乳腺浸润性导管癌不同分子分型中CD90的表达及其意义

杨海玉，刘 勇，戴艳枝，吴晓霞，黄 桃，袁 晟

乳腺浸润性导管癌不同分子分型中CD90的表达及其意义

杨海玉1,2，刘 勇2，戴艳枝2，吴晓霞3，黄 桃2，袁 晟2

目的 探讨CD90在乳腺浸润性导管癌中的表达及其与临床病理特征、分子分型的相关性。方法 构建80例乳腺浸润性导管癌和20例乳腺良性病变的组织芯片，采用免疫组化MaxVision法检测乳腺不同病变组织中CD90、ER、PR、Ki-67和HER-2的表达水平，并进一步分析其相关性。结果 CD90在乳腺浸润性导管癌和乳腺良性病变中的阳性率分别为62.5%和20.0%，两者差异有统计学意义(P<0.001)；CD90表达与乳腺浸润性导管癌淋巴结转移相关(P<0.05)，与患者年龄、肿瘤大小、TNM分期及组织学分级无关(P>0.05)；在乳腺浸润性导管癌不同分子亚型中，CD90阳性率以Luminal A型最低(40.0%)、三阴型最高(82.4%)，各亚型之间差异有统计学意义(P<0.05)；CD90与ER(r=-0.342，P<0.05)、PR(r=-0.374，P<0.05)表达呈负相关，与Ki-67表达之间无相关性(r=0.084，P>0.05)。结论 CD90表达与乳腺癌分子分型有关，其高表达提示患者预后不良。

乳腺肿瘤；CD90；分子分型；转移；免疫组织化学

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁女性的生命健康。目前依据ER、PR、HER-2及Ki-67的表达状况对乳腺癌进行分子分型，可将其分为Luminal A型、Luminal B型、HER-2过表达型及三阴型，且证实乳腺癌不同分子亚型的预后及转移风险亦各不相同[1-2]。CD90又称Thy-1，是一种相对分子质量为(2.5～3.7)×104的细胞膜表面糖蛋白，其主要作用是参与细胞之间以及细胞与基质之间的相互作用，从而参与调控多种生理过程。最近，有学者从一些肿瘤组织中(如食管癌、乳腺癌、肝癌等)分离出CD90阳性细胞，并证实这些细胞可表现肿瘤干细胞的主要特性，认为CD90有望成为恶性肿瘤治疗的新靶点[3-5]。有文献报道[6-7]CD90参与肿瘤微环境的分子调控机制，其表达与肿瘤预后相关。目前，尚未有CD90在不同分子亚型乳腺癌组织中的表达及其临床意义的相关报道。本实验采用免疫组化MaxVision法检测乳腺癌组织中CD90、ER、PR、Ki-67和HER-2的表达，进一步探讨其相关性及临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料 收集2014年1月～2016年1月江西省人民医院病理科资料齐全、诊断明确的女性乳腺浸润性导管癌石蜡标本80例。按WHO(2012)乳腺肿瘤分类进行组织学分级，其中Ⅰ级14例，Ⅱ级46例，Ⅲ级20例；TNM分期依据2010年美国癌症联合委员会(AJCC)乳腺癌分期(第7版)：Ⅰ期17例，Ⅱ期42例，Ⅲ期21例；有淋巴结转移49例，无淋巴结转移31例。另选同期乳腺良性病变组织20例(乳腺纤维腺瘤12例、乳腺增生8例)作为对照。患者年龄23～71岁，平均46.4岁，术前均未行放、化疗及免疫治疗。

1.2 乳腺癌组织芯片制作 (1)芯片设计：按不同疾病种类设计组织样品的排列方式；(2)根据设计对受体蜡块进行打孔，其孔径大小与供体组织钻取孔径大小一致；(3)对供体组织HE切片作形态学观察，并在供体蜡块上准确标记所需靶点；(4)利用打孔仪钻取靶点组织，并转移至受体蜡块相应的孔位上，制成所需的阵列蜡块；(5)4 μm厚切片，裱于载玻片上备用。

1.3 免疫组化 兔抗人CD90单克隆抗体购自Abcam公司(1 ∶200稀释)；兔抗人ER、PR、Ki-67及HER-2单克隆抗体、免疫组化MaxVision检测试剂盒及DAB显色试剂盒均购自福州迈新公司。将乳腺癌组织芯片切成4 μm厚切片，烤片30 min，具体操作参照试剂盒说明书进行，所有实验均设置阴、阳性对照。高倍显微镜下观察10个视野，计算阳性细胞百分比。

