右旋雷贝拉唑钠对反流性食管炎模型大鼠炎性因子及血管活性肠肽的影响

桂 元，王 砾，詹继东，李 娥，黄 沁，徐 芳

华中科技大学校医院内科，湖北 武汉 430074

右旋雷贝拉唑钠对反流性食管炎模型大鼠炎性因子及血管活性肠肽的影响

桂 元，王 砾，詹继东，李 娥，黄 沁，徐 芳

华中科技大学校医院内科，湖北 武汉 430074

目的 探讨右旋雷贝拉唑钠对反流性食管炎模型大鼠炎性因子及血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide, VIP)的影响。方法 选择60只SPF级大鼠为研究对象，随机分为空白对照组、模型组、雷贝拉唑钠组(4 mg/kg)、小剂量右旋雷贝拉唑钠组(2 mg/kg)和大剂量右旋雷贝拉唑钠组(4 mg/kg)，空白组不作任何处理，其余4组建立大鼠反流性食管炎模型，观察各组大鼠食管炎指数、食管炎抑制率、炎性因子及VIP表达水平。结果 大剂量右旋雷贝拉唑钠组食管炎指数明显低于雷贝拉唑钠组，抑制率明显高于雷贝拉唑钠组(t=3.725，7.595，P<0.05)，一氧化氮(NO)、白细胞介素-6 (IL-6)水平均明显低于雷贝拉唑钠组(t=2.054，6.386，P<0.05)，VIP明显低于雷贝拉唑钠组，P物质(SP)明显高于雷贝拉唑钠组(t=2.826，3.162，P<0.05)；小剂量右旋雷贝拉唑钠与雷贝拉唑钠食管炎指数等差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 右旋雷贝拉唑钠有通过降低炎性因子及VIP的表达，提高兴奋性多肽类神经递质的表达来发挥治疗反流性食管炎的作用，相同剂量条件下，右旋雷贝拉唑钠作用效果强于雷贝拉唑钠。

反流性食管炎；右旋雷贝拉唑钠；炎性因子；血管活性肠肽

反流性食管炎( reflux esophagitis, RE) 是抗反流防御机制减弱和反流物对食管黏膜攻击作用的结果，胃及十二指肠内容物逆流进入食管，食物及胃酸中的化学成分损伤食管黏膜，导致胸闷、疼痛、烧灼感等一系列临床症状和体征，长期反复的RE引起食管狭窄，严重影响患者的生存质量[1]。雷贝拉唑是治疗RE的常用质子泵抑制剂类药物，长期大剂量使用会导致骨质疏松症、高胃泌素血症[2]。右旋雷贝拉唑为新型质子泵抑制剂，具有代谢半衰期长、疗效可靠、不良反应轻的特点，可更高效地抑制胃壁细胞H+-K+-ATP酶活性来降低胃酸分泌[3]。本文通过建立动物模型的方法，探讨右旋雷贝拉唑钠对大鼠RE模型炎性因子及血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide, VIP)的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物 12 周龄SPF级大鼠60只，雌雄各半，体质量250～300 g，购自某大学动物实验中心(许可证号：151012)，本次研究经医院动物伦理委员会批准。

1.2 药品、试剂及仪器 右旋雷贝拉唑钠、雷贝拉唑钠肠溶片：上海信谊药厂有限公司(批准文号：国药准字H20031292，规格：10 mg/片)生产；一氧化氮(NO)试剂盒购自南京建成生物工程研究所(批号20131120)；血管活性肠肽(VIP)试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司(批号BA0134)；P物质(SP)试剂盒购自武汉博士德(批号BA0126-1)；即用型SABC 免疫组化染色试剂盒购自武汉博士德(批号:SA1028)；YP3001N 型电子天平：上海精密科学仪器有限公司；高速离心机：德国贺利氏公司Fresco17； 酶联免疫检测仪：芬兰雷勃集团MK3；ELISA试剂盒：R&D 公司；切片机：德国Leica 公司RM2255： 光学显微镜：日本Olympus 公司SZ61 。

