免疫组化切片褪色再染HE方法探讨

鲁 波，包 磊，任丽芳，沈 寅，张 鹏，钱洁芳

免疫组化切片褪色再染HE方法探讨

鲁 波，包 磊，任丽芳，沈 寅，张 鹏，钱洁芳

免疫组织化学；褪色；再染

随着人们生活水平的日益提高以及医疗条件的不断改善，病理切片向高等级医院会诊也越来越多，患者不及时归还HE切片及组织蜡块的情况也时有发生，病理档案资料仅存有一些免疫组化切片，如果想把此病例作为教学和学术交流将难以进行。我们通过反复试验，摸索出一种将免疫组化标记褪色后，重新进行HE染色的病理技术，现介绍如下。

1 材料与方法

1.1 材料 收集2015～2016年绍兴市妇幼保健院病理科已经做了免疫组化切片的10例标本。

1.2 试剂 褪色剂为0.5%酸性高锰酸钾，1%盐酸乙醇，HE试剂为自配的苏木精和伊红染液。

1.3 方法

1.3.1 免疫组化标记切片褪色为白片 将免疫组化标记切片放入二甲苯中浸泡，去除盖玻片和中性树胶，梯度乙醇脱二甲苯入水，蒸溜水洗，入0.5%酸性高锰酸钾水溶液氧化1～20 min，蒸馏水洗净后入1%盐酸乙醇漂白。此时还不能将切片中的颜色全部褪去，需晾干后再放入1%盐酸乙醇中漂白，反复数次，即可将免疫组化标记的棕黄色颗粒全部去掉，待组织完全变白后显微镜下观察褪色效果，然后水洗。在褪色过程中要严防损坏组织切片，褪色彻底是重染HE的前提条件[1]。

1.3.2 HE染色 将漂白的免疫组化切片放入水中反复冲洗干净，浸入苏木精染液8 min，自来水洗，温水返蓝1 min，入伊红染液1 min水洗，梯度乙醇分化，二甲苯透明，中性树胶封固，镜下观察。

2 结果

10例免疫组化切片经0.5%酸性高锰酸钾、1%盐酸乙醇多次分化后，褪色彻底，无掉片及组织缺损情况，显微镜下观察无任何颜色，再行HE染色后，与原HE染色基本一致，形态结构清楚，组织染色均匀(图1、2)，再染效果良好。

①②

图1 原免疫组化镜下所见：阳性细胞定位准确，无特异性染色，Ki-67(异型腺体20%阳性)，核呈棕褐色着色 图2 褪色后行HE染色镜下所见：小块子宫颈黏膜组织，腺体结构紊乱，异型增生，腺上皮单层或假复层，核大小不一，异性深染，胞质嗜伊红，间质疏松，并有少量炎细胞浸润

3 讨论

日常病理工作中，会遇到以下情况。(1)患者不及时归还HE切片及组织蜡块，病理档案资料仅存一些免疫组化切片。(2)有些子宫颈活检组织标本小，常规HE和免疫组化后组织所剩不多，难以再行切片。(3)镜下有时会发现免疫组化切片中的病灶不同于原HE切片，需重新观察其病变情况。由于无剩余切片，本实验将免疫组化标记的切片经酸性高锰酸钾、盐酸乙醇褪色处理后，重新做HE染色。

免疫组化褪色后行HE染色是一种应急措施，方法是否恰当直接影响诊断质量。其中，褪色剂的选择非常重要，我们选用酸性高锰酸钾作为褪色剂，其原理是高锰酸钾可以氧化DAB上的-NH2，从而破坏辣根过氧化物酶催化DAB形成的色基沉淀物的结构[2]；而1%盐酸乙醇不仅可以去除组织上多余的酸性高锰酸钾溶液，而且还能去除免疫组化阳性部位的棕黄色颗粒，因而经两种溶液处理后的组织切片处于偏中性环境，有利于着色。在以往褪色剂的选用上，通常会选

用酸性高锰酸钾氧化-草酸漂白的方法。但基层医院缺少草酸的情况时有发生，且在氧化漂白过程中，不恰当的操作及作用时间会使组织略带酸性，破坏组织的正常结构，形成空洞和脱落[3]。因酸能破坏苏木精的醌型结构，使色素与组织分离[4]，常发生组织着色能力偏弱的问题。而1%盐酸乙醇正好解决了以上问题，其具有方法简单、配置方便的特点，且在实验过程中不用刻意掌握时间，组织漂白后在显微镜下观察颜色即可。

综上所述，该方法能够用于免疫组化褪色再行HE染色，重染的教学和交流切片可以得到满意的效果，且操作方法简便，适用于基层医院的推广。

[1] 刘海芳. HE褪色后的免疫组化染色[J]. 中国现代医生, 2011,49(17):81-82.

[2] 康佳蕊，杨 毅，王宏伟. 免疫组化标记切片再行HE染色方法介绍[J]. 感染、炎症、修复, 2011,12(1):49-50.

[3] 李 璐. 苏木素-伊红染色切片褪色解决方法[J]. 实用医技杂志, 2010,11(17):1079.

[4] 王伯沄，李玉松，黄高昇，等. 病理学技术[M]. 北京：人民卫生出版社, 2000:129.

浙江省绍兴市妇幼保健院病理科，绍兴 312000

鲁 波，男，主管技师。Tel:(0575)85206747，E-mail: pipilubo2014@163.com

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1001-7399(2017)03-0341-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.03.029

时间：2017-3-16 14:23

http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170316.1423.030.html

接受日期：2017-01-05