CD3-CD16+CD56+NK细胞水平变化在急性胰腺炎严重程度预测中的作用

刘 吟，沈佳庆

苏州大学附属第一医院消化科，江苏 苏州 215006

CD3-CD16+CD56+NK细胞水平变化在急性胰腺炎严重程度预测中的作用

刘 吟，沈佳庆

苏州大学附属第一医院消化科，江苏 苏州 215006

目的 分析急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)发病早期CD3-CD16+CD56+NK细胞计数在AP严重程度预测中的作用。 方法 采用流式细胞仪荧光抗体标记法分别对164例AP患者的外周血单核细胞进行CD3、CD16、CD56荧光抗体标记，分析比较AP患者CD3-CD16+CD56+NK细胞在外周血单核细胞中的百分比和计数情况，及其与AP严重程度的关系。用ROC曲线和AUC评价CD3-CD16+CD56+NK细胞在外周血单核细胞中的百分比和计数对SAP的诊断价值。结果 与正常对照组相比，MAP组、MSAP组和SAP组的CD3-CD16+CD56+百分比和计数均显著下降，各组间差异有统计学意义(P<0.05)。CD3-CD16+CD56+细胞百分比的AUC为0.86(95%CI：0.745～0.973)，取值≤5.27%时，特异性为0.92，敏感性为0.79；CD3-CD16+CD56+细胞计数的AUC为0.89(95%CI：0.808～0.961)，取值≤0.056×109/L时特异性为0.90，敏感性为0.79。结论 CD3-CD16+CD56+NK细胞在外周血单核细胞中的百分比和细胞计数对SAP早期诊断有一定的价值。

急性胰腺炎；CD3-CD16+CD56+NK细胞；早期诊断

急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是消化内科常见病，目前发病率有逐年上升的趋势。根据严重程度可将其分为三类：轻度急性胰腺炎(mild AP, MAP)、中度急性胰腺炎(moderate-severe AP, MSAP)和重度急性胰腺炎(severe AP, SAP)。MAP经保守治疗后可获治愈，而SAP不但表现为胰腺局部的坏死病变，还出现全身炎症反应(systemic inflammatory response syndrome, SIRS)和多器官功能障碍(multiple organ dysfunction, MODS)，具有较高的死亡率[1-2]。炎症细胞及其分泌的细胞因子在AP发病过程中起到重要作用。自然杀伤细胞(NK细胞)作为机体非特异性免疫系统的重要组成部分，在机体抗病毒、抗肿瘤及免疫调节中起着重要作用，但其在AP中的作用目前尚未完全阐明[3]。本研究在收集AP发病早期CD3-CD16+CD56+NK细胞计数的基础上，分析其在AP严重程度预测中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料收集2014年1月-2014年12月苏州大学附属第一医院收治的AP患者164例，男93例，女71例，年龄24～91岁，平均年龄(55±17)岁。AP的诊断及严重程度的判定参照《中国急性胰腺炎诊治指南》[4]，并将患者分为MAP组(103例)、MSAP组(47例)和SAP组(14例)。各组间年龄、性别及发病原因比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。对照组22名，为健康体检成人，男12名，女10名,年龄26～64岁，平均年龄(45±13)岁。

1.2 NK细胞检测所有患者均在发病24 h内确诊，并在发病48 h内收集外周血用于检测NK细胞。CD3-CD16+CD56+NK细胞在外周血单核细胞中的百分比及计数采用美国BD公司FACSACaliburFCM流式细胞仪检测，试剂(包括CD3抗体、CD16抗体和CD56抗体)购自美国BD公司。

2 结果

2.1 各组外周血单核细胞中NK细胞百分比及计数

与正常对照组(17.5±3.10)%相比，MAP组(15.61±4.85)%、MSAP组(8.59±5.10)%和SAP组(6.35±4.73)%的CD3-CD16+CD56+NK细胞百分比均显著下降，各组间差异均有统计学意义(P<0.05)；与对照组(0.26±0.08)×109/L相比，MAP组(0.23±0.10)×109/L、MSAP组(0.09±0.08)×109/L和SAP组(0.06±0.55)×109/L CD3-CD16+CD56+NK细胞计数均显著下降(P<0.05,见图1)。

注：*P<0.05。

图1 AP患者发病48 h内CD3-CD16+CD56+细胞在外周血单核细胞中的百分比(A)及计数(B)

Fig 1 The percentage (A) and count (B) of CD3-CD16+CD56+NK cells in peripheral blood mononuclear cells onset within the first 48 hours of AP patients

2.2 ROC曲线及AUC结果通过绘制ROC曲线，评价CD3-CD16+CD56+细胞在外周血单核细胞中的百分比和细胞计数对SAP的早期诊断价值：CD3-CD16+CD56+细胞百分比的AUC为0.86(95%CI: 0.745～0.973)；取值≤5.27%时，特异性是0.92，敏感性是0.79；CD3-CD16+CD56+细胞计数的AUC为0.89(95%CI:0.808～0.961)；取值≤0.056×109/L时，特异性是0.90，敏感性是0.79。提示CD3-CD16+CD56+细胞百分比和细胞计数对SAP具有一定的诊断价值(见图2)。

