铁皮石斛当归复方提取液对2型糖尿病小鼠降糖作用研究*

戴明珠 王楠楠 徐俞悦 苏 洁 颜美秋 吕圭源 陈素红，3#

1 温州医科大学 浙江 温州 325035 2 浙江中医药大学 浙江 杭州 310053 3 浙江工业大学 浙江 杭州 310014

铁皮石斛当归复方提取液对2型糖尿病小鼠降糖作用研究*

戴明珠1王楠楠1徐俞悦1苏 洁2颜美秋2吕圭源2陈素红1，3#

1 温州医科大学 浙江 温州 325035 2 浙江中医药大学 浙江 杭州 310053 3 浙江工业大学 浙江 杭州 310014

铁皮石斛当归复方提取液 链脲佐菌素 2型糖尿病 小鼠 实验研究

糖尿病（DM）是一组以高血糖为特征的终身性代谢疾病，易导致肾、眼、心脏、血管、神经的慢性损害和功能障碍[1]。中医对糖尿病的认识始于《素问·阴阳别论》:“二阳结谓之消。”《金匮要略》:“病者如热状，烦渴，口干燥而渴，其脉反无热，此为阴伏，是瘀血也。”即瘀可致消。《诸病源候论·消渴候》则以“消渴”为病证总名。现代中医对糖尿病的治则为“益气养阴、活血化瘀”[2]。本实验根据国家食品药品监督管理局（CFDA）《辅助降血糖功能评价方法》，将养阴药铁皮石斛与养血活血药当归联用，观察铁皮石斛当归复方提取液对高糖高脂加链脲佐菌素（STZ）诱导的2型糖尿病小鼠降血糖作用。

1 材料与方法

1.1 药物:铁皮石斛由浙江金华寿仙谷药业有限公司提供，当归由浙江中医药大学中药饮片厂提供。铁皮石斛当归复方提取液（TDF）即铁皮石斛、当归经水提取后配制成含生药量0.15、0.3、0.6g/ml药液。

1.2 动物:ICR小鼠，雄性，20～22g，浙江省实验动物中心提供，许可证号SCXK（浙）2014-0001。

1.3 试剂:链脲佐菌素（STZ，批号S0130，Sigma公司）；高糖高脂饲料（浙江省实验动物中心）；葡萄糖（GLU）（批号10010518，国药集团化学试剂有限公司）；葡萄糖试剂盒，批号15110201；甘油三酯（TG）试剂盒，批号15121501；总胆固醇（TC）试剂盒，批号15110401，宁波康美生物科技有限公司；胰岛素（INS）测试盒，批号20160103，上海源叶生物科技有限公司。

1.4 仪器:TBA-40FR全自动生化分析仪（东芝医疗系统株式会社）；Powerwave 340酶标仪（Bio-TEK公司）；雅培安妥超越血糖仪、血糖试纸（Abbott公司）。

1.5 正常小鼠降糖实验：ICR小鼠分为正常对照组和TDF（6.0g/kg）组，每组15只。分别灌纯化水与提取液，连续30d，末次给药后禁食4h，测空腹血糖（FBG）值。

1.6 2型糖尿病模型小鼠降糖实验：分述如下。

1.6.1 造模与给药:雄性ICR小鼠分为正常对照组、模型对照组和TDF（1.5、3.0、6.0g/kg）组，每组15只。TDF组灌规定浓度提取液，模型对照组灌纯化水，连续30d。各组给予普通饲料，1周后模型对照组和TDF组更换高糖高脂饲料，喂饲3周后，模型对照组和3个剂量禁食24h，给予1%STZ 80mg/kg BW腹腔注射，注射后继续给予高糖高脂饲料5天。实验结束。

1.6.2 FBG、口服葡萄糖耐量（OGTT）:末次给药后禁食4h，测定空腹血糖即给葡萄糖前（0h）血糖值和血糖曲线下面积，各组按规定给药，15min后灌予葡萄糖2.5g/kg BW，测定给葡萄糖后0.5、2h的血糖值及血糖曲线下面积。血糖曲线下面积（AUC）＝（0h血糖值+0.5h血糖值）×0.5/2+（2h血糖值+0.5h血糖值）×1.5/2。

1.6.3 总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）:末次给药后禁食4h，检测血清TC、TG水平。

1.6.4 胰岛素（INS）、胰岛素抵抗指数（IR）:末次给药后禁食4h，检测INS水平，并计算IR。

1.7 统计学方法:计量资料数据以-x±s表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 对正常小鼠体重及空腹血糖的影响:TDF 6.0g/kg

对正常小鼠体重及空腹血糖无明显影响。见表1。

表1 TDF对正常小鼠体重、空腹血糖影响（±s）

表1 TDF对正常小鼠体重、空腹血糖影响（±s）

空腹血糖（mmol/L）7.03±1.27 6.95±1.16组别正常对照组TDF组剂量（g/kg）--6.0体重（g）38.55±3.54 38.57±3.14

2.2 对2型糖尿病小鼠FBG、OGTT、AUC的影响:与正常对照组比较，给予葡萄糖0、0.5、2h，模型对照组血糖值及AUC均显著升高（P＜0.01）；与模型对照组比较，TDF1.5、3.0g/kg组各时间点血糖值及AUC均呈下降趋势，其中1.5g/kg组0、2h血糖值及AUC明显下降（P＜ 0.05）。提示TDF 1.5g/kg可降低糖尿病小鼠空腹及餐后2h血糖值，并提高糖耐量。见表2。

