肾毒宁颗粒剂对慢性肾衰竭大鼠抗氧化作用研究

胡双燕 熊荣兵 傅晓骏#

1 浙江中医药大学第三临床医学院 浙江 杭州 310053 2 浙江省金华市中医医院 浙江 金华 321017

肾毒宁颗粒剂对慢性肾衰竭大鼠抗氧化作用研究

胡双燕1熊荣兵2傅晓骏2#

1 浙江中医药大学第三临床医学院 浙江 杭州 310053 2 浙江省金华市中医医院 浙江 金华 321017

目的：研究肾毒宁颗粒剂抗氧化应激的作用及延缓慢性肾功能衰竭进展的可能作用机制。方法：Platt法5/6肾切除慢性肾衰大鼠模型，术后一周下颌静脉采血，测定肾功能，根据肌酐分组，分为肾毒宁颗粒低、中、高剂量组，科素亚组，另设正常组，模型组，每组18只，灌胃60天，在处死大鼠前1天收集24h尿液，测定24h尿蛋白定量,处死大鼠测定尿素氮（Bloodureanitrogen，BUN）、血肌酐（serumcreatinine，Scr）、24h尿蛋白含量、超氧化物歧化酶（SuperoxideDismutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）。结果：与模型组比较，各治疗组BUN、Scr、24h尿蛋白含量表达均下降，SOD升高，MDA表达均下降(P＜0.05)，肾毒宁颗粒低，中，高剂量组与科素亚组间无统计学差异。结论：肾毒宁颗粒剂可降低大鼠BUN、Scr、24h尿蛋白含量，保护肾功能，并可以降低MDA，提高大鼠SOD含量提高抗氧化能力。

慢性肾衰竭 氧化应激 抗氧化 肾毒宁 实验研究

为探讨肾毒宁颗粒剂及其不同剂量具有的抗氧化应激，延缓慢性肾功能衰竭进展作用功效，探讨肾毒宁的作用是否存在剂量相关性，我们进行了此项研究，现报道如下。

1 材料

1.1 实验动物:健康成年雄性SD大鼠(SPF级)120只，8周龄,体重(200±20)g，由上海西普尔-必凯实验有限公司提供。大鼠分笼饲养于25℃12h光照、45%湿度的环境中，自由饮水，进食标准普通饲料。

1.2 试验药物和使用剂量:肾毒宁颗粒（广东一方制药有限公司，主要成分:黄芪、仙灵脾各30g，沉香粉2g，丹参、制大黄各15g，桃仁10g，黄精20g)。高剂量为人鼠计量20倍换算，低剂量5倍，中剂量为10倍。科素亚（杭州默沙东制药有限公司生产）大鼠用量按照人鼠计量10倍剂量换算为=100×6/70=8.6mg/kg/d。每日每只予相应药液2ml灌胃。正常组和模型组给予2ml生理盐水灌胃。

1.3 主要试剂及仪器:全自动生化分析，尿素氮（Bloodureanitrogen，BUN）、血肌酐（serumcreatinine，scr）、24h尿蛋白含量、超氧化物歧化酶（SuperoxideDismutase，SOD）、脂质过氧化物丙二醛（malondialdehyde， MDA）试剂购自由南京建成生物工程研究所。

2 方法

2.1 模型制作:大鼠适应性饲养1周后，以2%戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻醉，备皮，用碘酒、75%酒精消毒手术区后铺巾，距左脊肋骨1.5cm处斜向外方切口,经后腹膜取肾,暴露肾脏,分离肾周脂肪后,弧型切除2/3肾组织(主要切除皮质部分)，用明胶海绵压迫止血片刻,再滴加数滴纤维蛋白原和凝血酶溶液,稍等片刻,当切面上不再有活动性出血后复位剩余左肾,缝合；1周后再次手术切除整个右肾。另取正常SD大鼠15只,造模步骤同上,但不切除肾组织，仅剥离左右肾包膜,保留肾上腺,作为模型组。正常组正常饲养,不做处理。

2.2 实验分组:动物模型造模后1周测定大鼠血肌酐，根据肌酐随机分组。剔除手术死亡的大鼠12只，每组18只，共6组。分为A组（正常），B组（模型），C组（肾毒宁颗粒），其中肾毒宁颗粒组又分低、中、高剂量组（分别为C1、C2、C3组），D组（科素亚组）。

2.3 干预方案:Platt模型制备成功并按照血肌酐分组后，肾毒宁颗粒方组中药每日灌胃，高剂量为人鼠计量20倍换算，低剂量为人鼠计量5倍换算，中剂量为鼠计量10倍换算。对照组科素亚每日灌胃，大鼠用量按照人鼠计量10倍剂量换算为=100×6/70=8.6mg/kg/d，共60天。灌胃容积控制在2ml以下。正常组和模型组同体积生理盐水灌胃。

2.4 取材、观察指标及检测方法：分述如下。

2.4.1 取材:治疗结束后各组大鼠首先分别置代谢笼内留取24h尿液,-70℃保存；末次给药后禁食12h,摘眼球采血,分离血清后待测-70℃保存，并取肾皮质加0.9%生理盐水制成匀浆,取上清液备测。

