阿司匹林预处理对多囊卵巢综合征行IVF—ET的疗效及其机制研究

熊永崂　杨桂艳　杨嫦玉　吴重聪　周雯雯

【摘要】 目的：探討阿司匹林预处理对多囊卵巢综合征行试管婴儿（invitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET）的疗效及其机制。方法：选取2015年1月-2016年6月在珠海市妇幼保健院生殖中心因多囊卵巢综合征行试管婴儿治疗的患者119例，采用随机数字表法将患者分为研究组（62例）和对照组（57例）。研究组在IVF-ET治疗前给予阿司匹林预处理，对照组给予安慰剂治疗。观察比较两组患者的促性腺激素（Gn）使用时间、Gn使用剂量、获卵数、2PN受精率、优质胚胎数、启动日T淋巴细胞、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）及IVF-ET结局。结果：研究组患者的Gn使用时间短于对照组，Gn使用剂量低于对照组，获卵数和优质胚胎数均高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。研究组患者的启动日T淋巴细胞、TNF-α和IL-6水平均低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。研究组患者的临床妊娠率和胚胎种植率均高于对照组，流产率低于对照组，但差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：阿司匹林预处理对多囊卵巢综合征行IVF-ET有积极的临床意义。

【关键词】 阿司匹林； 多囊卵巢综合征； IVF-ET； T淋巴细胞； 肿瘤坏死因子-α； 白介素-6

Study on the Effect and Mechanism of Aspirin Pretreatment on IVF-ET in Patients with Polycystic Ovary Syndrome/XIONG Yong-lao，YANG Gui-yan，YANG Chang-yu，et al.//Medical Innovation of China，2017，14（15）：016-019

【Abstract】 Objective：To investigate the effect and mechanism of Aspirin pretreatment on invitro fertilization-embryo transfer （IVF-ET） in polycystic ovary syndrome（PCOS）.Method：From January 2015 to June 2016，in the reproductive center of Maternal and Child Health Care Hospital of Zhuhai，119 patients with polycystic ovary syndrome were treated with IVF-ET and selected，they were divided into research group （62 cases）and control group（57 cases） according to the random number table method.The research group was given Aspirin before IVF-ET treatment，the control group was given placebo.The Gonadotropin（Gn） using time，Gn using dosage，amount of acquired oocytes，high-quality embryos，level of the serum T lymphocytes，TNF-α and IL-6 at the initiation day and clinical results of the two groups were observed and compared.Result：The Gn using time of the research group was shorter than that of the control group，and the dosage of Gn was lower than that of the control group， the amount of the acquired oocytes and high-quality embryos of the research group were all more than those of the control group，the differences were statistically significant（P<0.05）.The levels of T lymphocytes，TNF-α and IL-6 at the initiation day of the research group were lower than those of the control group，the differences were statistically significant（P<0.05）.The pregnancy rate and implantation rate of research group were higher than those in control group，the abortion rate was lower than that in control group，but the differences were not statistically significant（P>0.05）.Conclusion：Aspirin pretreatment has positive clinical significance in the treatment of polycystic ovary syndrome with IVF-ET.

【Key words】 Aspirin； Polycystic ovary syndrome； Invitro fertilization-embryo transfer； T lymphocytes； TNF-α； IL-6

First-authors address：Maternal and Children Health Care Hospital of Zhuhai，Zhuhai 519000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.15.005

多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是青春期和育龄期妇女的一种常见病，发病率为5%～10%，无排卵妇女中占75%，多毛妇女可高达85%以上。临床表现为月经稀发、闭经、肥胖、不孕、痤疮，生化检查表现为高黄体生成素（luteinizing hormone，LH）、高雄激素和胰岛素抵抗。多囊卵巢综合征发病机制不明，由于卵泡发育异常，长期无排卵，自然妊娠困难需行试管婴儿（invitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET）治疗。在IVF-ET治疗过程中，多囊卵巢综合征促排卵过程中常存在卵泡募集障碍和成熟障碍，卵泡易闭锁，卵子质量低，流产率高，是临床治疗过程中的一个疑难问题。