1.4 结果判读及分子分型 CD90以细胞膜及细胞质呈棕黄色颗粒为阳性细胞，以阳性细胞所占百分比为判定标准[3]：无阳性细胞或阳性细胞<10%为(-)，10%～25%为(+)，26%～50%为()，>50%为()。ER和PR以细胞核呈棕黄色颗粒为阳性细胞，采用二级计分法[8]判读。按阳性细胞数记分：阳性细胞<1%为0分，1%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，≥76%为4分；按细胞染色强度记分：无阳性着色为0分，淡黄色为1分，黄色或深黄色为2分，黄褐色或棕褐色为3分；两项积分相乘0分为(-)，1～3分为(+)，4～6分为()，7分及以上为()(<1分为阴性，≥1分为阳性)。Ki-67以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性细胞，根据2011年乳腺癌St．Gallen共识[9]，将Ki-67<14%定为阴性，Ki-67≥14%定为阳性。HER-2蛋白呈细胞膜着色，根据2014版乳腺癌HER-2检测指南[10]分为4级(0～3+)：0～1+判为HER-2阴性，3+判为HER-2阳性；HER-2检测2+者另行FISH检测，HER-2基因扩增判为HER-2阳性，否则为HER-2阴性。免疫组化结果判定由两名高年资病理医师共同审核。

乳腺癌分子分型依据2011年St．Gallen乳腺癌国际会议专家共识[9]，分为：(1)Luminal A型：ER和(或)PR阳性、HER-2阴性以及Ki-67≤14%；(2)Luminal B型：ER和(或)PR阳性、HER-2阳性或HER-2阴性，但Ki-67>14%；(3)HER-2过表达型：ER阴性、PR阴性、HER-2阳性；(4)三阴型：ER、PR和HER-2均阴性。

1.5 统计学方法 应用SPSS 19.0软件进行统计学分析，各组间CD90的阳性差异及其与乳腺癌临床病理特征之间的关系采用χ2检验，CD90与ER、PR、Ki-67表达的相关性采用Spearman秩相关检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CD90在不同乳腺病变组织中的表达 CD90阳性细胞主要表达于乳腺癌间质组织中，且多围绕肿瘤细胞排列(图1、2)。CD90在乳腺浸润性导管癌中的阳性率为62.5%，明显高于乳腺良性病变组织(20.0%，其中乳腺纤维腺瘤阳性3例、乳腺增生阳性1例)，两者之间差异有统计学意义(P<0.001，表1)。

①②

图1 CD90在乳腺良性病变(乳腺纤维腺瘤)中的表达，MaxVision法

图2 CD90在乳腺浸润性导管癌组织中的表达，MaxVision法

表1 CD90在不同乳腺病变组织中的表达

2.2 CD90表达与乳腺癌临床病理特征的关系 乳腺癌淋巴结转移组中CD90表达明显高于无淋巴结转移组(77.4%vs53.1%)，其差异有统计学意义(P<0.05)；CD90表达水平与患者年龄、肿瘤直径均无相关性(P>0.05)。另外，晚期病例(Ⅲ期)中CD90阳性率高于早期病例(Ⅰ+Ⅱ期)，高级别病例(Ⅲ级)中CD90阳性率明显高于低级别病例(Ⅰ+Ⅱ级)，但差异均无统计学意义(P>0.05，表2)。

2.3 CD90在乳腺浸润性导管癌不同分子亚型中的表达 在乳腺浸润性导管癌不同分子亚型中，CD90阳性率以Luminal A型最低(40.0%)、三阴型最高(82.4%)，各亚型之间的表达差异有统计学意义(P<0.05)。进一步分析证实，CD90表达在Luminal A型与Luminal B型(HER-2阴性)之间差异无统计学意义(P>0.05)；在Luminal B型中，HER-2阳性组CD90表达明显高于HER-2阴性组(71.4%vs43.5%)，其差异有统计学意义(P<0.05)；CD90在Luminal B型(HER-2阳性)、HER-2过表达型及三阴型中的表达明显高于Luminal A型和Luminal B型(HER-2阴性)，但前三者之间差异无统计学意义(P>0.05，表3)。

表2 CD90表达与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系

表3 CD90在乳腺浸润性导管癌不同分子亚型中的表达

2.4 CD90与ER、PR、Ki-67表达的相关性 Spearman相关分析显示，CD90与ER、PR表达之间呈明显负相关(P<0.05)，但与Ki-67表达无相关性(P>0.05，表4)。

3 讨论

肿瘤干细胞是一组具有自我更新、增殖及分化能力的肿瘤细胞。越来越多的研究证实，肿瘤干细胞在乳腺癌的发生、发展及转移过程中起关键作用。研究表明CD90是肿瘤干细胞的主要标志物，并且涉及多种肿瘤的发生、发展过程[7]。Lobba等[11]分别检测4株乳腺癌细胞(MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435和Hs578-T)及1株正常乳腺细胞表面标志物的表达，证实CD90在恶性细胞株中高表达，并且与乳腺癌细胞株表现不同程度的侵袭和转移潜能相关。本组实验证实CD90蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达高于乳腺良性病变，提示CD90可能在乳腺癌发生过程中起一定的作用。研究进一步证实，CD90表达与乳腺癌发生淋巴结转移明显相关，且其在晚期及高级别病例中的表达高于早期及低级别病例，提示CD90高表达可能是预测乳腺癌高转移风险或预后不良的重要指标。本实验还发现CD90阳性细胞主要表达于乳腺癌间质组织中，且多围绕肿瘤细胞排列，该结果与Zhu等[12]在胰腺癌中的发现一致[12]，由此推测CD90可能涉及肿瘤细胞与间质之间的相互作用，进而参与肿瘤的发生、发展过程。

