猪笼草组织培养

廖伟+王胜男+刘勤云

[摘 要] 本实验选用攀枝花常见的猪笼草幼嫩茎和幼嫩叶柄为外植体进行组织扩繁研究，探究猪笼草组织培养各阶段的理想培养基成分。结果表明，猪笼草在1/2MS+ 6-BA1.0mg/L +NAA0.1mg/L培养基中培养2-3周生长的幼芽最多，效果最好。以1/2MS+ 6-BA2.2mg/L +NAA0.1mg/L培养基为增殖培养基，其增殖率最高。而理想的生根培养基为1/4MS+ 6-BA0.1mg/L +NAA0.5mg/L，培养3-4周后生根率能达到94%。

[关键词] 猪笼草，培养基，细胞分裂素，萘乙酸

[中图分类号] S682 [文献标识码] A [文章编号] 1003-1650（2017）05-0061-02

猪笼草是多年生草本食虫植物，又名食虫草，属于猪笼草科（Nepenthaceae）猪笼草属（Nepenthes）。有1个属，85个种[1]，起源于亚洲东南部、马达加斯加岛及澳大利亚.其中大多数的种分布于苏门答腊岛和婆罗洲[2]，属于热带食虫植物，其拥有一个独特的吸取营养的器官——捕虫笼，捕虫笼呈圆筒形，下半部稍膨大，笼口上具有盖子，因其形状像猪笼而得名。

猪笼草叶片的构造比较复杂，分为叶身，卷须和叶柄。其卷须尾部扩大并向上反卷形成瓶状的捕虫笼，可捕食幼小的昆虫。猪笼草的花序为总状，开有紫色或绿色小花，捕食昆虫的工具是叶顶的瓶状体。瓶状体的瓶盖复面能分秘香味，引诱昆虫。利用光滑的瓶口，使昆虫滑落瓶状内，昆虫被瓶底分泌的液体淹死，并被分解为对猪笼草生长有用的营养物质，逐渐消化吸收。

就目前所发现的猪笼草的品种而言，其具有较高的药用价值和观赏价值。因而猪笼草受到大多数人喜爱。由于猪笼草具有很高的价值，市场对猪笼草的需求量也在日益增加，但猪笼草种子发芽率极低，主要采用扦插繁殖 [3] ，难以满足市场需求，需要寻求一种快速繁殖的方法，才能满足市场的需求。

1 实验方案

选用攀枝花本地1-2年生的猪笼草幼苗茎段，首先用自来水反复冲洗，冲洗中可加适量的洗衣粉，洗去茎，叶上的泥沙。去除叶片，在超净工作台上用75%的酒精进行20-30S浸泡消毒，之后立即用无菌水冲洗2-3次，然后用0.1%的升汞溶液消毒8-10min，然后无菌水冲洗4-5次，切除茎段与消毒液接触面，每个小茎段保留1-2个芽点。将处理好的茎段接种到1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1gm/L的培养基上，每5-6天跟换一次新的相同培养基，减少褐化。大概2周后长出侧芽，切取带有1-3个节点的侧芽作为外植体接种到设置好不同激素配比的培养基中进行培养实验。

培养基筛选：基本培养基为1/2MS+6-BA+NAA，生根培养基选用 1/4MS+6-BA+NAA，PH均为为5.8。然后分别用不同浓度配比的6-BA和NAA对不同阶段分别处理。每种激素浓度配比接种30个外植体，

2 结果与分析

2.1 不同浓度6-BA对芽增殖的影响

在附加浓度分别为1.0mg/L、1.5 mg/L、1.8mg/L、2.0 mg/L、2.2mg/L、2.5mg/L以及3.0mg/L的6-BA培养基上，由表2.1可得，都可以使外植体增殖，只是增殖率不同。随着6-BA浓度的增加，增殖率增加。当6-BA浓度为2.0mg/L时，最高到达270%。

2.2 不同浓度NAA对芽增殖的影响

在附加浓度分别为0.01 mg/L、0.05 mg/L、0.08mg/L、0.1 mg/L、0.12 mg/L、0.15mg/L以及0.2mg/L的NAA培养基上，由表2.2可得，都可以使外植体增殖，只是增殖率不同。随着NAA浓度的增加，增殖率增加。当NAA浓度达到0.1mg/L时增殖率达到最高243%，随着NAA浓度进一步增加，增殖率反而降低。

据表2.1和表2.2数据可以看出，猪笼草芽增殖培养的基本培养基与NAA和6-BA的理想组合为：1/2MS+6-BA2.2mg/L+NAA0.1gm/L

2.3 不同激素浓度配比对芽增殖的影响

选取带有2-3个节点的侧芽，使用相同的方法接種到不同激素配比的培养基上，每周记录一次芽增殖数目，培养4周左右增殖数达到最大。混合激素培养基培养的外植体比单一激素培养的外植体生长较快，长势较好，增殖倍数明显增加。据表2.3数据显示，当培养基激素配比为1/2MS+6-BA2.2mg/L+NAA0.1gm/L时最适合芽的继代培养，其增殖率最高达到323%。

