50例浸润性导管癌声像特征与PTEN、p53、VEGF表达的相关性研究①

郑洪平，陈金凤，张雅萍，刘静华，裴元元，温丽娟，魏凤香

(深圳市龙岗区妇幼保健院,广东 深圳 518172)

50例浸润性导管癌声像特征与PTEN、p53、VEGF表达的相关性研究①

郑洪平，陈金凤，张雅萍，刘静华，裴元元，温丽娟，魏凤香

(深圳市龙岗区妇幼保健院,广东 深圳 518172)

目的：研究浸润性导管癌的声像特征与PTEN、p53 、VEGF三种标志物表达之间的关系。方法：回顾性分析经术后病理证实的浸润性导管癌50例(共50个肿块)，观察肿块的二维及彩色声像图特征，用免疫组化方法检测肿块标本PTEN、p53 和VEGF表达情况，并分析肿块声像图特征与PTEN、p53 和VEGF表达的关系。结果：(1)边缘毛刺征、肿块内回声不均匀，微小钙化、肿块血供丰富，淋巴结转移等声像图特征与PTEN阳性表达率减低、p53阳性表达率增高、VEGF阳性表达率增高相关，差异有统计学意义(P<0.05)；(2)肿块大小、肿块形态(纵横比)与PTEN低表达、p53阳性表达、VEGF阳性表达相关性分析无统计学意义(P>0.05)。结论：乳腺癌的超声表现与分子生物学之间存在一定的相关性，声像图特征可作为对病灶预后评估的重要依据之一。

乳腺癌；超声；分子生物学

2011年美国统计数据显示，乳腺癌发病率为女性恶性肿瘤之首[1],国内的统计资料也显示乳腺癌发病率呈逐年递增趋势(每年增加约2.5%)[2],广大女性的身心健康遭受严重威胁。目前超声检查方法已成为影像学检查乳腺疾病的重要方法，特征性的超声表现可以对乳腺肿块的良恶性进行鉴别。乳腺癌的形成和进展是多基因作用的结果。研究表明PTEN、p53 和VEGF三种标志物与乳腺癌的发生发展关系密切，本研究将乳腺癌肿块超声特征与癌基因表达情况相结合，探讨二者内在联系，以期通过乳腺癌声像特点为临床评估肿瘤预后提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象

收集2014-01～2016-03在深圳市龙岗区妇幼保健院手术并确诊为乳腺浸润性导管癌，并且术后均进行免疫组化的50例患者共50个肿块，患者均为女性，均为单侧发病 ，患者年龄24～75岁，平均48.3岁，肿块大小1.6cm×1.7cm×1.1cm～6.8cm×6.2cm×1.5cm，术前均未接受放化疗等治疗。

1.2 超声检查方法

主要超声诊断仪：采用西门子S2000彩色多普勒超声诊断仪，线阵探头频率4～9MHz，选择乳腺检查条件，使图像清晰显示，观察肿块大小、纵横比、边缘毛刺征、内部回声、有无微钙化、血供特点及有无腋窝淋巴结转移等情况。

1.3 病理检查

所收集的乳腺癌肿块病理结果均为浸润性导管癌。由有经验的病理学医师作出。

1.4 免疫组化检测

标本经10%甲醛固定，石蜡包埋后4μm连续切片，采用SP二步法进行免疫组化染色后进行光镜观察。免疫组化SP二步法染色方法和步骤均严格按照试剂盒的说明进行。试剂盒由福州迈新公司生产。阳性结果判定：先按着色深浅评分：0分为不着色，1分为染色呈淡黄色，2分为染色呈棕黄色，3分为染色呈棕褐色为；再按染色细胞占有的百分数评分： 0分为无阳性细胞，1分为1%～10%，2分为11%～50%，3分为51%～80%，4分为81%～100%。将前两项得分的乘积作为该病例得分，乘积在3分及3分以上定为阳性(记做+)。

