不同口蹄疫疫苗免疫效果及检测方法评估

俞 涛 聂文军

(南京市浦口区畜牧兽医站,江苏南京 211800)

不同口蹄疫疫苗免疫效果及检测方法评估

俞 涛 聂文军

(南京市浦口区畜牧兽医站,江苏南京 211800)

为更好地了解猪口蹄疫O型合成肽疫苗与猪口蹄疫O型灭活疫苗的免疫效果与合理的检测方法，浦口区兽医站在某猪场进行了此次试验。试验猪分3组，分别注射不同厂家生产的猪口蹄疫O型合成肽疫苗、和猪口蹄疫O型（OZK/93株+OS/99株）灭活疫苗，并采用猪O型口蹄疫VPI抗体检测试剂盒、口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒和正向间接血凝试验（HI）分别对使用上述口蹄疫苗免疫效果进行检测。结果表明，猪注射口蹄疫O型合成肽疫苗后，用猪O型口蹄疫VPI抗体检测试剂盒检测，抗体阳性率达到100%；用正向间接血凝和液相阻断ELISA方法检测不到注射合成肽疫苗后产生的抗体效价。免疫猪口蹄疫O型（OZK/93株+OS/99株）灭活疫苗后，用VPI抗体检测试剂盒检测，抗体阳性率只有40%；用HI方法进行检测，抗体阳性率为75%：用液相阻断ELISA方法进行检测，抗体阳性率为70%。

猪O型口蹄疫 合成肽疫苗 灭活疫苗 免疫效果 抗体检测

猪口蹄疫O型灭活疫苗在临床使用过程中对猪只应激较大，常会出现猪只应激死亡的现象，并且对猪只免疫效果不是很理想，通常情况下只有65%～75%的免疫合格率。猪口蹄疫O型合成肽疫苗是用固相多肽合成技术在体外人工合成含有口蹄疫病毒主要抗原位点的多肽，并连接人工合成的可激活辅助性T细胞的短肽，以此作为免疫原，加油佐剂混合乳化制成。有关研究表明，该疫苗具有较好的免疫原性，副反应较小。目前在口蹄疫防疫中使用的猪口蹄疫O型高效灭活疫苗（OZK/93株+OS/99株），是采用细胞培养病毒，然后灭活，加油佐剂混合乳化而成，在免疫过程中副反应较大。为更好地了解猪口蹄疫O型合成肽疫苗与猪口蹄疫O型灭活疫苗的使用效果以及探究合理的检测方法，2011年6～10月在南京某猪场进行此次试验，现报告如下：

1 材料与方法

1.1 试验动物

选择南京某猪场60头80日龄左右的健康小猪。试验前尽可能避开母源抗体的干扰，并检测口蹄疫抗体。另在1栋肥育猪舍中取600头80～90日龄的猪，其中300头注射猪口蹄疫O型（OZK/93株+OS/99株）灭活疫苗，另300头分别注射上海和兰州生产的猪口蹄疫O型合成肽疫苗，观察注射疫苗后1～3d各组猪的应激反应。

1.2 疫苗

猪口蹄疫O型合成肽疫苗，分别由上海和兰州某公司生产；猪口蹄疫O型（OZK/93株+OS/99株）灭活疫苗，由兰州某公司生产。

1.3 试剂盒

猪O型口蹄疫VPI抗体检测试剂盒，分别由上海、韩国、荷兰某公司生产。口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒由兰州兽医研究所生产。

1.4 试验分组及免疫方案

试验猪分为3组，80日龄首免、120日龄二免。试验1、2组分别注射上海和兰州某公司生产的猪口蹄疫O型合成肽疫苗，试验3组注射兰州某公司生产的猪口蹄疫O型（OZK/93株+OS/99株）灭活疫苗。

1.5 血清采集

正式试验前（80日龄）以及第1次注射疫苗后1个月、2个月、3个月，分别颈静脉采血4ml分离血清，用于抗体检测。

1.6 测定指标

用不同方法检测抗体，并进行应激反应观察。

2 结果与分析

表1 不同ELlSA检测口蹄疫抗体阳性率（n=20）%

表2 用Hl方法检测口蹄疫抗体阳性率（n=20）%

表3 用液相阴断ELlSA方法检测口蹄疫抗体阳性率（n=20）%

2.1 从表1来看，3家的试剂盒大体上一致，只有少部分差别。在80日龄免疫前，大部分猪已没有口蹄疫抗体，经首次免疫1个月后（110日龄）合成肽疫苗组90%以上能检测到免疫抗体，但常规OZK/93株+OS/99株组用进口试剂盒仍未能检测到抗体，只有上海生产的试剂盒能检测到抗体，但常规OZK/93株+OS/99株组抗体阳性率只有20%～40%。

表4 不同口蹄疫疫苗在注射过程中出现的应激情况

为了进一步验证猪口蹄疫O型OZK/93株+OS/99株灭活疫苗的免疫效果，实验室同时采用国产的间接血凝抑制（HI）试剂和液相阴断ELISA方法检测不同疫苗的免疫效果。从表2可以看出，用HI方法进行检测口蹄疫O型O型OZK/93株+OS/99株灭活疫苗组在首免后1个月仅40%产生抗体，在二免后20d、40d只有65%、75%能检测到免疫抗体。从表3可以看出，用液相阴断ELISA方法进行检测在首免后1个月仅35%产生抗体，在二免后20d、40d只有60%、70%能检测到免疫抗体。说明液相阴断ELISA方法检测地阳性率比HI方法要低。合成肽疫苗无论用HI方法或液相阴断ELISA方法在首免后1个月还是二免后20d、40d，均检测不到免疫抗体。说明用HI方法和液相阴断ELISA方法检测不到合成肽疫苗的免疫抗体的。

2.2 对比不同疫苗的免疫效果

从表1、表2、表3可以看出，合成肽疫苗的免疫效果较好，在进行首免疫后用ELISA法能很快检测到免疫抗体，并且抗体阳性率在90%以上，第2次免疫后抗体阳性率达100%。但常规的口蹄疫O型OZK/93株+OS/99株灭活疫苗，无论用ELISA法还是HI检测法，在进行二次免疫后猪血清免疫抗体检测值合格率都比较低，最高只有75%。

2.3 免疫注射应激反应观察对比

从表4可以看到，在临床免疫注射过程中，猪口蹄疫O型OZK/93株+OS/99株灭活疫苗产生应激明显高于猪口蹄疫O型合成肽疫苗。

3 结论

猪口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫抗体须用O型口蹄疫VPI抗体检测试剂盒才能检测出来，HI方法检测不到。用O型口蹄疫VPI抗体检测试剂盒检测猪口蹄疫O型OZK/93株+OS/99株灭活疫苗抗体的敏感性比用HI方法和液相阴断ELISA方法低。所有的检测结果表明，猪口蹄疫O型OZK/93株+OS/99株灭活疫苗的免疫效果相对较差，经过二次免疫后抗体阳性率最高仍只有75%左右。从临床使用效果观察可知，猪口蹄疫O型OZK/93株+OS/99株灭活疫苗明显比猪口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫应激大。