多囊卵巢综合征病因及发病机制不明，笔者前期的研究表明多囊卵巢综合征患者体内存在慢性炎症反应，多囊卵巢综合征妇女外周血中炎症细胞和炎症因子明显升高[1]。多囊卵巢综合征是由于高胰岛素和高LH导致体内雄激素过高，导致体内和卵泡内炎症因子浓度升高[2]，阻碍卵泡发育，降低卵子质量[3]。目前对多囊卵巢慢性炎症治疗的报道较少[4]，且效果不明显，存在争议，阿司匹林的抗感染作用可能降低体多囊卵巢综合征患者体内血液和卵泡液中炎症反应，改善多囊卵巢综合征体内激素的平衡，本文主要研究其预处理对多囊卵巢综合征行IVF-ET临床结局的影响，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年1月-2016年6月在珠海市妇幼保健院生殖中心因多囊卵巢综合征行试管婴儿治疗的患者119例，所有患者年龄20～40岁，诊断参照鹿特丹标准：（1）月经紊乱，临床表现为闭经、月经稀发、月经频发；（2）高雄激素的临床表现和高雄激素血症，临床表现有痤疮、多毛，血清总睾酮、游离睾酮均高于正常值；（3）卵巢多囊性改变，B超检查见一侧或双侧卵巢直径2～9 mm的卵泡≥12个。符合上述3项中任何2项者，即可诊断为多囊卵巢综合征。此外还需排除胃十二指肠溃疡、凝血功能障碍及盆腔炎性疾病或者输卵管炎性疾病的患者。采用随机数字表法将所有患者分为研究组和对照组，其中研究组62例，平均年龄（31.30±3.33）岁；对照组57例，平均年齡（30.86±3.29）岁。两组患者的一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究经过本院伦理委员会批准，所有患者均知情同意。

1.2 干预方法 试管婴儿（invitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET）治疗采用常规长方案促排卵治疗，在多囊卵巢综合征患者知情同意的情况下，研究组在降调节前15 d开始给予阿司匹林口服，200 mg/次，2次/d，预防性使用洛赛克（质子泵拮抗剂）20 mg，降调节15 d后促排卵启动日即停用阿司匹林，前后服用阿司匹林30 d。对照组给予安慰剂。取卵后第3天移植胚胎，移植后第14天化验血hCG，若hCG阳性则移植后30 d B超检查妊娠情况。

1.3 评估与记录 收集研究组和对照组患者的促性腺激素（Gn）使用时间、Gn使用总量、内膜厚度以及启动日血液中T淋巴细胞、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）水平和IVF-ET获卵数、受精率、优质胚胎数、临床妊娠率、种植率、流产率。

1.4 检测方法 T淋巴细胞采用CD3（Dako 公司）标记后流式细胞仪检测，TNF-α、IL-6采用ELISA试剂盒（美国BioSource）检测。

1.5 统计学处理 采用SPSS 11.0软件进行统计学分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验；计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者的促排卵情况比较 研究组的Gn使用时间短于对照组，Gn使用剂量低于对照组，获卵数和优质胚胎数均高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）；两组患者的内膜厚度、2PN受精率、周期取消率比较，差异均无统计学意义（P>0.05），见表1。

2.2 两组患者的启动日T淋巴细胞、TNF-α和IL-6比较 研究组患者的启动日T淋巴细胞、TNF-α和IL-6水平均低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）

2.3 两组患者的IVF-ET结局比较 两组患者的IVF-ET获卵数、平均移植胚胎数比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；研究组患者的临床妊娠率和胚胎种植率均高于对照组，流产率低于对照组，但差异均无统计学意义（P>0.05）