1.5 统计学方法

采用SPSS16.0 统计学软件，对各组资料进行χ2检验，以P<0.05认为差异具有显著性，具有统计学意义。

2 结果

2.1 主要超声表现

50例浸润性乳腺癌肿块，肿块直径<2cm的占42%(21/50)，>2cm的占58%(29/50)，肿块纵横比>1的占18%(9/50)；有毛刺征的占62%(31/50)；内部回声不均的占86%(43/50)；有微小钙化的占38%(19/50)；有腋窝淋巴结转移的占26%(13/50)；2～3级血供的占78%(39/50)。

2.2 乳腺癌超声征象与PTEN、p53、VEGF表达的关系

见表1。有毛刺组与无毛刺组PTEN、p53、VEGF表达的阳性率分别为19.4%、83.9%、71.0%及63.2%、36.8%、26.3%，两组差异有统计学意义(P<0.05)；内部回声均匀组与不均匀组中PTEN、p53、VEGF表达的阳性率分别为85.7%、14.3%、28.6%及27.9%、74.4%、58.1%，两组差异有统计学意义(P<0.05)；有微小钙化组与无微小钙化组中PTEN、p53、VEGF表达的阳性率分别为10.5%、89.5%、73.7%及51.6%、51.6%、41.9%，两组差异

有统计学意义(P<0.05)；有淋巴结转移组与无淋巴结转移组中PTEN、p53 、VEGF表达的阳性率分别为7.7%、92.3%、92.3%及45.9%、56.8%、51.4%，两组差异有统计学意义(P<0.05)；血供0～1级组及血供2～3级组中PTEN、p53 、VEGF表达的阳性率分别为72.7%、36.4%、27.3%及25.6%、74.4%、61.5%，两组差异有统计学意义(P<0.05)；肿块<2cm组及肿块>2cm组两组中PTEN、p53 、VEGF表达的阳性率分别为33.3%、66.7%、52.4%及37.9%、65.5%、55.2%，两组差异无统计学意义(P>0.05)；肿块纵横比>1及纵横比<1两组中PTEN、p53 、VEGF表达的阳性率分别为55.6%、66.7%、44.4%及31.7%、65.9%、56.1%，两组差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 乳腺癌超声征象与PTEN、p53 、VEGF表达的关系

3 讨论

浸润性导管癌占所有乳腺癌分类中的70%，发病率最高，具有明显的恶性超声征象，即肿块边缘毛刺征、内部回声分布不均、微小钙化征、血供丰富、伴腋窝淋巴结转移等，尤其是边缘毛刺征尤为重要，是超声诊断乳腺癌的经典指标，表明肿瘤浸润性生长的特性，本组50例病例中具有边缘毛刺征者有31例，占62%，远高于边缘无毛刺征组(19例，占38%)。Dendorfer等[3]学者认为乳癌内部回声以分布不均匀为主，多表现为较杂乱的低回声，若发生出血、坏死可见形态不规则的液性暗区，表明肿瘤生长快速，血供相对不足所致，本组50例肿块中回声分布不均匀的43例(占86%)，占绝大部分。微小钙化是指<1mm的强回声点，多呈簇状分布，是恶性肿瘤较可靠的指征,本组病例微小钙化阳性率为38%,阳性率虽然不高，但一旦出现提示恶性可能。乳腺恶性肿块的血流信号明显多于良性肿块，血管分布多位于肿块的中央，而且走形弯曲，粗细不均，分布杂乱，本研究中肿块2～3级血流者为39例(占78%)，明显高于0～1级血流者(11例，占22%)。腋窝淋巴结转移是影响乳腺癌预后的重要因素，直接关系到外科手术方式的选择及手术范围的大小。本组病50例肿块中发生腋窝淋巴结转移的有13例(占26%)。