1.3 方法

1.3.1 动物分组及建模：将60只健康大鼠随机分为空白对照组、模型组、雷贝拉唑组、小剂量右旋雷贝拉唑组及大剂量右旋雷贝拉唑组各12只。适应性饲养1周后，空白组不作任何处理，其余4组建立大鼠单纯酸性反流性食管炎模型[4]。禁食14 h 后，腹腔注射3.5%水合氯醛(3 ml/kg) 麻醉后，将大鼠仰卧固定于手术台，无菌操作下在上腹部正中取约3 cm切口进腹，暴露食管下段及胃食管交界区后，行不全幽门结扎+贲门肌切开术，用细针及0号细线缝扎胃左动脉分支，然后与食管-胃交界处纵行切开贲门肌0.5～1.0 cm，分离至黏膜层；避开血管，在幽门与十二指肠交界近幽门处半结扎幽门；最后吸净大鼠腹腔中的液体，注入生理盐水1 ml+庆大霉素10 000 IU后关腹。术后禁食不禁水24 h，置于34 ℃、相对湿度 93%的环境中，在普通饲料喂养的基础上，给予10% 蜂蜜、10%白糖混合饮料自由饮用，术后3 周即大鼠RE造模成功。

1.3.2 药物治疗：空白对照组和模型组均给予1 ml/100 g 的生理盐水灌胃，雷贝拉唑组给予4 mg/kg雷贝拉唑溶液灌胃，小剂量右旋雷贝拉唑钠组给予2 mg/kg的右旋雷贝拉唑钠灌胃，大剂量右旋雷贝拉唑组则给予4 mg/kg的右旋雷贝拉唑钠灌胃。所有右旋雷贝拉唑钠大鼠均给药1 次/d，连续灌胃8周。大鼠造模及药物处理过程中各组均无死亡。

1.4 观察指标

1.4.1 食管炎指数和抑制率：末次给药24 h后，所有大鼠腹腔注射2% 戊巴比妥钠40 mg/kg麻醉后处死，沿贲门向上钝性分离并剪取食管3～4 cm，肉眼观察食管黏膜大体表现；用生理盐水冲洗食管腔，取0.2 g匀浆，其余食管组织用10%甲醛固定后石蜡包埋切片，常规HE 染色及免疫组织化学法染色。参照《反流性食管炎诊断及治疗指南》[5]中分级和评分判断食管炎指数。0分：食管黏膜正常；1分：食管黏膜点状或条状发红，糜烂<2处，伴鳞状上皮增生、上皮细胞层内炎细胞浸润；2分：糜烂≥2 处；3分：溃疡形成，糜烂融合< 75%；4分：糜烂融合≥75%，伴Barrett 食管改变。食管炎抑制率=(模型组食管炎指数-药物组食管炎指数)/模型食管炎指数×100%[6]。

1.4.2 食管组织中炎性因子水平：将0.2 g 食管组织制备2 ml 匀浆，4 ℃下10 000 r/min 离心(离心半径5 cm)10 min，取上清液1 ml。检测时用酶标仪比色，以空白调零，记录吸光度A，将标准液浓度与相应的吸光度作标准曲线，求得斜率K，NO 含量=A/K[7]。同时采用酶联免疫吸附法检测标本中白细胞介素-6 (interleukin-6, IL-6)水平。

1.4.3 VIP：采用放射免疫沉淀法检测食管黏膜中VIP、SP含量。

2 结果

2.1 食管炎指数及食管炎抑制率 药物组大鼠食管炎指数明显低于模型组(P<0.05)；大剂量右旋雷贝拉唑钠组食管炎指数明显低于雷贝拉唑钠组，抑制率明显高于雷贝拉唑钠组(P<0.05)；雷贝拉挫拉钠组与小剂量右旋雷贝拉唑组食管炎指数、食管炎抑制率比较差异无统计学意义(P>0.05，见表1)。