3 讨论

本研究中阿司匹林预处理可明显降低血液中T淋巴细胞的数目、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白介素-6（IL-6）的浓度。多囊卵巢综合征卵泡发育存在募集和成熟障碍，卵泡易闭锁，卵子质量低，影响试管婴儿（invitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET）的成功率。在多囊卵巢综合征卵泡的发育过程中，多种细胞和细胞因子通过旁分泌调节卵泡的发育[5-6]。T淋巴细胞是一种主要的慢性炎症细胞，可以分泌产生淋巴因子，包括TNF-α和IL-6。颗粒细胞包绕卵子，自分泌和旁分泌大量细胞因子作用于卵子，其中TNF-α和IL-6是卵泡生长的主要抑制因子。在卵泡生长过程中，TNF-α和IL-6抑制颗粒细胞的分化，抑制雌二醇和孕激素的分泌[7-8]，促进颗粒细胞的调亡[9]，导致卵泡闭锁。进一步研究发现TNF-α刺激雄激素合成[10]，促进胰岛素抵抗[11]，最终造成卵细胞质量的下降，降低IVF-ET的妊娠率，增加流产率。已有研究报道卵泡液中TNF-α与多囊卵巢综合征IVF-ET妊娠率呈负相关[12]。为了提高多囊卵巢综合征行IVF-ET的妊娠率，临床上有必要采用阿司匹林预处理的干预手段，降低T淋巴细胞的数目和颗粒细胞TNF-α、IL-6的表达。

本研究結果显示，研究组的Gn使用时间短于对照组，Gn使用剂量低于对照组，获卵数和优质胚胎数均高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。因此阿司匹林预处理有利于多囊卵巢综合征促排卵过程中卵泡的发育，可减少患者促排卵药物的使用时间，减少促排卵药物的使用，从而减少患者的痛苦和经济负担，同时增加获卵数和可移植胚胎数。

本研究结果显示，研究组患者的临床妊娠率和胚胎种植率均高于对照组，流产率低于对照组，但差异均无统计学意义（P>0.05），可能与病例数过少有关，再者研究组可移植胚胎数增多，累计妊娠率理论上应该高于对照组。阿司匹林通过降低血液中T淋巴细胞数目[13]，从而降低细胞内TNF-α、IL-6的表达[14-16]。在IVF-ET的治疗中，阿司匹林预处理对正常妇女的妊娠率无明显影响[17]，但对于患有自身免疫性疾病的患者行IVF-ET治疗，阿司匹林可明显提高妊娠率，降低流产率[18-20]。自身免疫性疾病的患者本身存在慢性炎症，体内淋巴细胞和炎症因子如TNF-α、IL-6明显升高，因此阿司匹林预处理通过降低体内淋巴细胞、TNF-α、IL-6，降低血液和卵泡液中的炎症反应，抑制颗粒细胞的凋亡，促进卵泡发育，提高卵子质量，从而提高自身免疫性疾病的患者IVF-ET的妊娠率。多囊卵巢综合征患者存在慢性炎症，因此临床上可以使用阿司匹林预处理改善多囊卵巢综合征行IVF-ET治疗妊娠结局。

综上所述，多囊卵巢综合征存在慢性炎症，这些炎症细胞和炎症因子阻碍卵泡发育，降低卵子质量，继而降低IVF-ET的妊娠率，增加流产率。阿司匹林预处理通过降低多囊卵巢综合征患者体内的炎症反应，可减少多囊卵巢综合征患者行IVF-ET促排卵的时间，减少促排卵使用的总药物量，增加获卵数、可移植胚胎数，从而有利于患者的最终妊娠结局，值得在临床中推广应用。

参考文献

[1] Xiong Y L，Liang X Y，Yang X，et al.Low-grade chronic inflammation in the peripheral blood and ovaries of women with polycystic ovarian syndrome[J].European Journal of Obstetrics Gynecology & Reproductive Biology，2011，159（1）：148-150.

[2]陈欣，宋岩，邓永志，等.慢性炎症因子参与多囊卵巢综合征发病的初步探讨[J].中国妇幼保健，2016，31（22）：4635-4636.

[3] Hara S，Takahashi T，Amita M，et al.Pioglitazone counteracts the tumor necrosis factor-α inhibition of follicle-stimulating hormone-induced follicular development and estradiol production in an in vitro mouse preantral follicle culture system[J].Journal of Ovarian Research，2013，6（1）：69.

[4]唐侨飞，吴成勇，杨满，等.叶酸对多囊卵巢综合征患者炎症因子及糖脂代谢的影响[J].中国医学创新，2016，13（8）：56-59.