PTEN是一种抑癌基因,在正常情况下具有调节细胞生长、增殖、迁移、分化等多种效应[4]。乳腺癌的发生及进展与PTEN基因的失活或基因突变密切相关，Lebok等[5]对2197例乳腺癌组织芯片进行荧光原位杂交PTEN基因分析，结果显示PTEN缺失发生在部分乳腺癌中且与肿瘤的恶性行为呈现相关性。Luo等[6]综合PubMed、EMBASE等数据库进行meta分析，结果显示PTEN启动子甲基化阻碍基因表达，与乳腺癌高密切相关，可作为有价值的生物标志物诊断乳腺癌。可见，PTEN基因的缺失或蛋白表达水平的下降, 可作为乳腺癌恶性程度高及预后差的观察指标。本研究结果显示PTEN在50例乳癌中阳性表达率为36%(18/50), 与Vitolo等[7]研究报道一致。声像图表现为边缘毛刺、内部回声不均匀、有微小钙化、有淋巴结转移、血供丰富等征象与PTEN表达率减低相关，差异有统计学意义(P<0.05)。由此可见上述超声征象可作为乳腺癌恶性程度高，预后差的影像学依据。

p53基因存在两种类型：野生型和突变型，野生型p53是一种抑制肿瘤基因[8]，突变型p53基因可与蛋白激酶等因子协同作用，通过刺激肿瘤新生血管生成而具有肿瘤基因的特性,突变型p53基因在临床上可通过免疫组化的方法进行检测，检测到p53蛋白阳性即可认为存在p53 基因突变[9]。avidoff[10]等研究表明，在乳腺癌组织中p53蛋白的阳性率为20%～60%，p53异常表达与和病程晚期、肿瘤转移呈正相关，从而证明p53蛋白过度表达是乳腺癌预后不良的指标之一。有研究[11]显示，p53表达异常的肿瘤表现为恶性程度高，向周围组织侵浸润能力强、远处淋巴结转移早等特性，且对放化疗均不敏感，由此可见p53异常表达的肿瘤预后极差。上述多项研究均表明p53蛋白可作为肿瘤恶性程度高，预后极差的指标之一。本组研究中p53的阳性率为66%(33/50)，与avidoff等的研究结果一致，在有腋窝淋巴结转移组、边缘有毛刺征组、内部回声不均匀组、有微小钙化组、血供2～3级组中p53表达的阳性率明显增高，有统计学意义。因此上述超声征象可作为乳腺癌侵袭性强，预后差的影像学参考。

VEGF即血管内皮生长因子，能正性刺激血管内皮细胞生长增殖，促进新生毛细血管网的建立[12]。肿瘤的血管、淋巴管生成是肿瘤生长和转移的关键，VEGF参与了肿瘤的新生血管生成和淋巴管的形成，肿瘤血管增多，为肿瘤生长提供更多的营养支持，淋巴管的形成更有力于肿瘤细胞到达淋巴结而完成淋巴结转移。因此VEGF对乳腺癌肿块的迅速增长、淋巴结转移等具有极大的促进作用。本研究结果显示在50例乳腺癌中VEGF阳性表达率为54%(27/50)，有腋窝淋巴结转移组VEGF阳性表达率达92.3%，远高于较无腋窝淋巴结转移组病；血供2～3级组中VEGF表达的阳性率61.5%，远高于血供0～1级组病例；边缘有毛刺、内部回声不均匀、微小钙化组VEGF阳性表达率高亦明显增高，差异均具有统计学意义。上述结果再次说明上述超声征象可作为乳腺癌生长迅速，发生淋巴结转移风险高的影像学参考。

综上所述，肿块的边缘毛刺征，内部回声不均匀，微钙化，血供丰富、腋窝淋巴结转移等征象与PTEN、p53、VEGF异常表达相关。乳腺癌的超声特征在一定程度能够反映出乳腺癌的分子生物学特性。因此上述超声表现可作为评估乳腺癌不良的参考依据之一。由于本样本量较少(50例)，得出的结果可能存在一定的偏差，在今后的研究工作中应扩大样本量，继续深入研究。

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深圳市龙岗区科创委资助项目,编号：LG20140606124437。

郑洪平(1975～)女，黑龙江佳木斯人，副主任医师。

魏凤香(1974～)女，黑龙江佳木斯人，博士，副教授，硕士研究生导师。E-mail:weifengxiang1974@163.com。

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1008-0104(2017)02-0061-03

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