has a increasing tendency in acupuncture group and the difference was statistically signifi cant (P<0.01); Compared w ithmodel group, IL-1β and TNF-α were markedly decreased in acupuncture group and the difference was statistically significant (P <0.01); Compared w ith model group, the content of IL-10 has a increasing tendency in acupuncture group and the difference was statistically signifi cant (P <0.01).Conclusion Acupuncture on Neiguan (PC 6) point can increase LVEDD and LVESD of chronic cardiac failure rats and improve ventricular remodeling; Decrease LVEF and LVFS to improve cardiac function; The therapy can increase content IL-10 and decrease expression of infl ammatory factor; Decrease content of IL-1β, TNF-α and slow down course of infl ammatory reaction.

chronic cardiac failure; cardiac function; infl ammatory factor; acupuncture; point, Neiguan (PC 6)

R245.3

A

2095-6258（2017）03-0362-03

��辑：张海洋

2016-10-21）

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.03.006

黑龙江中医药大学科研基金项目（面上项目：2014XX）；国家中医药管理局全国名老中医药专家传承工作室建设项目（孙远征名老中医工作室；国中医药人教发[2014] 20号）。

郭 颖（1985 -），女，博士研究生，主要从事针灸治疗神经系统疾病的临床和基础研究。

*通信作者：孙远征，男，主任医师，教授，博士研究生导师，电话-（0451）87093371，电子信箱- sunyuanzheng @163.com