2.2 大鼠食管组织中炎性因子 模型组大鼠食管组织中NO、IL-6水平均明显高于空白对照组(P<0.05)；药物组NO、IL-6水平均明显低于模型组(P<0.05)；大剂量右旋雷贝拉唑钠组NO、IL-6水平均明显低于雷贝拉唑钠组(P<0.05)，雷贝拉唑钠组与小剂量右旋雷贝拉唑钠组比较差异无统计学意义(P>0.05，见表2)。

2.3 血管活性肠肽及P物质 模型组血管活性肠肽VIP表达水平明显高于空白对照组，SP明显低于空白对照组(P<0.05)；药物组VIP明显低于模型组，SP明显高于模型组(P<0.05)；大剂量右旋雷贝拉唑钠组VIP明显低于雷贝拉唑钠组，SP明显高于雷贝拉唑钠组(P<0.05)，雷贝拉唑钠组与小剂量右旋雷贝拉唑钠组间比较差异无统计学意义(P>0.05，见表3)。

组别只数食管炎指数(分)食管炎抑制率(%)空白对照组12--模型组123.19±0.84-雷贝拉唑钠组122.12±0.39①33.86±4.32小剂量右旋雷贝拉唑钠组122.30±0.40①28.23±3.85大剂量右旋雷贝拉唑钠组121.61±0.27①②48.75±5.24②

注：与模型组比较，t=2.504～4.803，①P<0.05；与雷贝拉唑钠组比较，t=3.725, 7.595, ②P<0.05。

组别只数NO(μmol/L)IL-6(μg/L)空白对照组1262.38±16.8738.26±4.83模型组12106.11±18.96①110.82±13.67①雷贝拉唑钠组1264.95±16.04②65.13±10.45②小剂量右旋雷贝拉唑钠组1265.23±16.85②66.04±10.29②大剂量右旋雷贝拉唑钠组1253.02±11.12②③42.56±6.38②③

注：与空白对照组比较，t=5.969, 17.337，①P<0.05；与模型组比较，t=5.722～15.675，②P<0.05；与雷贝拉唑钠组比较，t=2.054, 6.386，③P<0.05。

组别只数VIPSP空白对照组1281.67±10.03164.28±15.16模型组12143.05±12.74①123.11±12.65①雷贝拉唑钠组12100.86±11.09②137.96±14.12②小剂量右旋雷贝拉唑钠组12102.43±11.28②134.58±10.47②大剂量右旋雷贝拉唑钠组1288.59±10.16②③155.63±13.24②③

注：与空白对照组比较，t=13.113, 7.223，①P<0.05；与模型组比较，t=2.714～11.577，②P<0.05；与雷贝拉唑钠组比较，t=2.826, 3.162，③P<0.05。

3 讨论

RE是一种胃食管反流病，系指胃内容物反流入食管，酸性胃液、胆汁、胰液刺激食管黏膜，引起食管炎症、糜烂及溃疡，长期RE可导致食管黏膜纤维化及癌变[8]。质子泵抑制剂是治疗反流性食管炎等胃肠道疾病的常用药物。临床常用的质子泵抑制剂保留奥美拉唑、兰索拉唑、泮托拉唑、雷贝拉唑等，使用的制剂多为消旋体。建立大鼠RE模型后，采用雷贝拉唑和不同剂量的右旋雷贝拉唑灌胃治疗，结果显示，药物治疗组大鼠食管炎指数明显低于模型组，Hashimoto 也有类似的实验研究[9]，证实质子泵抑制剂对治疗RE有较好的疗效。

雷贝拉唑是第三代质子泵抑制剂，包括左旋和右旋两种光学异构体，左旋和右旋之比为1∶1，目前市场上使用的活性成分为左旋和右旋光学异构体的消旋混合物[10]。相关研究表明，左旋和右旋的活性完全不同，右旋异构体雷贝拉唑代谢半衰期长，最低有效剂量小，药理作用明显强于左旋异构体雷贝拉唑与消旋体，能够明显提高药理效果并降低不良反应[11]。