近年来，国内外学者对乳腺癌转移与其分子分型的关系进行深入分析，证实不同分子亚型乳腺癌其转移风险及预后各不相同。研究表明Luminal型乳腺癌是临床最常见的乳腺癌分子亚型，占乳腺癌总数的65%～70%，其中ER和(或)PR阳性患者发生远处转移的风险低于阴性患者，其5～10年生存率也显著高于后者[13-14]。另外，有研究证实三阴型乳腺癌发生远处转移的风险明显高于其他亚型[1]，且预后较差。本组通过分析CD90表达与乳腺癌分子亚型的关系，证实CD90在三阴型乳腺癌中表达最高，而在Luminal A型中表达最低，其表达趋势与不同分子亚型乳腺癌转移风险的报道基本一致。有文献[5,15]证实CD90通过与其细胞受体直接结合，进而调节肿瘤细胞与微环境之间的相互作用，并进一步活化Src和NF-κB信号通路，促进各种细胞因子分泌以维持肿瘤干细胞状态。本组CD90阳性细胞主要表达于乳腺癌间质组织中，且多围绕肿瘤细胞排列，提示CD90涉及肿瘤细胞与间质之间的相互作用过程。由此推测，不同分子亚型乳腺癌具有不同的转移调控机制，而CD90可能是其中的关键调控分子。

表4 乳腺浸润性导管癌中CD90与ER、PR及Ki-67表达的相关性

本实验证实CD90表达与乳腺浸润性导管癌的免疫表型存在相关性。首先，CD90与ER、PR表达呈明显负相关，提示CD90表达越高，则ER、PR表达越低。ER、PR是判断乳腺癌内分泌治疗疗效的重要指标，其表达水平越高，提示治疗效果越好。由此推测，CD90高表达可能成为反映乳腺癌内分泌治疗反应差的间接指标。近年来，针对HER-2阳性的乳腺癌分子靶向治疗取得了重大进展，现已成为有效治疗乳腺癌的重要手段。研究证实25%～30%的乳腺癌表现HER-2基因扩增和过表达，并且是判断乳腺癌预后不良的重要指标。研究证实25%～30%的乳腺癌表现HER-2基因扩增和过表达，并且是判断乳腺癌预后不良的重要指标[16]。本组结果显示CD90在HER-2过表达型以及Luminal B型(HER-2阳性)乳腺浸润性导管癌中高表达，提示CD90可能成为乳腺癌分子靶向治疗的有效标志之一，但仍需要进一步的临床数据验证，CD90与HER-2之间的关系也有待探讨。

综上所述，CD90在乳腺癌发生、发展过程中可能发挥重要作用，其高表达提示预后不良。检测CD90的表达状况，对乳腺癌的诊断和治疗有重要的临床参考价值，同时也为探索乳腺癌发病机制及寻找新的治疗靶点提供实验依据。

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Expression of CD90 and its clinical significance in different molecular subtypes of breast invasive ductal carcinoma

YANG Hai-yu1,2, LIU Yong2, DAI Yan-zhi2, WU Xiao-xia3, HUANG Tao2, YUAN Sheng2

(1InstituteofClinicalMedicialSciences,2DepartmentofPathology,3DepartmentofPhysicalExamination,JiangxiProvincePeople’sHospital,Nanchang330006,China)

Purpose To detect the expression of CD90 in invasive ductal breast carcinoma w ith different molecular subtypes and to explore its clinical significance. Methods The expression of CD90, ER, PR, Ki-67 and HER-2 were detected in 80 cases of invasive ductal breast carcinoma tissue and 20 cases of breast benign lesion with immunohistochemical method. The relationship between CD90 and clinicopathological parameters were analyzed. Results The positive expression rate of CD90 in invasive ductal breast carcinoma and breast benign lesion tissues were 62.5% and 20.0%, respectively (P<0.001). The expression of CD90 in invasive ductal breast carcinoma was correlated with lymph node metastasis (P<0.05), but not with age, tumor size, TNM staging and histological grade (P>0.05). Among different molecular subtypes, CD90 expression level in Luminal A type was the lowest (40.0%), and the level in triple negative type was the highest (82.4%) (P<0.05). CD90 expression level was negatively correlated with ER (r=-0.342,P<0.05) or PR (r=-0.374,P<0.05) expression level, but not with Ki-67 (r=0.084,P>0.05). Conclusion The over-expression of CD90 is related with molecular subtypes of breast carcinoma, and its high expression suggests a poor prognosis.

breast neoplasm； CD90； molecular subtyping； metastasis； immunohistochemistry

时间：2017-3-16 14:23

http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170316.1423.003.html

江西省卫生厅科技计划(20143006)

江西省人民医院1临床医学研究所、2病理科、3体检科，南昌 330006

杨海玉，女，博士，副主任医师。E-mail: yanghaiyu@yahoo.com 刘 勇，男，主任医师，通讯作者。E-mail: jxpathology@126.com

R 737.9

A

1001-7399(2017)03-0245-05

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.03.003

接受日期：2017-01-09