马钱子传统炮制方法不同炮制品中士的宁和马钱子碱含量比较研究

刘君

摘要：目的 比较马钱子生品、油炸品、油炸煨制炮制品中士的宁和马钱子碱的含量。方法 采用HPLC法测定。结果 马钱子油炸品与生品比较，马钱子碱降低22.5%，士的宁降低21.0%，油炸煨制品与生品比较马钱子碱降低35.5%，士的宁降低41.1%，与油炸品比较马钱子碱与士的宁分别降低16.8%、25.4%。结论 油炸煨制炮制法可以在油炸法的基础上，进一步的降低士的宁与马钱子碱的含量。

关键词：马钱子；油炸法；炮制；含量测定

马钱子为传统中药，始载于《本草纲目》，其药性寒，苦，有大毒，具有通络止痛，散结消肿之功效。作为散血热，消肿，止痛的要药，临床用于治疗风湿顽痹，麻木瘫痪，跌打损伤和痈疽肿痛等疾病[1]。由于马钱子有剧毒，限制了其在临床上的应用，临床上使用的马钱子基本上都要经过炮制。炮制后不仅降低了毒性，而且扩大了临床应用。

马钱子的炮制方法在明代有豆腐制、油炸等；在清代有用甘草制、用固体辅料炒等方法。现代多采用砂烫法和油炸法。有研究表明，油炸法和砂烫法二者在减毒及增效方面有较大的差别，油炸法的制品较砂烫法毒性更低而且抗炎及镇痛作用更强，故认为油炸法值得深入地研究[2]。

在部分地区一直沿用油炸法，并有在油炸后以面裹煨制的炮制方法，在民间应用多年，被认为毒性低，疗效稳定可靠。本实验采用HPLC法测定了马钱子生品、油炸品、及油炸后煨制炮制品中士的宁及马钱子碱的含量，以此考察炮制后马钱子主要毒性成分的变化。

1 仪器与材料

1.1仪器 高效液相色谱仪（四元泵，美国 Agilent 1100 Series，二极管阵列检测器），Licrospher C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）。

1.2材料 马钱子药材购于广东省，经沈阳药科大学中药学院王延年副教授鉴定为马钱科植物马钱（Strychnos nux-vomica L）的干燥成熟种子。士的宁与马钱子碱对照品均由中国药品生物制品检定所提供。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：：流动相： 乙腈-0.01 mol/L庚烷磺酸钠溶液与0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液的等量混合液（10%磷酸调pH2.8）（21∶79）；检测波长：260 nm；流速：1.0 ml/min；进样量：10 μL 柱温：25 ℃。

2.2生马钱子粉 取生马钱子，粉碎，过三号筛，备用。

2.3油炸马钱子 取市售的麻油，倒入铁锅中加热至235 ℃，投入马钱子炸至老黄色为度（约3 min），取出沥尽油，晾干即得[3]。粉碎过三号筛，备用。

2.4油炸煨制马钱子 取以上油炸马钱子粉，以湿面包裹，投入定量预热的麦麸中，煨制1 h，取出，剥去面皮备用。

2.5供试品溶液的制备 取以上三种马钱子粉，各约0.6 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氢氧化钠试液3 ml，混匀，放置30 min，精密加入三氯甲烷20 ml，密塞，称定重量，置水浴中回流提取2 h，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，分取三氯甲烷液，用铺有少量无水硫酸钠的滤纸滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液3 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀即得[4]。

2.6方法学考察

2.6.1标准曲线制备 对照品溶液的制备：取士的宁对照品6mg，马钱子碱对照品5 mg，精密称定，分别置10 ml量瓶中，加三氯甲烷适量使溶解并稀释至刻度，摇匀[5]。分别精密量取2 ml，置同一10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。（每ml含士的宁0.12 mg，马钱子碱0.1 mg）

分别精密量取对照品溶液1.0，3.0，5.0，8.0，10.0 ml，置10 ml量瓶中，分别加甲醇至刻度，摇匀。各吸取10μL进样，计算出峰面积（M）与质量浓度（X）的线性回归方程，马钱子碱的回归方程为y=14835x-98235；士的宁的回归方程为：y=19486x-15870。马钱子碱在0.1～1.0 μg、士的宁在0.12～1.2μg范围内，峰面积与质量浓度呈良好的线性关系。

