湖北省武汉市某门诊犬瘟热病例统计分析

李文珂，薛明珠，李 丹，董 俊，王明月，张经纬，孙雅念，陈建国，，胡长敏，，周东海，，丁明星，，张安定，3，韩 丽，

（1. 华中农业大学动物医学院，湖北武汉 430070；2. 华中农业大学动物医院，湖北武汉 430070；3. 农业部兽用诊断制剂创制重点实验室，湖北武汉 430070）

湖北省武汉市某门诊犬瘟热病例统计分析

李文珂1，薛明珠2，李 丹1，董 俊1，王明月1，张经纬1，孙雅念2，陈建国1，2，胡长敏1，2，周东海1，2，丁明星1，2，张安定1，3，韩 丽1，2

（1. 华中农业大学动物医学院，湖北武汉 430070；2. 华中农业大学动物医院，湖北武汉 430070；3. 农业部兽用诊断制剂创制重点实验室，湖北武汉 430070）

为了解武汉市犬瘟热的流行情况，以华中农业大学动物医院的临床病例为研究对象，应用胶体金试纸条和RT-PCR检测技术，调查了2015年9月至2016年10月间的门诊犬瘟热病例情况。本次调查共对2 967只门诊犬进行了犬瘟热检测，其中检出阳性143只，阳性检出率为4.8%。从时间分布看，该期间大部分月份的犬瘟热检出阳性率在4%～5%之间，但在气温变化大的10月份较高，约为9%。从群间分布看，耐寒的金毛、萨摩耶、哈士奇、阿拉斯加犬以及耐热惧寒的贵宾犬的阳性比例较高，总占比为54.5%；雄性犬阳性数量明显高于雌性犬；发病犬的年龄分布和犬瘟热的流行特点基本一致，以2～4月龄为主。调查发现，疫苗免疫可明显降低犬瘟热的发病率和患病犬体内的病毒含量。本研究结果在一定程度上反映了该病在武汉市的流行特点，并为该病的防治提供了重要的参考资料。

犬瘟热；犬瘟热病毒；流行病学；发病率；胶体金试纸条；RT-PCR

犬瘟热（Canine distemper，CD） 是由犬瘟热病毒（Canine distemper virus，CDV）感染引起的急性、热性、高度接触性传染病，主要临床特征是双相热，眼、鼻、消化道等处的粘膜炎症，以及卡他性肺炎、皮炎及神经症状[1-2]，常引起犬科、鼬科和部分浣熊科动物发病，病死率差异较大，一般在30%～80%之间波动[2]。近年来，随着我国伴侣动物饲养量以及异地交流量的增加，犬瘟热在我国犬中的发病率和病死率均有增高的趋势[3]。华中农业大学动物医院的传染病临诊病例，不仅数量多，而且覆盖了武汉市各区，是武汉市最具代表性的伴侣动物医院。因此，本研究以华中农业大学动物医院的门诊犬为代表，对2015年9月至2016年10月间的犬瘟热发病情况做一调查，从而掌握该病的流行特点，并为该病的防治提供参考。

1 材料和方法

1.1 主要仪器

Eppendorf高速冷冻离心机；博日科技有限公司生产的核酸扩增仪；北京六一公司生产的核酸电泳系统。

1.2 主要试剂

TRIzol Reagent，Invitrogen公司产品；Reverse Transcriptase XL（AMV） 反 转 录 酶、dNTPs、ExTaq DNA聚合酶、DL-2000 DNA Marker，均为宝生物工程（大连）有限公司产品。

1.3 病料

2015年9月至2016年10月，于华中农业大学动物医院采集了2 967份患病犬的鼻咽拭子。将鼻咽拭子浸在含有青霉素、链霉素的灭菌生理盐水中，迅速送往实验室检测。

1.4 胶体金试纸条检测

将所采集的鼻咽拭子，采用韩国Bioindist公司生产的胶体金试纸条进行CD检测。

1.5 RT-PCR检测

参 照 文 献[4-5]中 建 立 的CDV RT-PCR检测方法，选择H基因的保守区域作为PCR扩增的靶序列，合成1对扩增760 bp的引物，P1：5'-CTTGTGTGTAGAAGAGAGC-3'；P2：5'-ATAAGAAATCGTCCGGATTG-3'。引物合成由上海生物工程公司完成。

将采集的鼻咽拭子先进行胶体金试纸条检测，若为阴性，但来源犬的临床症状明显，就采用如下RT-PCR方法复检。将采集的鼻咽拭子，先按照TRIzol Reagent使用说明书进行RNA抽提，后使用P1引物进行反转录，获得cDNA，再按照94 ℃预变性5 min，94 ℃变性30 s，61 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，30个循环，最后72 ℃延伸10 min的程序进行PCR扩增。对扩增产物采用琼脂糖电泳方法进行鉴定。