2.4 不同浓度的生长素对生根培养的影响

选取长度为2-3cm，长势较好的继代培养丛生芽，接种到1/4MS+6-BA0.1mg/L+NAA培养基上，添加不同浓度的NAA进行培养，培养3-4周后，绝大部分均能长出幼根。幼跟刚长出是为乳白色，大约一周后长出黑色须根。据表3.4数据显示，随着NAA浓度的不断增加，新生跟的数量也在增加，当NAA浓度达到0.5mg/L时生根数和生根率达到最大。随着NAA浓度进一步增加，生根数和生根率反而降低。因此可选用1/4MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5gm/L作为理想的生根培养基。

2.5 移栽

当幼跟长至2.0cm以上时，将培养箱中的幼苗转移到自然光照下炼苗，炼苗周期为1-2周，再打培养瓶盖炼苗2-3天，然后用镊子从培养瓶中小心取出幼苗，放入盛有无菌水的大烧杯中，轻轻洗去跟部附着的残留培养基，但一定不要对根系造成伤害，根系出现损害会影响成活率。野生猪笼草能适应于各种生长基质，而人工栽培时宜选用疏松肥沃、排水透气性好、微酸性的混合基质[4]。所以我们选用由沙和珍珠岩各半混合成的基质进行移栽，注意保持水分、进行适当的遮荫和保温处理，成活率可达85%以上。

3 结论与讨论

3.1 结论

猪笼草幼茎作为离体培养材料，利用组织培养技术，大量获取植株国类外的研究均不完整，本实验初步探讨了猪笼草组织培养各阶段培养基成分，利用实验结果可以在短期内获得大量优质植株。实验表明，影响猪笼草组织培养的因素很多，但是首先要控制的就是污染情况，在控制污染率的情况下，不同激素浓度配比对猪笼草幼茎生长也有较大的影响，本次实验初步探究了6-BA和NAA不同浓度配比对培养的影响。添加不同浓度NAA能够获得不同情况的增殖率，并且在与6-BA配比的使用情况下增殖效果更佳。通过实验得出，诱导幼芽生长的理想激素配比为6-BA1.0mg/L +NAA0.1mg/L且1/2MS比MS诱导效果更好。而6-BA和NAA混合使用，对猪笼草芽的增殖率提高也有明显效果，芽增殖效果最好的培养基为1/2MS+6-BA2.2mg/L +NAA0.1mg/L。而生根效果最理想培养基为1/4MS+6-BA0.1mg/L +NAA0.5mg/L生根率最高能达到94%

3.2 讨论

当前世界花卉产业发展迅速，人们对于花卉的需求也越来越高。猪笼草因具有独特的捕虫笼，因其可爱、独特的外形深受盆栽市场偏爱，猪笼草在现代生活当中，其可以算是一种装饰性、观赏性能非常强的一种植物，适合做吊盆装饰家居。吊挂在走廊、室内窗边、或者庭院的小树上，象征着无忧无虑美好的生活。而且猪笼草茎叶均可入药，对于感冒咳嗽，甚至是高血压、糖尿病都有一定疗效。但用种子来繁殖猪笼草并不容易。因为猪笼草是雌雄异株的植物，要猪笼草结种子，必须要拥有两种性别的植株。然而，雌性的猪笼草数量较少，因此少量种植的栽培者不易使猪笼草结出种子。所以利用植物组织培养技术使猪笼草大量快速的繁殖具有很好的研究意义

本实验在试验期间出现明显的褐变现象，谢怡青，谢雄辉等人利用多次转瓶缩短转瓶周期，有效的降低了褐变现象[5]。此次实验使用6-BA与NAA初步探究了猪笼草培养各阶段的培养基，如需进一步探究则需再使用其他激素，如ZT，IAA，2，4-D等，且还应更加细化激素浓度梯度，从而寻找最适培养基成分。除了激素影响外，还有如外植体取材部位、外植体年份、培养箱培养温度、光照强度、光照时长、湿度、各种材料处理方法等各方面都对猪笼草生长有待探究。

参考文献

[1]Clark C.A Guide to the Pitcher Plants of Peninsula Malaysia[M].Borneo：Natural History Publications，2002.

[2]Mokkamul P，Chaveerach A，Sudmoon R，et a1.Species Identification and Sex Determination of the Genus Nepenthes[J].Pakistan Journal of Biological Sciences，2007，10（4）：561—567.

[3]王清連.植物组织培养[M].北京：中国农业出版社， 2002.

[4]徐迟默.猪笼草[J].热带农业科学，2003.23（5）.

[5]谢怡青，谢雄辉，丘亮伟，黄愉光.猪笼草组培快繁技术研究[J].广西农业科学，2007.28（2）