3 讨论

NK细胞是一类具有自发细胞毒活性的细胞，对靶细胞的识别不具有主要组织相容性复合物(major histocompatibity complex, MHC)限制性，先致敏即可直接杀伤肿瘤细胞，也可分泌细胞因子调节其他免疫细胞的功能，是机体天然免疫的主要承担者，人类NK细胞的分化抗原有CD16、CD56、CD94、CD96、CD161、CD162R 和CD244 等。CD16 在NK 细胞表达阳性率90%，CD56 在NK 细胞表达阳性率>95%，而CD3往往不表达所以目前临床上将CD3-CD56+CD16+淋巴样细胞认定为NK 细胞[5]。NK 细胞在炎症发生过程中发挥重要作用，其不但对靶细胞有溶解杀伤作用，还可以通过对巨噬细胞、粒细胞、树突状细胞的调节作用控制天然免疫，并作用于CD4+T细胞和CD8+T细胞以强化特异性免疫。活化的NK 细胞可以通过分泌细胞因子(如肿瘤坏死因子α和干扰素γ等)诱导炎症反应，调节细胞增殖及单核/巨噬细胞和粒细胞的功能[6]。

图2 CD3-CD16+CD56+细胞在外周血单核细胞中的百分比及计数对SAP早期诊断价值的ROC曲线分析

Fig 2ROCcurves analysis on the early diagnostic value of percentage and count of CD3-CD16+CD56+NK cells in SAP

AP发病初期，多种致病因素引起胰酶在胰腺内激活，并引起胰腺组织自身炎症反应甚至胰腺组织坏死，进而激活炎症细胞释放大量炎症介质，引发全身炎症反应和多器官功能受损[7-8]。本研究结果显示AP时CD3-CD16+CD56+细胞在外周血单核细胞中的百分比和计数均明显下降。按照最新的AP诊断标准可以发现，随着AP的临床严重程度增加[9]，CD3-CD16+CD56+细胞的百分比和计数均逐渐下降，提示其与AP严重程度呈相关性，并提示NK细胞在AP的发病过程中也发挥非常重要的作用，但其具体机制仍待进一步研究。

SAP可出现胰腺坏死出血，激发感染、腹膜炎和休克，甚至出现多器官功能衰竭，病死率较高。因此，早期明确SAP，不仅有助于给予患者及时的支持治疗和密切的临床监测，还有助于防止严重并发症(如休克、感染等)的发生，从而改善其预后[10]。目前常用的判断AP严重程度及预后的方法主要包括：临床评分系统、影像学检测和实验室生化指标等，但这些常用指标均存在各种缺陷，如计算复杂或时间滞后等[11]。本研究中ROC曲线显示CD3-CD16+CD56+细胞百分比及细胞计数对SAP的早期诊断具有一定价值。

本研究显示AP 时CD3-CD16+CD56+细胞百分比及细胞计数存在下降的现象，提示NK 细胞在AP发病中起重要作用。且采血于发病48 h内，故可用于AP严重程度的早期预测。

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(责任编辑：李 健)

Effect of CD3-CD16+CD56+NK cell counting in predicting the severity of acute pancreatitis

LIU Yin, SHEN Jiaqing

Department of Gastroenterology, the First Affiliated Hospital of Soochow University, Suzhou 215006, China

Objective To analyze the CD3-CD16+CD56+NK cell counts of patients in the early stage of acute pancreatitis (AP), and analyze its role in the prediction of AP severity.Methods All of 164 AP patients were enrolled in the study. By labeling CD3, CD56, CD16 fluorescent antibodies, the percentage and counts of CD3-CD16+CD56+NK cell in peripheral blood mononuclear cell were analyzed by flow cytometry. The relationship between CD3-CD16+CD56+NK cell percentage and counts and the severity of AP was analyzed.ROCcurves andAUCwere used to evaluate the diagnostic value of CD3-CD16+CD56+NK cells in severe AP (SAP).Results Compared with normal control group, CD3-CD16+CD56+NK cell percentage and counts were significantly reduced in AP patients. The obvious differences were also found among MAP group, MSAP group and SAP group (P<0.05). CD3-CD16+CD56+NK cell percentage of theAUCwas 0.86 (95%CI: 0.745～0.973). When the value was less than or equal to 5.27%, specificity was 0.92, sensitivity was 0.79. CD3-CD16+CD56+NK cells count of theAUCwas 0.89 (95%CI: 0.808～0.961). When the value was less than or equal to 0.056×109/L, specificity was 0.90, sensitivity was 0.79.Conclusion The percentage and counts of CD3-CD16+CD56+NK cell in peripheral blood mononuclear cells may have a diagnostic value for early diagnosis of SAP.

Acute pancreatitis; CD3-CD16+CD56+NK cell; Early diagnosis

国家自然科学基金青年项目(81300375)；苏州市科技发展项目(SYS201333)

刘吟，医师,E-mail:0930506123@suda.edu.cn

沈佳庆，博士，主治医师，研究方向：胰腺炎的临床与基础研究。E-mail:sjqsz@126.com

10.3969/j.issn.1006-5709.2017.01.026

R576

A

1006-5709(2017)01-0093-03

2016-03-09