内源性NO 作为一种神经调节递质和重要的炎症介质，不仅能调控食管神经肌肉，导致食管扩约肌松弛[12]，还参与食管黏膜的急、慢性炎症。本研究中，模型组大鼠食管组织中NO及IL-6水平均高于空白对照组，表明RE患者存在明显的炎性反应。给予雷贝拉唑钠、右旋雷贝拉唑钠治疗后， NO及IL-6水平均明显降低，大剂量右旋雷贝拉唑钠组NO、IL-6水平明显低于雷贝拉唑组，小剂量组和雷贝拉唑组比较差异无统计学意义，提示在使用相同剂量的前提下，右旋雷贝拉唑有助于降低反流性食管炎模型大鼠炎性因子表达水平，且不增加不良反应。

食管下段的环形平滑肌受非肾上腺素能非胆碱能(non-adrenergic non-cholinergic，NANC) 神经支配，NANC 神经受抑制后引起食管下括约肌松弛，导致RE 发生。VIP 是NANC 神经的主要抑制性神经递质，是介导下食管括约肌松弛的重要原因[13]。NO由NOS催化产生，是导致食管下段括约肌松驰的直接原因，而且NO的释放还能刺激VIP的产生，进一步加重RE症状[14]。SP为兴奋性肽能神经递质，作用于食管壁各层，能促进下食管括约肌的收缩[15]。本结果中，药物组VIP明显低于模型组，SP明显高于模型组，大剂量右旋雷贝拉唑组VIP明显降低雷贝拉唑组，SP明显高于雷贝拉唑组，提示右旋雷贝拉唑有助于降低VIP的表达水平，增强兴奋性多肽类神经递质的表达。

本文研究结果表明，右旋雷贝拉唑钠可能通过降低炎性因子及VIP的表达，提高兴奋性多肽类神经递质的表达来发挥治疗反流性食管炎的作用，而且在相同剂量的前提下，右旋雷贝拉唑钠治疗效果更好，临床可根据实际情况，调整用药剂量，以减少不良反应。

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(责任编辑：马 军)

The impact of dexrabepraxole sodoum on inflammatory factor and vasoactive intestinal peptide of reflux esophagitis model rats

GUI Yuan, WANG Li, ZHAN Jidong, LI E, HUANG Qin, XU Fang

Department of Internal Medicine, School Hospital of Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430074, China

Objective To investigate effect of dexrabepraxole sodoum on inflammatory factor and vasoactive intestinal peptide of reflux esophagitis model rats.Methods Sixty SPF rats were randomly divided into blank control group, model group, rabeprazole sodium group (4 mg/kg), low-dose dexrabepraxole sodoum group (2 mg/kg), high-dose dexrabepraxole sodoum group (4 mg/kg). Blank control group was no any treatment, rats in other four groups were established reflux esophagitis rats model, then esophagitis index, esophagitis inhibition rate, inflammatory cytokines and vasoactive intestinal peptide expression level were compared.Results Esophagitis index in high-dose dexrabepra xole sodoum group was significantly lower than that in rabeprazole sodium group, inhibition rate was significantly higher than that in the rabeprazole sodium group (t=3.725, 7.595,P<0.05), NO, IL-6 levels were significantly lower than those in rabeprazole sodium group (t=2.054, 6.386,P<0.05), VIP was significantly lower than that in rabeprazole sodium group, SP was significantly higher than that in rabeprazole sodium group (t=2.826, 3.162,P<0.05); there were no statistical differences of esophagitis index and so on between low-dose dexrabepraxole sodoum group and rabeprazole sodium group (P>0.05).Conclusion Dexrabepraxole sodoum can reduce inflammatory cytokines and vasoactive intestinal peptide, improve the excitatory expressed peptide neurotransmitters more to play the role of the treatment of reflux esophagitis, under the condition of the same dose, the effect of dexrabepraxole sodoum is better than rabeprazole sodium.

Reflux esophagitis; Dexrabepraxole sodoum; Inflammatory cytokines; Vasoactive intestinal peptide

10.3969/j.issn.1006-5709.2017.05.016

桂元，医学硕士，主治医师。E-mail： jimfly2014@qq.com

徐芳，医学硕士，副主任医师，研究方向：神经内科临床研究。E-mail： xufang008@foxmail.com

R571

A

1006-5709(2017)05-0539-04

2016-08-30