2 结果与分析

2.1 时间分布

本研究统计了华中农业大学动物医院自2015年9月至2016年10月就诊犬的CD发病情况。将所有的2 967只疑似发病犬，采用韩国Bioindist公司生产的犬瘟热胶体金检测试纸和RT-PCR方法进行诊断，结果检出阳性143只（图1），检出阳性率为4.8%。

图1 犬瘟热阳性病例数以及就诊犬病例数

对该期间各月份的CD检出阳性率进行分析，发现大部分月份的检出阳性率在4%～5%之间，但2015年10月和2016年10月的较高，分别为9.7%和8.8%，这可能与武汉市10月份气温多变有关。另外，2016年1月和5月的检出阳性率较低，均在3%以下。这是否与1月份含有春节、5月份武汉市气候最适宜等原因有关，值得深入探究。

2.2 群间分布

本研究对CD阳性犬的品种、性别、年龄进行相关分析，发现金毛、萨摩耶、哈士奇和阿拉斯加等耐寒犬种以及贵宾犬等耐热惧寒犬种的比例较高，总占比为54.5%（图2）。虽然不清楚不同品种犬在武汉市的实际饲养量，但本研究仍可提示，对于金毛、贵宾、萨摩耶、哈士奇、阿拉斯加等犬种，易受到CDV的侵袭。

图2 不同品种犬瘟热病犬的阳性率占比

本研究对阳性犬的性别进行了分析，发现雌性犬占28.5%，而雄性则高达71.5%。由于不清楚本地区雌性和雄性犬的准确饲养数量和比例，因此不能确定雄性犬更易感。

本研究对阳性犬的年龄进行了分析，发现2月龄以内的仔犬占比较少，仅为5.1%，这可能与母源抗体的保护有关；2～4月龄幼犬占比较高，达到61.6%；超过5月龄犬的占比较低，超过2岁犬的占比更低（图3）。这与CD的流行特点基本一致[1-2]。

本研究对阳性犬的免疫状态进行了调查，发现未免疫或未按照规定免疫犬的占比为68.3%，而免疫犬的占比仅为19.0%。这说明疫苗免疫可预防该病的发生，但不能提供完全保护。另外，免疫期间（首免至完成免疫的时期）的阳性犬占比为12.7%，但该年龄段的阳性比例高达61.6%，这意味着免疫可有效降低发病率。遗憾的是，由于难于对犬的饲养规模和免疫状态进行大规模调查，本研究仅从就诊阳性犬是否免疫进行分析，不能精确反应免疫对降低发病率的影响程度，但仍可提示免疫对防控该病的重要性。

图3 犬瘟热阳性犬中不同年龄犬的占比

进一步对检测阳性和免疫情况进行联合分析，发现所有检测为强阳性（++++）的均为非免疫或未按规定免疫的犬；弱阳性（+）的在非免疫或未按规定免疫犬中的占比为55%，但在免疫犬中的占比高达76%。这说明即是在发病犬中，免疫犬的病毒含量也相对较低，进一步证明了疫苗免疫的效果。

3 讨论

本研究以华中农业大学动物医院门诊犬为代表，对2015年9月至2016年10月期间的CD阳性情况进行了分析。由于胶体金检测技术的敏感性较低，因此对临床疑似，但胶体金检测为阴性的犬，采用RT-PCR方法进行复检。整体而言，本调查的CD阳性率略低于李华坤等[6]所调查的徐州地区（6.6%），也明显低于黄淑芬等[8]所调查的广州地区（13.1%）、杨学梅等[9]所调查的延边地区（49%）、刘靖清[10]所调查的盐城地区（33.3%），但明显高于李钦等[7]所调查的上海地区（0.57%）。由于这些调查研究中的样本数差别较大，采用的检测技术的敏感性也有差异，因此很难确认各地区的CD发病情况具有可比性，这表明开展更加系统的流行病学分析十分必要。

通过对时间分布分析发现，大部分月份的月检出阳性率较一致，主要在4%～5%之间，但10月份的阳性率较高，1月、5—6月的较低。通过比较其他地区门诊阳性的比例发现，只有广州市与此类似[11]，其他地区的调查结果与此相差较大[6-11]，这可能与地域和气候差异，以及饲养规模和饲养习惯的影响有关，因此各地应根据本地的流行特点，开展有针对性的防治。

通过群间分布分析发现，金毛、贵宾、萨摩耶、哈士奇、阿拉斯加等犬种的阳性数量较多，因此在武汉市，应特别注意这些犬种的CD防控。另外，分析发现患病犬中雄性占比高达71.5%，与张艳雯等[11]调查的南宁地区的CD流行情况相似。这很可能与公犬饲养率高于母犬，以及公犬活动性较母犬高、与其他犬接触更加频繁有关。当然，对于犬瘟热阳性检出率与性别的关系，还需结合其他地区热发病犬的情况进一步明确。调查发现发病犬的年龄分布和CD的流行特点基本一致，因此应特别注意2～4月龄幼犬的预防和治疗。