2.6.2精密度试验 精密吸取以上对照品溶液各10 μL，分别重复进样6次，按以上色谱条件测定峰面积。结果：马钱子生品、油炸品、油炸煨制品中马钱子碱RSD%分别为1.56%、1.87%、1.99%，士的宁RSD%分别为2.1%、1.88%、1.74%，表明方法的精密度良好。

2.6.3稳定性试验 分别取三种样品的同一供试品溶液分别放置0、2、4、6、8 h，进样检测，分别测定峰面积，结果：马钱子生品、油炸品、油炸煨制品中马钱子碱的RSD%分别为1.45%、1.98%、1.88%，士的宁的RSD%分别为1.54%、1.96%、2.03%，表明供试品溶液在8h内稳定性良好。

2.6.4重复性试验 按以上方法分别制备三种供试品各6份，分别进样10 μL，测定峰面积，结果：马钱子生品、油炸品、油炸煨制品中马钱子碱RSD%分别为1.78%、1.90%、1.73%，士的宁RSD%分别为1.96%、1.43%、1.62%，表明方法的重复性良好。

2.6.5加样回收率试验 精密称取已知含量的供试品6份，分别精密加入士的寧及马钱子碱对照品适量，按供试品制备方法制备后，按以上方法进行测定，计算回收率。结果如下：马钱子生品马钱子碱平均回收率（%）为96.7%，RSD为1.31%；士的宁的平均回收率为98.4%，RSD为1.71%。马钱子油炸品马钱子碱平均回收率（%）为97.4%，RSD为1.89%；士的宁平均回收率（%）为98.4%，RSD为1.92%。马钱子油炸煨制品马钱子碱平均回收率（%）为98.3，RSD为2.17%。；士的宁平均回收率（%）为98.2，RSD为1.19%。

2.6.6马钱子生品及不同炮制品含量测定结果 生品：马钱子碱平均含量1.38%；士的宁平均含量2.14%。油炸品：马钱子碱平均含量1.07%，士的宁平均含量1.69%，降低比率分别为22.5%，21.0%。油炸煨制品：马钱子碱平均含量0.89%，士的宁平均含量1.26%，降低比率分别为35.5%，41.1%。

3 讨论

结果表明，马钱子油炸品与生品比较，马钱子碱降低22.5%，士的宁降低21.0%，油炸煨制品与生品比较马钱子碱降低35.5%，士的宁降低41.1%，与油炸品比较马钱子碱与士的宁分别降低16.8%、25.4%。表明马钱子油炸煨制法与生品比较可以明显降低马钱子碱与士的宁的含量；油炸煨制法与油炸法比较也可以降低士的宁与马钱子碱的含量。

马钱子的炮制方法传统为油炸法，药典采用砂烫法。有研究表明，马钱子油炸法与砂烫法炮制品中马钱子碱与士的宁的含量差别不大，故二者区别也不大，但也有研究表明，二者在减毒及增效方面有较大的差别，油炸法的制品较砂烫法毒性更低而且抗炎及镇痛作用更强，故认为油炸法值得深入地研究。

目前，油炸法在民间应用仍然比较广泛，并有用油炸后再煨制去油再使用的方法，本研究对马钱子的生品、油炸炮制品、油炸煨制品中士的寧和马钱子碱的含量进行了测定，以比较生品和炮制品、以及二种炮制品中毒性成分的含量，初步的探讨不同的炮制方法对其毒性的影响。结果表明：油炸煨制炮制法可以在油炸法的基础上，进一步的降低士的宁与马钱子碱的含量，至于油炸煨制后马钱子毒性及治疗作用是否有所改变有待于进一步的研究。

参考文献：

[1]金芝兰，潘金火.炮制和配伍对马钱子减毒效应的研究[J].现代中药研究与实践，2009，23（5）：76-79.

[2]蒋以号，杨武亮.HPLC法测定马钱子及炮制品中士的宁和马钱子碱的含量[J].中国中药杂志，2002，27（12）：899-901.

[3]苏友新，郑良朴.HPLC法测定复方马钱子总碱凝胶液中士的宁和马钱子碱含量[J].福建中医药，2012，43（5）：51-52.

[4]那微，张清波.HPLC法测定骨筋丸系列品种中马钱子碱和士的宁[J].中成药，2012，34（4）：759-762.

编辑/成森