2.4.2 观察指标:血清BUN、Scr、24h尿蛋白含量、SOD、MDA。

2.4.3 检测方法:全自动生化分析仪测定血BUN、Scr水平；磺柳酸比色法检测24h尿蛋白含量；化学比色法测定肾皮质SOD和MDA水平。

2.5 统计学方法:计量资料用-x±s表示，应用SPSS17.0软件进行统计分析,组间比较用单因素方差分析检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 死亡情况:在实验过程中，共有6只大鼠死亡，其中肾毒宁低剂量组1只，中剂量组1只，高剂量组2只，科素亚组2只。

3.2 各组大鼠血清Scr、BUN及24h尿蛋白定量统计结果情况:见表1。各组大鼠血清Scr、BUN及24h尿蛋白定量与模型组比较明显降低(P＜0.05)，而各治疗组（C1组，C2组，C3组，D组）比较无明显差异（P＞0.05）；肾毒宁中,高剂量组具有相对明显的降尿蛋白定量作用。

表1 各组大鼠血清Scr、BUN及24h尿蛋白定量比较（±s）

表1 各组大鼠血清Scr、BUN及24h尿蛋白定量比较（±s）

注:与A组比较,*P＜0.05；与B组比较,▲P＜0.05。

组别 例数Scr(mmol/L)BUN(mmol/L) A组B组C1组C2组C3组D组6.86±0.63▲19.58±3.66*15.44±2.66*▲14.65±2.34*▲14.47±2.03*▲16.20±2.40*▲18 18 17 17 16 16 24尿蛋白定量(mg/24h) 41.99±12.7▲243.76±94.33*168.31±24.25*▲157.07±23.91*▲153.14±24.63*▲175.36±35.34*▲29.47± 4.40▲91.47±21.02*56.54±11.95*▲54.01±11.98*▲52.23± 9.41*▲60.70± 9.61*▲

3.3 各组大鼠血清SOD、MDA统计结果情况:见表2。与模型组比较，各组血清SOD明显升高，有统计学意义(P＜0.05)；血清MDA明显降低，有统计学意义（P＜0.05）。而各治疗组比较无明显差异（P＞0.05）；各治疗组中，肾毒宁低,中剂量组提高SOD含量，降低MDA含量效果更优。

4 讨论

肾毒宁颗粒由黄芪、仙灵脾、沉香粉、丹参、制大黄、桃仁、黄精组成，方中黄芪性温，有益气、升阳、补虚、消肿的功效，通过抗氧化、清除自由基、促进细胞

代谢、利尿消肿、减少尿白蛋白排泄、促肝脏合成白蛋白、降脂、调节免疫、降血压等作用，保护肾脏细胞免受伤害,保护残存肾单位,延缓肾脏疾病进展的作用。仙灵脾性温，有温肾、助阳、填补精气作用，可以升高SOD水平，增加清除自由基能力，减少MDA的增多，从而增强组织抗氧化系统，对抗自由基损伤，具有抗氧化、延缓衰老的作用。沉香性温味辛，有行气止痛，温中止呕，纳气平喘作用，沉香挥发油能通过增强细胞内抗氧化酶活力，保护细胞对抗氧化损伤，减少细胞内活性氧水平，显著增强细胞内抗氧化酶SOD、GSH-Px活力，减少MDA生成，具有一定的抗氧化作用。丹参微寒，有益气补血活血之功效，丹参的脂溶性有效单体丹参酮ⅡA治疗后，可使大鼠血清Bun、Cr水平降低、SOD活力明显升高，MDA含量明显降低。丹参酮ⅡA可以通过改善大鼠肾组织的氧化应激，减少尿蛋白、改善肾功能和延缓肾脏损害。大黄性寒有清热泄浊、活血通便作用，泻下作用增加肠道对尿毒症毒素排泄,现代药理研究证实,大黄具有清除氧自由基、调节脂质代谢、抗菌消炎、调节免疫、拮抗炎性细胞因子等作用。桃仁性平而活血祛瘀，能提高肾脏血流量,改善微循环和提高组织胶原酶活性,从而促进肾内的胶原分解、代谢,减少肾内胶原的含量,改善肾纤维化。黄精性平而益肾补精，具有抗氧化、抑制体内氧化应激水平、减轻肾组织氧化应激损伤的作用[1]。本实验研究结果证实，肾毒宁颗粒剂具有一定的肾保护作用，其机制可能与其改善抗氧化作用有一定的关系，其具体作用机制待进一步研究。

表2 各组大鼠血清SOD、MDA比较（±s）

表2 各组大鼠血清SOD、MDA比较（±s）

注:与A组比较，*P＜0.05；与B组比较，▲P＜0.01，◆P＜0.05。

MDA(nmol/ml) 6.70±1.12▲16.71±2.11*9.11±1.30*◆8.89±0.97*◆8.67±1.76*◆9.73±1.69*◆组别A组B组C1组C2组C3组D组例数18 18 17 17 16 16 SOD(U/ml) 133.97±37.14▲76.71±15.76*113.85±19.28*◆106.96±20.17*◆116.00±19.16*◆116.23±21.06*◆

[1]郎旭军,傅晓骏,成栋,等.肾毒宁冲剂抗慢性肾衰大鼠自由基损伤的实验研究[J].浙江中医杂志,2007,42（10）:602-604.

2016-09-23

浙江省自然科学基金项目肾毒宁对肾衰大鼠HO-1蛋白基因表达及Nrf2/ARE信号通路的影响，编号：LY15H270001

# 通讯作者：傅晓骏,E-mail：fuxiaojun@medmail.com.cn