表2 TDF对2型糖尿病小鼠空腹血糖及糖耐量的影响（±s）

表2 TDF对2型糖尿病小鼠空腹血糖及糖耐量的影响（±s）

注:与正常对照组比较，#P＜0.01；与模型对照组比较，*P＜0.05。

组别血糖（mmol/L）AUC正常对照组模型对照组TDF组TDF组TDF组0.5h 9.07±1.24 17.43±3.02#15.93±1.58 17.05±2.53 17.25±2.12剂量（g/kg）----1.5 3.0 6.0 0h 8.63±1.37 12.50±2.39#10.81±2.01*11.94±2.62 12.55±4.59 2h 5.99±1.16 12.11±3.72#10.05±2.22*10.99±2.39 10.87±3.56 15.72±1.79 29.63±5.86#26.17±2.54*28.34±3.71 28.43±4.05

2.3 对2型糖尿病小鼠TC、TG水平的影响:与正常对照比较，模型对照组血清TC、TG水平显著升高（P＜0.01）；与模型对照组比较，TDF 1.5g/kg组TC、TG水平均呈下降趋势，其中TC水平明显降低（P＜0.05）。提示TDF 1.5g/kg具有降低糖尿病小鼠血清TC功能。见表3。

表3 TDF对2型糖尿病小鼠TC、TG水平影响（±s）

表3 TDF对2型糖尿病小鼠TC、TG水平影响（±s）

注:与正常对照组比较，#P＜0.01；与模型对照组比较，*P＜0.05。

TG（mmol/L）2.09±0.61 1.24±0.33#1.07±0.27 1.24±0.17 1.18±0.14组别正常对照组模型对照组TDF组TDF组TDF组剂量（g/kg）----1.5 3.0 6.0 TC（mmol/L）3.55±0.62 6.77±1.11#6.11±0.67*6.20±1.03 6.49±1.28

2.4 对2型糖尿病小鼠INS、IR的影响:与正常对照组比较，模型对照组IR显著升高（P＜0.01）；与模型对照组比较，TDF 1.5g/kg组IR明显下降（P＜0.05）。提示TDF 1.5g/kg可提高糖尿病小鼠靶组织对胰岛素的敏感性。见表4。

表4 TDF对2型糖尿病小鼠INS、IR的影响（±s）

表4 TDF对2型糖尿病小鼠INS、IR的影响（±s）

注:与正常对照组比较，#P＜0.01；与模型对照组比较，*P＜0.05。

IR 16.05±3.22 22.69±4.18#19.81±3.57*21.97±5.01 22.76±8.25组别正常对照组模型对照组TDF组TDF组TDF组剂量（g/kg）----1.5 3.0 6.0 INS（mIU/L）41.80±4.76 41.00±2.75 41.38±2.30 41.40±2.55 40.89±1.64

3 讨论

铁皮石斛味甘，性偏寒，具有滋阴、清热、润燥作用，用于高热、内热消渴者，脾胃虚寒的糖尿病患者则不宜连续服用；当归味甘，性温，为补血活血之要药。铁皮石斛佐以当归，一可起到相成作用，发挥补血活血之作用，直达病所；二加强或与铁皮石斛共同发挥降糖作用，增强药效；三以消除或减缓石斛的寒性，增加适应症、扩大应用人群。二药均为可用于保健食品的中药材（见卫生部2014版《药食同源目录》）。

造模前，小鼠精神状况良好，毛色光泽均匀，饮食饮水及大小便正常；造模后，模型组逐渐出现精神萎靡，掉毛，多饮，小便异味[3]，个别出现皮肤溃烂等感染现象；TDF组较模型组状态佳。模型对照组0.5h血糖值≥10mmol/L，且较正常对照组0.5、2h血糖均升高，AUC升高，差异有显著性，判定模型糖代谢紊乱成立，在此基础上，模型对照组IR明显升高，差异有显著性，判定胰岛素抵抗糖/脂代谢紊乱模型成功。提示STZ可能仅损伤部分胰岛β细胞，剩余部分可代偿性分泌胰岛素，使其水平不降低，但组织对INS敏感性和反应性降低，不能摄取、储存和利用葡萄糖，即出现糖尿病症状。经TDF治疗后，糖尿病小鼠对INS敏感性增加，OGTT提高，餐后血糖值降低，提示TDF对2型糖尿病小鼠的降糖机制与改善胰岛素抵抗有关。

中药对复杂疾病的治疗一直具有其独特的作用和优势:不单改善症状，更能全面调理人体机能，恢复血管弹性，增加心、肝、肾、视网膜等组织营养性血流量，克服化学合成药的副作用和诱发的并发症；中药复方多成分、多靶点、多种作用机制的特征符合复杂疾病的治疗要求。可见，中医药治疗糖尿病值得进一步研究。

[1]Looker A C，Eberhardt M S，Saydah S H.Diabetes and fracture risk in older US adults[J].Bone，2016（82）:9-15.

[2]杨启悦，张帅，谢春光，等.参芪复方防治糖尿病大血管病变机制研究[J].中草药，2014，45(8):1179-1183.

[3]潘晓琼.升清降糖合剂对糖尿病大鼠胰岛β细胞的保护作用及机制研究[J].浙江中医杂志，2016，51(9):639-641.

2017-01-22

国家自然科学基金项目基于“肝/肾-肠轴”的铁皮石斛叶黄酮碳苷抗高尿酸血症伴高血压的机制研究，编号：81673638；国家科技支撑计划项目课题芡实等8种大宗中药材质量标准提高及其综合利用研究，编号：2011BA104B06

# 通讯作者：陈素红，E-mail：chensuhong@aliyun.com