[5]胡艳红，徐忠芳.多囊卵巢综合征内分泌异常与CD8+CD28+/CD8+CD28-T细胞平衡的关系[J].中国医学创新，2016，13（26）：32-35.

[6] Darbon J M，Oury F，Laredo J，et al.Tumor necrosis factor alpha inhibits follicle-stimulating hormone-induced differentiation in cultured rat ignaling cells[J].Biochem Biophys Res Commun，1989，163（2）：1038-1046.

[7] Sakumoto R，Shibaya M，Okuda K.Tumor necrosis factor-alpha（TNF alpha） inhibits progesterone and estradiol-17beta production from cultured ignaling cells：presence of TNF-alpha receptors in bovine ignaling and theca cells[J].J Reprod Dev，2003，49（6）：441-449.

[8] Adashi E Y，Resnick C E，Packman J N，et al.Cytokine-mediated regulation of ovarian function：tumor necrosis factor alpha inhibits gonadotropin-supported progesterone accumulation by differentiating and luteinized murine ignaling cells[J].Am J Obstet Gynecol，1990，162（4）：889-899.

[9] Asselin E，Xiao C W，Wang Y F，et al.Mammalian follicular development and atresia：role of apoptosia[J].Biol Signals Recep，2000，9（2）：87-89.

[10] Roby K F，Terranova P F.Effects of tumor necrosis factor-alpha in vitro on steroidogenesis of healthy and atretic follicles of the rat： theca as a target[J].Endocrinology，1990，126（5）：2711-2718.

[11] Paolisso G，Rizzo M R，Mazziotti G，et al.Advancing age and insulin resistance： role of plasma tumor necrosis factor alpha[J].Am J Physiol，1998，275（2 Pt 1）：E294-E299.

[12] Lee K S，Joo B S，Na Y J，et al.Relationships between concentrations of tumor necrosis factor-alpha and nitric oxide in follicular fluid and oocyte quality[J].J Assist Reprod Genet，2000，17（4）：222-228.

[13] Sitia G，Aiolfi R，Lucia P D，et al.Antiplatelet therapy prevents hepatocellular carcinoma and improves survival in a mouse model of chronic hepatitis B[J].Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2012，109（32）：2165-2172.

[14] Xu M G，Men L N，Zu Y，et al.Effects of intravenous immunoglobulin and aspirin treatment on the functions of circulating endothelial progenitor cells in children with Kawasaki disease[J].Chinese Journal of Contemporary Pediatrics，2011，13（12）：966-969.

[15] Akyazi I，Eraslan E，Gül?ubuk A，et al.Long-term aspirin pretreatment in the prevention of cerulein-induced acute pancreatitis in rats[J].World Journal of Gastroenterology，2013，19（19）：2894-2903.

[16] Eickmeier O，Seki H，O Haworth，et al.Aspirin-triggered resolvin D1 reduces mucosal inflammation and promotes resolution in a murine model of acute lung injury[J].Mucosal Immunol，2013，6（2）：256-266.

[17] Hanevik H I，Friberg M，Bergh A，et al.Do acetyl salicylic acid and terbutaline in combination increase the probability of a clinical pregnancy in patients undergoing IVF/ICSI[J].Journal of Obstetrics & Gynaecology the Journal of the Institute of Obstetrics & Gynaecology，2012， 32（8）：786-789.

[18] Ying Y，Zhong Y P，Zhou C Q，et al.A retrospective study on IVF outcome in patients with anticardiolipin antibody：effects of methylprednisolone plus low-dose aspirin adjuvant treatment[J].Journal of Reproductive Immunology，2012，94（2）：196-201.

[19] Geva E，Amit A，Lerner-Geva L，et al.Prednisone and aspirin improve pregnancy rate in patients with reproductive failure and autoimmune antibodies：a prospective study[J].Am J Reprod Immunol，2000，43（1）：36-40.

[20]張娱，季静娟，刘雨生，等.阿司匹林联合泼尼松对抗磷脂抗体阳性者行IVF-ET妊娠结局的影响[J].国际生殖健康/计划生育杂志，2013，32（3）：162-165.

（收稿日期：2017-04-17） （本文编辑：张爽）