本研究发现患病犬中，疫苗免疫犬的比例远低于非免疫犬以及未按规定免疫犬，表明疫苗免疫可有效减低CD的发病率。这与其他地区的调查结果相符[6-11]。同时，检测发现疫苗免疫犬就诊时的病毒含量相对较低，这进一步验证了疫苗免疫对于防控该病的效果。但也应考虑到对CD的防控不能完全依赖疫苗，做好易感犬的卫生消毒以及防止其与患病犬的接触等在该病防治中也具有重要意义。当然研制更有效的疫苗也是今后的研究方向。

[1] GREENE C E. Infectious diseases of the dog and cat [M]. 4版. USA：Elsevier，2012：25-42.

[2] 陈溥言. 兽医传染病学[M]. 6版. 北京：中国农业出版社，2015：438-444.

[3] 孔庆波. 犬瘟热免疫预防研究进展[J]. 动物医学进展，2007，28（6）：69-75.

[4] 徐在品，高玉伟，张登祥，等. RT-PCR检测贵州犬瘟热病毒[J]. 畜牧与兽医，2004，9（36）：1-3.

[5] 鲜思美，徐在品，张登祥，等. 犬瘟热病毒的分离[J]. 山地农业生物学报，2005，24（5）：386-389.

[6] 李华坤，孙朋. 徐州地区犬瘟热流行病学调查与分析[J].黑龙江畜牧兽医，2015，10（20）：156-157.

[7] 李钦，许莎琼，朱建国，等. 上海犬瘟热流行状况调查[J].中国兽医杂志，2006，42（7）：71-72.

[8] 黄淑芬，远立国，贾坤，等. 广州地区犬瘟热流行病学调查[J]. 中国兽医杂志，2011，47（4）：53-54.

[9 ]杨学梅，梁晚枫. 延边地区犬瘟热流行情况调查[J]. 黑龙江畜牧兽医，2007（3）：75-76.

[10] 刘靖清. 盐城地区犬瘟热流行病学调查[J]. 现代农业科学，2011（5）：340-341.

[11] 张艳雯，郑一民. 南宁地区犬瘟热流行病学调查[J]. 黑龙江畜牧兽医，2015，6（11）：175-177.

（责任编辑：朱迪国）

Statistical Analysis on Cases of Canine Distemper in an Animal Hospital in Wuhan City of Hubei Province

Li Wenke1，Xue Mingzhu2，Li Dan1，Dong Jun1，Wang Mingyue1，Zhang Jingwei1，Sun Yanian2，Chen Jianguo1，2，Hu Changmin1，2，Zhou Donghai1，2，Ding Mingxing1，2，Zhang Anding1，3，Han Li1，2

（1. College of Veterinary Medicine，Huazhong Agricultural University，Whuhan，Hube 430070；2. Animal hospital，Huazhong Agricultural University，Whuhan，Hube 430070；3. Key Laboratory of Development of Veterinary Diagnostic Products，Ministry of Agriculture，Whuhan，Hube 430070）

In order to recognize the epidemic status of canine distemper（CD）in Wuhan City，taking clinical cases from the animal hospital of Huazhong Agricultural University as the research subjects and using colloidal gold detection and RT-PCR，a total of 2 967 CD cases collected from September 2015 to October 2016 were tested and analyzed. Results showed that 143 of the 2 967 samples were tested positive for CDV，accounting for 4.8%. According to the time distribution，an average positive rate of 4%～5% in most months during the investigation was observed. In particular，the positive rate was much higher（about 9%）in October when temperature changed greatly. According to the group distribution，a high positive rate occurred in some cold-tolerant canines including Golden retriever，Alaskan Malamute，Siberian husky and Samoyed breed，and also in Poodle breed，which is heat resistant but cold intolerant， accounting for 54.5% of all CDV positive cases. Besides，the male dogs were much more susceptible than the female dogs. The ages of dogs infected by CD were mainly 2～4-month-old，which was consistent with its epidemic characteristics. Otherwise，vaccination could obviously help to decrease the morbidity and to lower virus load of theinfected animals. To some degree，this investigation reflected epidemic characteristics of CD in Wuhan City and it would provide important reference for its prevention and control.

Canine distemper（CD）；Canine distemper virus（CDV）；epidemiology；morbidity；Colloidal gold test strip；RT-PCR

S854.4

B

1005-944X（2017）04-0028-04

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.04.008

科技部重点研发专项（2016YFD0501007）；中央高校基本科研业务专项（2014QC002）

韩 丽